生物选修一总结版中学教育高中教育中学教育高中教育.pdf

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1、1.培养基 成分 培养基的化学成分包括 水、无机盐、碳源、氮源、生长因子 碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如 CO2、NaHCO3等无机碳源（自养）；糖类、石油、生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如 N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。只有固氮微生物才能利用 N2。培养基还要满足微生物生长对 pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的 pH调至酸性，培养细菌是需要将 pH调至中性或微碱性，培养厌氧

2、型微生物是则需要提供无氧的条件 分类 按照物理性质 可分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基 按照用途 可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。（如加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌，利用伊红-美蓝培养基鉴别大肠杆菌）人工合成培养基和天然培养基 制备牛肉膏蛋白胨培养基 配方 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂 操作 计算，称量，融化，灭菌，倒平板 称量时，牛肉膏蛋白胨都易吸潮，称量要迅速融化加琼脂时要不断搅拌

3、，防止脂糊底而导致烧杯破裂灭菌时，装有培养基的锥形瓶要用高压蒸汽灭菌法，培养皿要用干热灭菌法平板冷凝后需要倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，防止皿盖上冷凝的水珠落入培养基,造成污染。（微生物培养的时候也需要倒置，另一个原因：由于重力的作用使培养基表面及次层能富集微生物生长所需的营养物质，利于微生物生长。）2 灭菌与消毒 消毒 较为温和的理化方法，仅杀死物体表面或内部的部分有害微生物。确定培养基制作是否合格的方法 将未接种的培养基在恒温箱中保温12 天，无菌落生长，说明培养基的制备包括：煮沸消毒法，巴氏消毒法（对于一些不耐高温的液体）还有化学药剂消毒（如酒精、氯气、石炭酸等）、紫外线消毒

4、法 强烈理化因素，杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。包括：灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。灭菌 接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；（防止 x 的微生物污染培养基）玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。3 纯化微生物的接种方法 平板划线法（适用好氧菌）和稀释涂布平板法（适用好氧菌以及兼性厌氧菌）。平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。操作的第一步以、每次划线之前

5、、划线操作结束时均需要灼烧接种环的目的 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线，以免接种环温度太高，杀死菌种 最后一区不能与第一区相连，划线力度要适中。稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固

6、体培养基的表面，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是：使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种。碳源自养糖类石油生粉饼等有机碳源异养微生物只能利用有机碳源单质碳不能作为碳源氮源能为微生物的代谢提供氮元素的物质如无机氮源蛋白质氨基酸尿素牛肉膏蛋白胨有机氮源等只有固氮微生物才能利用培养基还要满足微生物至酸性培养细菌是需要将调至中性或微碱性培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件分类按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基按照用途可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基选择培养基是指在培养基中加中加入

7、某种指示剂或化学药品配制而成的用以鉴别不同类别的微生物如加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌利用伊红美培养基鉴别大肠杆菌确定培养基制作是否合格的方法人工合成培养基和天然培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基配方牛4 统计菌落数目 测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数。释涂布平板法统计（可以区分活死菌）为了保证结果准确，一般设置 32 个平板，选择菌落数在 30300的平板进行计数，并取平均值。每克样品中的菌落数=（C/V）*M 其中，C 代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（ml），M代表稀释倍数 显微镜直接计数法统计（不能区分活死菌）利用特定的细菌计

8、数板或者血细胞计数板 2 土壤中分解尿素与纤维素的细菌的分离 原理 细菌之所以能分解尿素 CO(NH2)2，是因为他们能合成脲酶,将尿素分解为 CO2,NH3 土壤中的细菌之所以能分解纤维素，是因为他们能合成纤维素酶，纤维素酶是一种复合酶，即 C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。（棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物）选择培养基 以尿素为唯一氮源的选择培养基，富含纤维素的选择培养基 鉴别方法 在培养基中加入酚红指示剂，分解产生氨气，指示剂变红 在培养基中在含有纤维素的培养基中加入刚果红，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素

