个体化医学检测质量保证指南.pptx

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1、个个体化体化医医学学检检测测质质量量保保证证指指南南适用范适用范围围本指南适用于通过分析基基因因及基基因因结结 构构改改变变、基基因因表表达达及代代谢谢变变化化，对患 者疾病进行预预测测、诊诊断断、治治疗疗决决策策、监测监测和预预后后的临床检测。质量 保证标标本采集、本采集、运送和保运送和保 存（分析存（分析 前）前）室内室内质质控控（分析中）（分析中）室室间质评间质评（分析中）（分析中）结结果果报报告告 解解释释及及临临 床床应应用用（分析后）（分析后）涉及临床医生 标本采集环节 和实验室涉及实验室人 员和临床医生涉及实验室涉及实验室分分析析前前质质量量保保证证申申请单应请单应包括的内容包括

2、的内容1.患者的惟一标识：患者的姓名、出生日期、性别、民族、住院号、就诊科室、床号，有条件的医院尽量使用条码标 志或其他唯一标示；2.样本的类型：血液、其他体液、活检组织、手术切除样 本等；3.所申请的检验项目；4.患者的相关临床资料，包括初步诊断结果；5.样本采集日期和采集时间；6.实验室接受样本的日期和时间；7.与检验有关的既往史等；8.样本是否合格：有无癌变组织、血液样本有无溶血、容 器有无破损等。9.医生的签名。患者的正确患者的正确识别识别在对患者进行取血或采样前，检验人员需要首先确 定患者的身份。在对患者进行确认时，应准确核实患者的姓名、性 别、住院号等信息。对于不能说话的或意识不清

3、醒 的患者应由相关陪同人员、医生或护士加以确认。如果有腕带，患者的腕带上通常附有上述信息，采 血或取其他临床样本时检验人员应先确认这些信息。样样本的本的采集、运送和保存采集、运送和保存（1）1.基本原则（1）应按照CFDA批准的检测试剂说明书制订的标准操作程序（SOP）进行。如为实验室自制试剂，则实验室应当建立样本的采集、运送和保存的SOP，并严格执行。（2）样本采集和运送容器：密闭的、一次性、无菌、无核酸酶及其 他扩增抑制物。血液和骨髓穿刺样本通常需要先抗凝，抗凝剂一般应 EDTA和枸橼酸盐，避免使用肝素。如检测的靶核酸为胞内RNA，试 管内应含有一定量的RNA稳定剂。（3）实验室应向样本采

4、集人员明确以下信息（如有可能体现在申 请单中），具体包括：采集时间；采集部位；样本类型；采集量；采 样质量的要求；拒收样本的类型。（4）样本运送和保存中的生物安全。样样本的本的采集、运送和保存采集、运送和保存（2）（5）样本运送温度和时间的要求。DNA检测样本，可室温下运送，建议8h内送至实验室。靶核酸为RNA时，10 min可室温运送，如所需 运送时间较长，则应将样本置于冰上，必须保证样本与冰屑充分接触，且冰屑应达到样本的高度，建议采集后4h内送到。冰冻组织样本最好 保证其在运送过程中不发生融化，石蜡包埋组织则可在室温下运送。（6）样本保存温度和时间的要求。用于DNA检测时，样本可在28 保

5、存72h。用于RNA检测时，样本一旦采集送达实验室后，如不能立 即提取，应冻存于-70。临床体液样本的长期保存（2周）在保存 于-70。已提取纯化的RNA最好在乙醇沉淀后保存在-70。如果样 本中含有红细胞，应尽可能去除红细胞后，再进行冻存。石蜡包埋组 织则可在2-8长期保存。常见标本的类型血液血液分泌物分泌物胸腹水胸腹水痰痰粪粪便便尿尿脑脑脊液脊液胚胎胚胎样样本本骨髓穿刺样本/细针穿刺细胞组织组织（新（新鲜组鲜组织织、活、活检检组织组织、手、手术术切切除除样样本本、甲醛固定的石蜡包埋组 织（FFPET）临临床分子床分子诊诊断断样样本的接收本的接收样本拒收标准：容器破损、量不够、时间不符 合要

