动物源性食品中喹诺酮类物质的快速检测,胶体金免疫层析法(KJ2023年06).docx

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1、编号：时间：2023 年 x 月 x 日学无止境页码：第1页 共10页动物源性食品中喹诺酮类物质的快速检测,胶体金免疫层析法KJ202306通过整理的动物源性食品中喹诺酮类物质的快速检测,胶体金免疫层析法KJ202306 相关文档，渴望对大家有所扶植，感谢观看！附件6动物源性食品中喹诺酮类物质的快速检测胶体金免疫层析法(KJ202306)1 范围本方法规定了动物源性食品中喹诺酮类物质的胶体金免疫层析快速检测方法。本方法适用于生乳、巴氏杀菌乳、灭菌乳、猪肉、猪肝、猪肾中洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、达氟沙星、二氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、氟甲喹、噁喹酸残留的快速测定。2 原理 本方法承

2、受竞争抑制免疫层析原理。样品中的喹诺酮类物质与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和检测线T 线 上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变更，通过检测线与限制线C 线颜色深浅比较，对样品中喹诺酮类物质进展定性判定。3 试剂和材料 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的二级水。第1页共10页编号：时间：2023 年 x 月 x 日学无止境页码：第2页 共10页3.1 试剂3.1.1 乙腈。3.1.2 甲酸。3.1.3 分散固相萃取剂I：分别称取硫酸镁 18 g、醋酸钠 4.5 g 放于研钵中研碎。3.1.4 分散固相萃取剂 II：分别称取硫酸镁 27 g、N-

3、丙基乙二胺PSA4.5 g 放于研钵中研碎。3.1.5 甲酸-乙腈溶液：98 mL 乙腈中参加 2 mL 甲酸，混匀。3.1.6 甲醇。3.1.7 稀释液：脱脂奶粉水110。3.2 参考物质喹诺酮类参考物质的中文名称、英文名称、 CAS 登录号、分子式、相对分子量见表 1，纯度99%。表 1 喹诺酮类参考物质的中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子量序号中文名称英文名称CAS 登录号分子第2页共10页编号：时间：2023 年 x 月 x 日学无止境页码：第3页 共10页式 相对分子量 1 洛美沙星 Lomefloxacin 98079-51-7C17H19F2N3O3 351.3

4、5 2 培氟沙星 Pefloxacin 70458-92-3C17H20FN3O3 333.36 3 氧氟沙星 Ofloxacin 82419-36-1C18H20FN3O4 361.37 4 诺氟沙星 Norfloxacin 70458-96-7 C16H18FN3O3 319.33 5 达 氟 沙 星 Danofloxacin 112398-08-0 C19H20FN3O3 357.38 6 二氟沙星 Difloxacin5522-39-4C28H33N3F2449.587恩诺沙星Enrofloxacin93106-60-6C19H22FN3O3359.168环丙沙星Ciprofloxac

5、in85721-33-1C17H18FN3O3331.139氟甲喹Flumequine42835-25-6C14H12FNO3261.2510噁喹酸Oxolinic Acid14698-29-4C13H11NO5261.23注：或等同可溯源物质。3.3 标准溶液的配制 3.3.1 喹诺酮类物质标准储藏液 1 mg/mL：分别周密称取喹诺酮类参考物质3.2适量，置于 50 mL烧杯中，参加适量甲醇3.1.6超声溶解后，用甲醇转入10 mL 容量瓶中，定容至刻度，摇匀，配制成浓度为 1 mg/mL 的喹诺酮标准储藏液。-20避光保存，有效期 6 个月。3.3.2 喹诺酮类物质标准中间液1 g/mL

6、：分别吸取喹诺酮类标准储藏液1 mg/mL3.3.1100 L 于 100 mL 容量瓶中，用甲醇3.1.6稀释至刻度，摇匀，配制成浓度为 1 g/mL 的喹诺酮类标准第3页共10页编号：时间：2023 年 x 月 x 日学无止境页码：第4页 共10页中间液。3.4 材料3.4.1 金标微孔含胶体金标记的特异性抗体。3.4.2 试剂条或检测卡。4 仪器和设备4.1 移液器：100 L、200 L 和 1 mL。4.2 涡旋混合器。4.3 离心机：转速4000 r/min。4.4 电子天平：感量为 0.01 g。4.5 孵育器：可调整时间、温度，控温精度1。4.6 读数仪。4.7 氮吹仪。4.8

7、 环境条件：温度 1535，湿度80%承受孵育器与读第4页共10页编号：时间：2023 年 x 月 x 日学无止境页码：第5页 共10页数仪时可不要求环境温度。5 分析步骤5.1 试样制备液体乳干脆用于测定，猪肉、猪肝、猪肾用组织捣碎机等搅碎后备用。5.2 试样的提取 5.2.1 生乳、巴氏杀菌乳、灭菌乳 分别吸取同等体积的液体乳样品与稀释液混合后为待测液。5.2.2 猪肉、猪肝、猪肾准确称取 2.50.01 g 均质后的组织样品于 15 mL 离心管中，参加 5 mL 甲酸-乙腈溶液3.1.5，涡旋混合 1 min，振荡 5 min，4000 r/min 离心 5 min。将上清液 2 mL