9、被纤维素酶分解后，刚果红纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。一、发酵 菌种保存 斜面保藏 4 碳源自养糖类石油生粉饼等有机碳源异养微生物只能利用有机碳源单质碳不能作为碳源氮源能为微生物的代谢提供氮元素的物质如无机氮源蛋白质氨基酸尿素牛肉膏蛋白胨有机氮源等只有固氮微生物才能利用培养基还要满足微生物至酸性培养细菌是需要将调至中性或微碱性培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件分类按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基按照用途可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基选择培养基是指在培养基中加中加入某种指示剂或化学药品配制而成的用以鉴别不同类别的微生物如加入青

10、霉素分离得到酵母菌和霉菌利用伊红美培养基鉴别大肠杆菌确定培养基制作是否合格的方法人工合成培养基和天然培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基配方牛1.果酒、果醋 发酵：通过微生物技术的培养来生产大量代谢产物的过程。有氧发酵：醋酸发酵 谷氨酸发酵 无氧发酵：酒精发酵 乳酸发酵 酵母菌是兼性厌氧菌型微生物真菌 酵母菌的生殖方式：出芽生殖(主要)分裂生殖 孢子生殖 在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖。C6H12O66O26CO26H2O 在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。C6H12O62C2H2OH 2CO2 酒精发酵时一般将温度控制在 18-25 在葡萄酒自然发酵的过程中,起主要作用的是附着在葡萄皮

11、表面的野生型酵母菌.在发酵过程中,随着酒精浓度的提高,红葡萄皮的色素也进入发酵液,使葡萄酒呈现深红色.在缺氧、呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。醋酸菌是单细胞细菌(原核生物),代谢类型是异养需氧型,生殖方式为二分裂 当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。2C2H2OH 4O2CH3COOH6H2O 控制发酵条件的作用醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。醋酸菌最适生长温度为 3035，控制好发酵温度，使发酵时间缩短

12、，又减少杂菌污染的机会。实验流程：挑选葡萄冲洗榨汁酒精发酵果酒（醋酸发酵果醋）新鲜葡萄除去枝梗，冲洗以除去灰尘为目的，防止洗去野生酵母菌。酒精检验：重铬酸钾。在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色。先在试管中加入发酵液 2L，再滴入物质的量浓度为 3mol/L 的 H2SO43 滴，振荡混匀，最后滴加常温下饱和的重铬酸钾溶液 3 滴，振荡试管，观察颜色 实验装置 充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的；排气口是在酒精发酵时用来排出二氧化碳碳源自养糖类石油生粉饼等有机碳源异养微生物只能利用有机碳源单质碳不能作为碳源氮源能为微生物的代谢提供氮元素的物质如无机氮源蛋白质氨基酸尿素牛肉膏蛋白胨

13、有机氮源等只有固氮微生物才能利用培养基还要满足微生物至酸性培养细菌是需要将调至中性或微碱性培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件分类按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基按照用途可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基选择培养基是指在培养基中加中加入某种指示剂或化学药品配制而成的用以鉴别不同类别的微生物如加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌利用伊红美培养基鉴别大肠杆菌确定培养基制作是否合格的方法人工合成培养基和天然培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基配方牛的；出料口是用来取样的。排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连接，其目的是防止空气中微生物的污染。开口向下的目的是有利于二氧化碳的排出。使用该

14、装置制酒时，应该关闭充气口；制醋时，应该充气口连接气泵，输入氧/空气。葡萄汁装入发酵瓶后要留有 1/3 的空间，目的时先让酵母菌进行有氧呼吸快速繁殖，耗尽氧气后再进行酒精发酵，防止发酵过程中产生 CO2造成发酵液溢出。2.腐乳 参与微生物 多种微生物参与了豆腐的发酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉。毛霉是一种丝状真菌。代谢类型是异养需氧型。生殖方式是孢子生殖。原理 毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸。毛霉的生长：条件：将豆腐块平放在笼屉内，将笼屉中的控制在 1518，并保持一定的湿度。（温度过低不利于毛霉生长