6、求、重度溶血、重度脂血、重度黄胆、无 靶细胞？用于肿瘤组织基因突变检测的样本，在分子检 测须由病理医师进行镜下肿瘤细胞评估，然后 富集肿瘤肿瘤细胞用于核酸提取。肿瘤细胞所 占比例应达到所用扩增检测方法的要求纯纯化后化后的的DNA和和RNA的的保保存存DNA：如果纯化后的DNA无DNA酶的污染，则可 在TE缓冲液中室温保存26周；2-8保存一年；-20保存7年；-70保存7年以上。怀疑可能存在 DNA酶污染的样本，则保存在-20以下。RNA：RNA易于降解，在-20条件下，RNA酶 也可能发挥作用。因此，纯化后的RNA应当经过 乙醇沉淀，并在-70以下保存。分析中的分析中的质质量保量保证证临临床

7、床基基因因扩扩增增检检验验实实验验室室设计设计产产物物分分析析区区空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向缓缓冲冲间间缓缓冲冲间间缓缓冲冲间间专专用走用走廊廊工工作流作流向向扩扩增区增区标标本本制制备备区区试试剂剂准准备备区区“各区独立各区独立注意注意风风向向因地制宜因地制宜方便工作方便工作”实验室应根据自己的检验项目、所采用的检测技术平台和工作量来决定分区的多 少及各区域的空间大小。至少具体需要多少个区，同样是“个体化”的，以“工作有序、互不干扰、防 止污染、报告及时“作为基本原则。缓冲间的功能是“控制空气的流向”。生物安全柜可考虑“A2”。产产前前筛筛查查与与产产前

8、前诊诊断断（全基因全基因组组低拷低拷贝测贝测序技序技术术）缓缓冲冲间间测测序区序区空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向缓缓冲冲间间缓缓冲冲间间缓缓冲冲间间专专用走廊用走廊工作流向工作流向文文库库扩扩增增与与检测检测区区标标 本本与与 文文库库制制备备区区试剂试剂准准备备区区标标本与本与文文库库制制备备区区文文库扩库扩增增与与检检测测区区测测序区序区植入植入前前胚胚胎胎遗遗传传学学诊诊断断(全基因全基因组组低拷低拷贝测贝测序序)缓缓冲冲间间测测序区序区空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向缓缓冲冲间间缓缓冲冲间间缓缓冲冲间间专专用用走廊走廊文

9、文库检测库检测区区WGA制制备备区区试剂试剂准准备备区区缓缓冲冲间间缓缓冲冲间间空气流向空气流向空气流向空气流向电电泳区泳区扩扩增一区增一区遗传遗传病病诊诊断断+肿肿瘤瘤诊诊断断与治与治疗疗（杂杂交交捕捕获测获测序序技技术术+Sanger+Sanger测测序序验证验证）DNA打断区打断区缓缓冲冲间间缓缓冲冲间间杂杂交捕交捕获获区区（扩扩增一区增一区）空气空气流向流向空气空气流向流向空气空气流向流向空气空气流向流向缓缓冲冲间间缓缓冲冲间间缓缓冲冲间间专专用用走廊走廊文文库扩库扩增区增区（扩扩增二区增二区）标标本本与与文文库库制制备备区区试剂试剂准准备备区区文文库检测库检测区区测测序序区区电电泳泳

10、区区空气空气流向流向空气空气流向流向空气空气流向流向空气空气流向流向缓缓冲冲间间缓缓冲冲间间缓缓冲冲间间缓缓冲冲间间杂杂交捕交捕获获区区（扩扩增一区）增一区）空气空气流向流向空气空气流向流向空气空气流向流向空气空气流向流向缓缓冲冲间间缓缓冲冲间间缓缓冲冲间间专专用用走廊走廊文文库扩库扩增区增区（扩扩增二区）增二区）标标本与本与文文库库制制备备区区试剂试剂准准备备区区文文库检测库检测区区测测序区序区电电泳区泳区空气空气流向流向空气空气流向流向空气空气流向流向空气空气流向流向缓缓冲冲间间缓缓冲冲间间缓缓冲冲间间实验室仪器设备及管理加加样样器器：维护维护、校准、校准扩扩增增仪仪：维护维护、校准、校准