8、 转入10 mL 离心管中，分别参加 0.6 g 分散固相萃取剂 I(3.1.3)漩涡混合 1 min、再参加 0.6 g 分散固相萃取剂 II(3.1.4)后漩涡混合 1 min，静置分层后取 1 mL 于 10 mL 离心管中，于氮吹仪 60吹干后用 1 mL 样品稀释液溶解作为待测液。5.3 测定步骤 5.3.1 检测卡测定步骤 5.3.1.1 将检测卡平放入孵育器中。留神撕开检测卡的薄膜至指示线处，避开提起检测卡和海绵。5.3.1.2 用移液器取待测液5.2300 L，避开产生泡沫和气泡。第5页共10页编号：时间：2023 年 x 月 x 日学无止境页码：第6页 共10页竖直缓慢的滴加

9、至检测卡两侧随便一侧的凹槽中，将粘箔重粘好。5.3.1.3 盖上孵育器的盖子，孵育器上的计时器自动起先计时，红灯闪耀，孵育 3 min。5.3.1.4 取出检测卡，不要挤压样品槽，放于读数仪中，读数前保持样品槽一端朝下直到在读数仪上读取结果，或从孵育器上取出后干脆目视法进展结果判定。5.3.2 试剂条与金标微孔测定步骤吸取 300 L 待测液5.2 于金标微孔3.4.1中，抽吸 510 次使混合匀整，将试剂条3.4.2 吸水海绵端垂直向下插入金标微孔中，孵育 58 min，从微孔中取出试剂条，进展结果判定。注：试剂条或检测卡具体检测步骤可参考相应的说明书操作。5.4 质控试验每批样品应同时进展

10、空白试验和加标质控试验。5.4.1 空白试验称取空白试样，依据 5.2 和 5.3 步骤与样品同法操作。第6页共10页编号：时间：2023 年 x 月 x 日学无止境页码：第7页 共10页5.4.2 加标质控试验准确称取空白试样准确至0.01 g置于具塞离心管中，参加确定体积的诺氟沙星标准中间液，使诺氟沙星终浓度为 6 g/kg，依据 5.2 和 5.3 步骤与样品同法操作。6 结果判定 6.1 读数仪测定法按读数仪说明书要求操作干脆读取并进展结果判定， 6.2 目视法通过比照限制线C 线和检测线T 线的颜色深浅进展结果判定。目视判定示意图见图 1。6.2.1 无效 限制线C 线不显色，说明不

11、正确操作或试剂条/ 检测卡无效。6.2.2 阴性 检测线T 线颜色比限制线C 线颜色深或者检测线T 线颜色与限制线C 线颜色相当，说明样品中喹诺酮类低于方法检测限，判定为阴性。6.2.3 阳性 检测线T 线不显色或检测线T 线颜色比限制线C 线颜色浅，说明样品中喹诺酮类的含量高于方法检测限，判定为阳性。第7页共10页编号：时间：2023 年 x 月 x 日学无止境页码：第8页 共10页6.3 质控试验要求空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。图 1 目视判定示意图7 结论当检测结果为阳性时，应对结果进展确证。8 性能指标8.1 检测限生乳、巴氏杀菌乳、灭菌乳、猪肉、猪肝、猪肾

12、中洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、达氟沙星、二氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、氟甲喹、噁喹酸为 3 g/kg。8.2 灵敏度灵敏度应99%。8.3 特异性特异性应95%。8.4 假阴性率假阴性率应1%。8.5 假阳性率假阳性率应5%。注：性能指标计算方法见附录A。9 其他本方法所述试剂、试剂盒信息及操作步骤是为给方法运第8页共10页编号：时间：2023 年 x 月 x 日学无止境页码：第9页 共10页用者供给便利，在运用本方法时不做限定。方法运用者在运用替代试剂、试剂盒或操作步骤前，须对其进展考察，应满足本方法规定的各项性能指标。本方法参比标准为 GB/T 21312-2023 动物源性食

13、品中 14 种喹诺酮药物残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法。附录A 定性方法性能指标计算方法 表A.1 性能指标计算表 样品状况a 检测结果b 总数 阳性 阴性 阳性 N11 N12 N1.=N11+N12 阴性 N21 N22 N2.=N21+N22 总 数 N.1=N11+N12 N.2=N21+N22 N=N1.+N2.或 N.1+N.2 显著性差异2 c2=|N12-N21|-12/N12+N21，自由度df=1灵敏度p+，% p+=N11/N1.特异性p-，%p-=N22/N2.假阴性率pf-，% pf-=N12/N1.=100-灵敏度假阳性率pf+，% pf+=N21/N2.=1

14、00-特异性相对准确度，%cN11+N22/N1.+N2.注：a 由参比方法检验得到的结果或者样品中实际的公议值结果；b 由待确认方法检验得到的结果。灵敏度的计算运用确认后的结果。N：任何特定单元的结果数，第一个下标指行，其次个下标指列。例如：N11 表示第一行，第一列，N1.表示全部的第一行，N.2 表示全部的其次列；N12 表示第一行，其次列。第9页共10页编号：时间：2023 年 x 月 x 日学无止境页码：第10页 共10页C 为方法的检测结果相对准确性的结果，与一样性分析和浓度检测趋势状况综合评价。本方法负责起草单位：黑龙江省质量监视检测探讨院。验证单位：国家农林副产品质量监视检验中心、国家乳制品质量监视检验中心、海南省药品检验所。主要起草人：佟晓芳，杨光，赵平，陈薇薇，李春娟，姜金斗， 王玉芝，陈坚。第10页共10页