15、，温度高时菌丝易老化死亡，影响腐乳品质）来源：1.来自空气中的毛霉孢子 2.直接接种优良毛霉菌种 实验流程：让豆腐上长出毛霉加盐腌制加卤汤装瓶密封腌制 实验材料 豆腐的含水量为 70左右，水分过多则腐乳不易成形；过低，不利于毛霉生长。加盐腌制：将长满毛霉的豆腐块分层整齐地摆放在瓶中，同时逐层加盐，随着层数的加高而增加盐量，接近瓶口表面的盐要铺厚一些。用盐腌制时，注意控制盐的用量（毛胚：食盐5：1）：盐的浓度过低，不足以抑制微生物的生长，可能导致豆腐腐败变质；盐的浓度过高会影响腐乳的口味 食盐的作用：1.抑制微生物的生长，避免腐败变质 2.析出水分，是豆腐变硬，在后期制作过程中不易酥烂 3.调味

16、作用，给腐乳以必要的咸味 4.浸提毛酶菌丝上的蛋白酶。卤汤：卤汤、香辛料调味、杀菌防腐。卤汤中酒的含量一般控制在 12%左右。酒的作用：1.防止杂菌污染 2.与有机酸结合形成酯，赋予腐乳风味 3.酒精含量越高，对蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延长；酒精含量过低，蛋白酶的活性高，加快蛋白质的水解，杂菌繁殖快，豆腐易腐败，难以成块。碳源自养糖类石油生粉饼等有机碳源异养微生物只能利用有机碳源单质碳不能作为碳源氮源能为微生物的代谢提供氮元素的物质如无机氮源蛋白质氨基酸尿素牛肉膏蛋白胨有机氮源等只有固氮微生物才能利用培养基还要满足微生物至酸性培养细菌是需要将调至中性或微碱性培养厌氧型微生物是则需要

17、提供无氧的条件分类按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基按照用途可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基选择培养基是指在培养基中加中加入某种指示剂或化学药品配制而成的用以鉴别不同类别的微生物如加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌利用伊红美培养基鉴别大肠杆菌确定培养基制作是否合格的方法人工合成培养基和天然培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基配方牛a b c 防止杂菌污染：用来腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干净后要用沸水消毒。装瓶时，操作要迅速小心。整齐地摆放好豆腐、加入卤汤后，要用胶条将瓶口密封。封瓶时，最好将瓶口通过酒精灯的火焰，防止瓶口被污染。3.泡菜 参与微生物及原理 制作泡菜所用微生物是乳酸菌，其代

18、谢类型是异养厌氧型。在无氧条件下，降糖分解为乳酸。分裂方式是二分裂。反应式为：C6H12O6酶2C3H6O3+能量。含抗生素牛奶不能生产酸奶的原因是抗生素杀死乳酸菌。常见的乳酸菌有乳酸链球菌和乳酸杆菌。乳酸杆菌常用于生产酸奶。发酵温度在18-20，过高其他杂菌活动能力高，过低不利于乳酸菌代谢。实验材料 选用新鲜的蔬菜，若放置时间过长，蔬菜中的亚硝酸盐易被还原为亚硝酸盐。清水与盐的质量比是4：1。盐水要煮沸后冷却，煮沸的作用除去水中的氧气杀灭水中的其他微生物。泡菜坛坛盖沿的水槽内注满水，保证乳酸菌发酵所需要的无氧环境。而且，在发酵过程中要经常补水。发酵中的各类曲线 乳酸菌含量 发酵时间（d）a.

19、有氧气，乳酸菌活动受到抑制 b.乳酸菌含量达到最大，抑制其他菌种活性 c.乳酸持续累积，抑制自身活性 碳源自养糖类石油生粉饼等有机碳源异养微生物只能利用有机碳源单质碳不能作为碳源氮源能为微生物的代谢提供氮元素的物质如无机氮源蛋白质氨基酸尿素牛肉膏蛋白胨有机氮源等只有固氮微生物才能利用培养基还要满足微生物至酸性培养细菌是需要将调至中性或微碱性培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件分类按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基按照用途可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基选择培养基是指在培养基中加中加入某种指示剂或化学药品配制而成的用以鉴别不同类别的微生物如加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌利

