PM_2_5_对小鼠肺急性损伤的试验研究_姜智海.docx

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1、 文章编号 ： 1000-8020(2004)03-0264-03 i 仑著 1 PM2 .5 对小鼠肺急性损伤的试验研究 姜智海宋伟民周晓瑜张一帆 复旦大学公共卫生学院 .上海 200032 摘要：目的研究 PM25的急性毒效应 ,探讨免疫损伤和氧化损伤在？ 15 对肺损伤过程中的作用。方法 以昆明小鼠为试验对象，随机分成空白对照组 .生理盐水对照组和低剂量、中剂量、高剂量 PM2 5组共 5组， 除空白对照组外 .其他各组气管滴注染毒 24 小时后，分析支气管肺灌洗液中乳酸脱氢酶 （ LDH )、碱性磷酸酶 (AKP)、 酸性磷酸酶 (ACP)、 白蛋白 （ ALB)、一 氧化氮 (NO)

2、、 一氧化氮合酶 (NOS)、 丙二醛 (MDA)、超氧化物歧化 酶 (SOD)等含 fi 和细胞因子肿瘤坏死因子 (TNF-cO、 白细胞介素 1(IL 一 1)活性 .以及测定肺巨噬细胞的吞噬 功能，并观察肺组织病理学改变。结果空白对照组和生理盐水对照组比较 .各指标未见明显差异；试验组 和生理盐水对照组比较，肺灌洗液中 LDH、 AKP、 ACP、 ALB、 NO、 NOS、 MDA等含 fi 和 TNF-ct、 IL-l 活性有显著性 增高 （ /， SOD 含量和肺巨嗜细胞的吞噬功能明显下降 （ /、 AKP (碱性磷酸酶 ）、 ACP (酸性磷酸酶 ） 、 ALB (白蛋白 ）、

3、NO ( 氧化氮 ）、 MDA (丙二醛） 含量测定和 TNF-a(肿瘤坏死因子 -a)、 IL-l (白细胞介素 -1)活 性测定 . 1.3.3 肺 巨 噬 细 胞 吞 噬 功 能 测 定 用 含 10%小 牛 血 清 的 RPMI1640 液将细胞整浓度调整至 2X 106 Ll 后，取 lml 加入 24 孔板中 .置 37C、 5% 002 培养箱孵育 2h.用生理盐水冲洗 掉未粘附的细胞。每孔加入 lml 0. 1%的中性红溶液，孵育 15min,弃去孔中溶液 .冲洗未被吞噬的中性红，每孔加入 lml 现配的细胞裂解液 （ 1 :1 混合的乙酸和无水乙醇 ）， 静置过夜， 在 55

4、0nm 波长下用酶标仪比色，记录 值。苔 酚篮染色鉴定 细胞存活率 90%以上。 1.3.4 肺灌洗液中 TNF-a 检测于 96 孔板中加入 100W 浓度 为 5X 105 U 的 L 929细胞，再加入 100W 肺灌洗液上清液和 20W浓度为的放线菌素 D.置 37 C、 5% 002 培养箱孵 育 24h。 用 MTT 法测定 L 929 细胞死亡情况 .计算出 L 929细 胞死亡百分比 .间接反应 TNF-a 活性 . 1. 3. 5 肺灌洗液中 IL-1 检测于 96 孔板中加入 100W 浓度 为 IX 107 1 的 QH heJ 小鼠胸腺细胞悬液，再加入肺灌洗液 上清液

5、100W 和 0. lml 浓度为 2Fgkl 的 ConA(刀豆素 A),置 37C、 5% C02 培养箱孵育 60h。 用 MIT 法测定小鼠胸腺细胞 的增殖情况 .用测定的值来间接反应 IL-1 活性。 1.3.6 LDH、 AKP、 ACP、 ALB、 NO、 NOS、 SOD、 MDA 含量测定 测定试剂盒均由南京建成生物制品研宄所提供 .严格按照试 剂盒说明书测定各指标。 1.3.7 肺组织病理学观察取肺，福尔马林缓冲液固定，石 蜡包埋后切片，作 HE(苏木素 -伊红）染色，光镜下观察肺组织 的病理学改变情况。 1.4 数据处理和统计方法 试验数据均以均数士标准差表示，用 SPS

6、S11.0 软件包， 采用单因素方差分析对试验结果进行分析。 2 结果 2 1 PM2 5 对肺组织细胞毒效应 结果见表 1.肺灌洗液中 LDH、 ACP、 AKP、 ALB 各指标，生 理盐水对照组和空白对照组比较未见明显的差别，各剂 fi组 与生理盐水对照组比较存在显著性差异 （ / 2. 834+0. 333(,) 5. 8300. 198u 0. 110 士 0.014 中剂量组 244. 461 15. 231(1 3. 489 0. 322(1 6. 730 0.531(n 0. 154 0.019 高剂觉组 408. 790 士 19. 938(1 4.920+0. 659 9. 0680. 128u 0. 2040. 125(1) 注：（丨 与生理盐水对照组比较 / 中剂罱组 0. 167 0. 03(1 14_ 990.36( 0. 584 0.030 高剂量组 0. 136 士 0.02 16. 970.27(,) 0. 637 士 0.072 注 ： （ I 与生理盐水对照组比较 /与生理盐水对照组比较 / 9. 1450. 968 5. 543 0. 136