20、用伊红美培养基鉴别大肠杆菌确定培养基制作是否合格的方法人工合成培养基和天然培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基配方牛10 一般在腌制 10 天后亚硝酸盐含量开 始降低，故在 10 天之后食用最好 亚硝酸盐含量 发酵时间（d）发酵时间（d）乳酸含量 pH 持续下降 碳源自养糖类石油生粉饼等有机碳源异养微生物只能利用有机碳源单质碳不能作为碳源氮源能为微生物的代谢提供氮元素的物质如无机氮源蛋白质氨基酸尿素牛肉膏蛋白胨有机氮源等只有固氮微生物才能利用培养基还要满足微生物至酸性培养细菌是需要将调至中性或微碱性培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件分类按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基按照用途可

21、将培养基分为选择培养基和鉴定培养基选择培养基是指在培养基中加中加入某种指示剂或化学药品配制而成的用以鉴别不同类别的微生物如加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌利用伊红美培养基鉴别大肠杆菌确定培养基制作是否合格的方法人工合成培养基和天然培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基配方牛 测定亚硝酸盐含量 在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与 N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料，与已知浓度的标准显色液目测比较（比色法），估算泡菜中亚硝酸盐含量。三、植物组织培养 植物组织培养技术 原理 植物细胞的全能性。具有某种生物全套遗传信息的任何一个活细胞，都具有发育成完整个体的能力，即每个生物细胞

22、都具有全能性。但在生物体的生长发育过程中并不表现出来，这是因为在特定的时间和空间条件下，通过基因的选择性表达，构成不同组织和器官。细胞分化使细胞生物体中细胞结构和功能趋向专门化，有利于提高各种生理功能的效率。基本过程 外植体愈伤组织根、芽植物体 离体的植物组织或细胞，在培养了一段时间以后，会通过细胞分裂，形成愈伤组织，愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化，或者叫做去分化。脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。应用 实现优良品种的快速繁殖；培育脱毒

23、作物；制作人工种子；培育作物新品种。菊花的植物组织培养 材料 菊花组织培养一般选择未开花植物的茎上部新萌生的侧枝作材料。一般来说，容易进行无性繁殖的植物容易进行组织培养。选取生长旺盛嫩枝进行组培的是嫩枝生理状态好，容易诱导脱分化和再分化。培养条件 一般将 pH控制在左右，温度控制在 1822，并且每日用日光灯照射 12h。碳源自养糖类石油生粉饼等有机碳源异养微生物只能利用有机碳源单质碳不能作为碳源氮源能为微生物的代谢提供氮元素的物质如无机氮源蛋白质氨基酸尿素牛肉膏蛋白胨有机氮源等只有固氮微生物才能利用培养基还要满足微生物至酸性培养细菌是需要将调至中性或微碱性培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条

24、件分类按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基按照用途可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基选择培养基是指在培养基中加中加入某种指示剂或化学药品配制而成的用以鉴别不同类别的微生物如加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌利用伊红美培养基鉴别大肠杆菌确定培养基制作是否合格的方法人工合成培养基和天然培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基配方牛 培养基 MS 固体培养基：大量元素、微量元素和有机物（包括细胞分裂素与生长素）。（在菊花组织培养中，可以不添加植物激素，原因是菊花茎段组织培养比较容易）。微生物培养基以有机营养为主，MS培养基则需提供大量无机营养。外植体的消毒 外植体：用于离体培养的植物器官或组织片段

25、。菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗 20min 左右。用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为 70%的酒精中摇动 23 次，持续 67s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗。取出后仍用无菌吸水纸吸干外植体表面水分，放入质量分数为%的氯化汞溶液中 12min。取出后，在无菌水中至少清洗 3 次，漂洗消毒液。对外植体进行表面消毒时，就要考虑药剂的消毒效果，又要考虑植物的耐受能力。接种：接种过程中插入外植体时形态学上端朝上，每个锥形瓶接种 78 个外植体。外植体接种与细菌接种相似，操作步骤相同，而且都要求无菌操作。外植体在培养过程中可能会被污染，原因有外

26、植体消毒不彻底；培养基灭菌不彻底；接种中被杂菌污染；锥形瓶密封性差等。移植 栽前应先打开培养瓶的封口膜，让其在培养间生长几日，然后用流水清洗根部培养基。然后先将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中生活一段时间，进行壮苗。最后进行露天栽培 月季的花药培养 材料 完全未开放的花蕾，处于单核靠边期的花粉。细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高 镜检 确定花粉发育时期的最常用的方法是醋酸洋红法。但是，某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色 诱导产生单倍体植株 产生花粉植株的两种途径通过花药培养产生花粉植株（即单倍体植株）一般有两种碳源自养糖类

27、石油生粉饼等有机碳源异养微生物只能利用有机碳源单质碳不能作为碳源氮源能为微生物的代谢提供氮元素的物质如无机氮源蛋白质氨基酸尿素牛肉膏蛋白胨有机氮源等只有固氮微生物才能利用培养基还要满足微生物至酸性培养细菌是需要将调至中性或微碱性培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件分类按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基按照用途可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基选择培养基是指在培养基中加中加入某种指示剂或化学药品配制而成的用以鉴别不同类别的微生物如加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌利用伊红美培养基鉴别大肠杆菌确定培养基制作是否合格的方法人工合成培养基和天然培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基配方牛途径，

28、一种是花粉通过胚状体阶段发育为植物，另一种是花粉在诱导培养基上先形成愈伤组织，再将其诱导分化成植株。这两种途径之间并没有绝对的界限，主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比。培养条件 培养温度控制在 25左右,不需要光照.幼小植株形成后才需要光照.一般经过 2030 天培养后,会发现花药开裂,长出愈伤组织或形成胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。比较根尖分生组织和愈伤组织的异同 生长素和细胞分裂素等植物激素使用的先后顺序

29、、用量的比例影响 组织类型 细胞来源 细胞形态 细胞结构 细胞排列 细胞去向 根尖 分生组织 受精卵 正方形 无液泡 紧密 分化成多种 细胞组织 愈伤组织 高度分化细胞 无定形 高度液泡化 疏松 再分化成新个体 相同点 都通过有丝分裂进行细胞增殖 使用顺序 实验结果 先生长素，后细胞分裂素 有利于分裂但不分化 先细胞分裂素，后生长素 细胞既分裂也分化 同时使用 分化频率提高 生长素 细胞分裂素比值与结果 比值高时 促根分化，抑芽形成 比值低时 促芽分化，抑根形成 比值适中 促进愈伤组织生长 碳源自养糖类石油生粉饼等有机碳源异养微生物只能利用有机碳源单质碳不能作为碳源氮源能为微生物的代谢提供氮元

30、素的物质如无机氮源蛋白质氨基酸尿素牛肉膏蛋白胨有机氮源等只有固氮微生物才能利用培养基还要满足微生物至酸性培养细菌是需要将调至中性或微碱性培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件分类按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基按照用途可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基选择培养基是指在培养基中加中加入某种指示剂或化学药品配制而成的用以鉴别不同类别的微生物如加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌利用伊红美培养基鉴别大肠杆菌确定培养基制作是否合格的方法人工合成培养基和天然培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基配方牛二、植物有效成分的提取 植物芳香油的提取 芳香油的提取方法：蒸馏、压榨、萃取。芳香油的性质：挥发性

31、强，成分复杂，以萜类化合物及其衍生物为主。水蒸气蒸馏法 原理：水蒸汽可将挥发性较强的芳香油携带出来形成油水混合物，冷却后水油分层。方法：水中蒸馏：原料放在沸水中加热蒸馏。水上蒸馏：原料隔放在沸水上加热蒸馏。水汽蒸馏：利用外来高温水蒸气加热蒸馏。不足：有些原料不适宜于水中蒸馏，如柑橘、柠檬等易焦糊，有效成分容易水解。蒸馏装置 铁架台、酒精灯、石棉网、蒸馏瓶、橡胶塞、蒸馏头、温度计、直型冷凝管、接液管、锥形瓶，橡皮管。所有仪器必须事先干燥，保证无水安装仪器一般都按照自下而上、从左到右的顺序。拆卸仪器的顺序与安装时相反。具体安装顺序和方法如下。（1）固定热源酒精灯。（2）固定蒸馏瓶，并且保持蒸馏瓶轴

32、心与铁架台的水平面垂直。（3）安装蒸馏头，使蒸馏头的横截面与铁架台平行。（4）连接冷凝管。保证上端出水口向上，通过橡皮管与水池相连；下端进水口向下，通过橡皮管与水龙头相连。（5）连接接液管（或称尾接管）。（6）将接收瓶瓶口对准尾接管的出口。常压蒸馏一般用锥形瓶而不用烧杯作接受器，接收瓶应在实验前称重，并做好记录。（7）将温度计固定在蒸馏头上，使温度计水银球的上限与蒸馏头侧管的下限处在同一水平线上。碳源自养糖类石油生粉饼等有机碳源异养微生物只能利用有机碳源单质碳不能作为碳源氮源能为微生物的代谢提供氮元素的物质如无机氮源蛋白质氨基酸尿素牛肉膏蛋白胨有机氮源等只有固氮微生物才能利用培养基还要满足微生

33、物至酸性培养细菌是需要将调至中性或微碱性培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件分类按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基按照用途可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基选择培养基是指在培养基中加中加入某种指示剂或化学药品配制而成的用以鉴别不同类别的微生物如加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌利用伊红美培养基鉴别大肠杆菌确定培养基制作是否合格的方法人工合成培养基和天然培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基配方牛（8）蒸馏装置安装完毕后，在蒸馏瓶中加几粒沸石，防止液体过度沸腾。在整个蒸馏过程中，应保证温度计的水银球上常有因冷凝作用而形成的液滴。控制蒸馏的时间和速度，通常以每秒 12滴为宜。蒸馏完毕，应先

34、撤出热源，然后停止通水，最后拆卸蒸馏装置。压榨法 原理：通过机械压力将芳香油从果皮中分离出来 方法:石灰水浸泡漂洗压榨、过滤、静置再次过滤 不足：分离困难，出油率低 萃取法 原理：芳香油易溶于有机溶剂，溶剂挥发后得到芳香油。如石油醚、酒精、乙醚等。方法：原料浸泡在溶剂中得到浸泡液有机溶剂挥发芳香油。不足：有机溶剂中的杂质影响芳香油的品质 玫瑰精油的提取 试剂目的 mL氯化钠溶液：促使油水混合物（乳浊液）中油和水的分离。无水硫酸钠：吸收油层中的水分。实验步骤 采集玫瑰花：采集盛花期（5 月中上旬）的玫瑰花，清水清洗沥干。装入蒸馏原料：称取 50g 玫瑰花放入蒸馏瓶，添加 200mL蒸馏水。4：1

35、 安装蒸馏装置：按照从左向右、自下到上次序安装水蒸气蒸馏装置。加热蒸馏：控制蒸馏时间和速度（12 滴/秒），获得乳白色乳浊液；拆卸装置。分离油层：向乳浊液加入 NaCl 溶液后，利用分液漏斗分离出上面的油层。除去水分：向油层中加入无水硫酸钠，24h 后过滤，得到玫瑰油。注意事项：蒸馏时间不能过短，温度不能过高。碳源自养糖类石油生粉饼等有机碳源异养微生物只能利用有机碳源单质碳不能作为碳源氮源能为微生物的代谢提供氮元素的物质如无机氮源蛋白质氨基酸尿素牛肉膏蛋白胨有机氮源等只有固氮微生物才能利用培养基还要满足微生物至酸性培养细菌是需要将调至中性或微碱性培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件分类按照物

36、理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基按照用途可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基选择培养基是指在培养基中加中加入某种指示剂或化学药品配制而成的用以鉴别不同类别的微生物如加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌利用伊红美培养基鉴别大肠杆菌确定培养基制作是否合格的方法人工合成培养基和天然培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基配方牛 橘皮精油的提取 橘皮精油的主要成分：柠檬烯，主要分布在橘皮中。试剂目的 石灰水：防止压榨时滑脱，提高出油率，降低压榨液黏稠度，过滤不堵塞筛眼。小苏打、硫酸钠：促进油和水的分离（用量分别为橘皮质量的和 5）。实验步骤 橘皮的处理：将新鲜橘皮用清水清洗沥干。石灰水浸泡：用 78石灰水

37、浸泡橘皮 24h。清水漂洗：浸泡好的橘皮用流水彻底漂洗干净，沥干。粉碎和压榨：将橘皮粉碎，加入小苏打和硫酸钠后，用压榨机压榨得到压榨液。过滤压榨液：用布袋过滤，滤液再高速离心处理，分离出上层橘皮油。静置处理：将橘皮油在 510冰箱中静置 57d，分离出上层澄清橘皮油。再次过滤：将下层橘皮油用滤纸过滤，滤液与上层橘皮油合并，得到橘皮精油。静置处理目的：除去果蜡和水分。胡萝卜素的提取 胡萝卜素性质：橘黄色结晶，化不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等有机溶剂。依据碳碳双键的数目划分为、三类。其中最主要的组成成分为-胡萝卜素。提取 胡萝卜素的方法主要有三种：从植物中提取从大面积养殖的岩藻中获得利用微生

38、物的发酵生产 萃取剂的选择（影响萃取的主要因素）水溶性的：乙醇、丙酮 碳源自养糖类石油生粉饼等有机碳源异养微生物只能利用有机碳源单质碳不能作为碳源氮源能为微生物的代谢提供氮元素的物质如无机氮源蛋白质氨基酸尿素牛肉膏蛋白胨有机氮源等只有固氮微生物才能利用培养基还要满足微生物至酸性培养细菌是需要将调至中性或微碱性培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件分类按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基按照用途可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基选择培养基是指在培养基中加中加入某种指示剂或化学药品配制而成的用以鉴别不同类别的微生物如加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌利用伊红美培养基鉴别大肠杆菌确定培

39、养基制作是否合格的方法人工合成培养基和天然培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基配方牛水不溶性的：石油醚、乙酸乙酯、乙醚、苯、四氯化碳等（石油醚沸点最高最合适）选择：具有较高的沸点，能够充分溶解胡萝卜素，并且不与水混溶。实验步骤 粉碎干燥萃取过滤浓缩 粉碎：使原料与有机溶剂充分接触，增大溶解度。干燥：脱水温度太高，干燥时间太长会导致胡萝卜素分解。装置的设计 萃取过程应该避免明火加热，采用水浴加热，这是因为有机溶剂都是易燃物，直接使用明火加热容易引起燃烧爆炸。为了防止加热时有机溶剂挥发，还要在加热瓶口安装回流冷凝装置。萃取液的浓缩可直接使用蒸馏装置。在浓缩之前，还要进行过滤，除去萃取液中的不溶物。鉴定：纸

40、层析法 滤纸：18 30 基线：滤纸下端距底边 2 处做一基线，在基线上取 A、B、C、D四点。点样：用最细的注射器针头（毛细吸管）吸取样品进行点样。点样应该快速细致，在基线上形成直径左右的圆点，每次点样后，可用吹风机将溶剂吹干，注意保持滤纸干燥。等滤纸上的点样液自然挥发干后，将滤纸卷成圆筒状，至于装有深的石油醚的密封玻璃瓶中。等各种色素完全分开后，观察标准样品中位于展开剂前沿的胡萝卜素层析带。三、酶、DNA、细胞固化 酶 果胶酶 果胶是植物细胞壁以及胞间层的主要成分之一，不溶于水 果胶酶不特指某一种，是一类酶的统称，包括多聚半乳糖醛酸酶，果胶分解酶和果胶酯酶 果胶酶的主要作用是分解果胶变成可

41、溶性的半乳糖醛酸，从而使果汁变得澄清，提升水果的出汁率 探究果胶酶活性 碳源自养糖类石油生粉饼等有机碳源异养微生物只能利用有机碳源单质碳不能作为碳源氮源能为微生物的代谢提供氮元素的物质如无机氮源蛋白质氨基酸尿素牛肉膏蛋白胨有机氮源等只有固氮微生物才能利用培养基还要满足微生物至酸性培养细菌是需要将调至中性或微碱性培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件分类按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基按照用途可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基选择培养基是指在培养基中加中加入某种指示剂或化学药品配制而成的用以鉴别不同类别的微生物如加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌利用伊红美培养基鉴别大肠杆菌确定

42、培养基制作是否合格的方法人工合成培养基和天然培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基配方牛因素：T、pH、酶抑制剂 单一变量原则 分别预热、预 pH处理，再混合 最适用量：增加酶用量，直至果汁量不再 增加。最适用量与 T、pH有关。加酶洗衣粉 包含的酶制剂 蛋白酶：蛋白质氨基酸、多肽 脂肪酶：脂肪脂肪酸、甘油 淀粉酶：淀粉麦芽糖、葡萄糖 纤维素酶：使纤维素的结构变蓬松，清除棉麻深处的污垢 高果糖浆生产 葡萄糖异构酶将葡萄糖转化为果糖 固定化酶与固定化细胞 方法 包埋法、化学结合法、物理吸附法 酶适用物理吸附法、化学结合法：小分子酶易漏出 细胞适用包埋法：细胞个大 包埋法载体 明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤

43、维素 固定化酵母细胞 酵母细胞的活化配置 CaCl2溶液配置海藻酸钠溶液混合酵母细胞与海藻酸钠溶液固定化酵母细胞冲洗、发酵 活化 蒸馏水干酵母搅拌放置一小时 CaCl2溶液的作用是使胶体聚沉，形成稳定的凝胶珠 固定化酵母细胞：注射器恒速滴加到 CaCl2溶液中 海藻酸钠溶解 小火间断加热 碳源自养糖类石油生粉饼等有机碳源异养微生物只能利用有机碳源单质碳不能作为碳源氮源能为微生物的代谢提供氮元素的物质如无机氮源蛋白质氨基酸尿素牛肉膏蛋白胨有机氮源等只有固氮微生物才能利用培养基还要满足微生物至酸性培养细菌是需要将调至中性或微碱性培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件分类按照物理性质可分为液体培养基

44、半固体培养基和固体培养基按照用途可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基选择培养基是指在培养基中加中加入某种指示剂或化学药品配制而成的用以鉴别不同类别的微生物如加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌利用伊红美培养基鉴别大肠杆菌确定培养基制作是否合格的方法人工合成培养基和天然培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基配方牛 DNA粗提 溶解性原理 在 L 时溶解度最小，可使 DNA 析出；较高浓度（2mol/L）可使 DNA 溶解；DNA 不溶于酒精。（特别是 95冷却酒精），但细胞中蛋白质可溶于酒精。因此，通过反复溶解与析出 DNA，就能够除去与 DNA 溶解度不同的多种杂质。预冷的乙醇溶液 具有以下优点。一是抑制核酸

45、水解酶活性，防止 DNA 降解；二是降低分子运动，易于形成沉淀析出；三是低温有利于增加 DNA 分子柔韧性，减少断裂。提取 DNA 还可以利用 DNA 对酶、高温和洗涤剂的耐受性原理 DNA 的变性是指 DNA 分子在高温下解螺旋，其温度在 80以上，如在 PCR技术中 DNA变性温度在 95。洗涤剂在提取 DNA 中的作用洗涤剂将细胞膜上的蛋白质，从而瓦解细胞膜 实验材料 鸡血细胞 一是因为鸡血细胞核的 DNA 含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破 鉴定 在沸水浴条件下，DNA 遇二苯胺呈现蓝色。注意事项：在鸡血中加入柠檬酸钠防止凝固；鸡血静置或离心以提高细胞悬液浓度；使用塑料烧杯；

46、使用尼龙布过滤；玻棒沿同一方向搅拌；玻棒搅拌要缓慢（细胞破裂快速搅拌）；玻棒不要碰到烧杯壁；二苯胺试剂要现用现配等。PCR 80-100 高温解旋 DNA，双链完全分开 利用高温 DNA 聚合酶 添加 20-30 的 DNA 引物 若有一个模板，n 次后得到 2n个 DNA 分子，若有 N个模板，n 次后得到 N*2n个 DNA 分子 碳源自养糖类石油生粉饼等有机碳源异养微生物只能利用有机碳源单质碳不能作为碳源氮源能为微生物的代谢提供氮元素的物质如无机氮源蛋白质氨基酸尿素牛肉膏蛋白胨有机氮源等只有固氮微生物才能利用培养基还要满足微生物至酸性培养细菌是需要将调至中性或微碱性培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件分类按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基按照用途可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基选择培养基是指在培养基中加中加入某种指示剂或化学药品配制而成的用以鉴别不同类别的微生物如加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌利用伊红美培养基鉴别大肠杆菌确定培养基制作是否合格的方法人工合成培养基和天然培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基配方牛