11、恒温干浴恒温干浴仪仪或水浴或水浴箱箱：维护维护、校准、校准离心机离心机：维护维护生物安全柜：生物安全柜：维护维护冰箱：冰箱：维护维护基基因因扩扩增增仪仪器器设设备备的的质质控控仪仪器器设备设备质质控控方法方法频频度度失控失控标标准准扩增仪仪器校验实验当仪器移动时实验失败热电偶监测温度每月一次如靶温度或温度 差异超出允许范 围扩增功能检测每 4 个月一次待测孔未出现扩 增，检测温度程序打印每次测定时打印程序不对加样器校准每年 2 次不符合要求水浴箱温度检测每次实验不符合要求酶标仪预防性维护 及校准每年 2 次不符合要求理理想想的的试试剂剂试剂方法的性能验证及每批试剂的质检性能指标：精密度（重复性

12、）精密度（重复性）准确性（定量：回收率、标准物质等；定性：方法学比较等）线性范围（定量）分析特异性 测测定下限定下限 抗干抗干扰扰能力能力“性性能能验证验证”（“verification”）定定义义“verification”：broadly as“confirmation through the provision of objective evidence,that specified requirements have been fulfilled”.（广广义为义为通通过过提供客提供客观证观证据据证证明特定明特定 的要求得到的要求得到满满足足）CLIA uses the term“ver

13、ification”：specifically to relate to confirmation that the laboratory using a test can replicate the manufacturers performance claims when the test is used according to the package insert.（CLIA性能性能验证术语验证术语特指特指 使用某特定使用某特定检测试剂检测试剂或系或系统统的的实验实验室室按按照所照所提提供的供的试试 剂剂盒或盒或检检测测系系统说统说明明书书使使用用时时，能能复复现现生生产产厂厂家家 所

14、所宣宣称称的的检检测测性性能能。）如如果果不不按按商商品品 试试剂剂盒盒说说明明书书 操操作作或或改改变变商商 品品试试剂剂盒盒组组份份 是否是否可可以以？可以可以但属于但属于实验实验室室自自 配配试试剂剂或或自建方自建方 法法，亦即，亦即 Laboratory-developed tests,LDTs)“性能确性能确认认”（“validation”）定）定义义The FDA and ISO both define the term“validation”as“confirmation by examination and provision of objective evidence tha

15、t the particular requirements for a specific intended use can be consistently fulfilled”.（通通过过检查检查和和提供提供客客观证观证据据证证明明，对对一一特特 定定预预期期用用途途的的要要求求始始终终能能得得到到满满足足）The FDA and ISO terms for verification and are similar,with the distinction having to do with intended use.（性（性能能验验证证和性和性能能确确认认 FDA和和ISO术术语语相相似，似

16、，差差异异在在后后者者的的“预预期期 用途用途”）“intended use”预预期用途期用途The term“intended use”in these documents is established by the manufacturer or developing laboratory at the time of assay development and has to do with the purpose and population for which the test was intended (e.g.,diagnosis,following treatment,etc.)

17、.Relevant performance characteristics are then determined based on the intended use of the test.Some people interpret“intended use”as referring to the relevant clinical laboratory in which the test is performed,rather than the manufacturer or developing laboratory,thus causing confusion.The World He

18、alth Organization(WHO)defines validation as“the action(or process)of proving that a procedure,process,system equipment or method used works as expected and achieves the intended result”.（WHO将将 validation定定义义为为，证证明所使用的一个程序、明所使用的一个程序、过过程、系程、系统设备统设备 或方法能按或方法能按预预期期进进行工作以及取得行工作以及取得预预期期结结果的活果的活动动（或（或过过 程程

19、）“validation”通俗一点的通俗一点的定定义义the term“validation”will be used to refer to the analytic performance characteristics that need to be initially established at the time of assay development.（指在指在测测定方法研定方法研发时发时，最，最 早建立的分析性能特早建立的分析性能特征征）性能性能验证验证性能指性能指标标及所及所建建议议的的 研究研究与性能与性能确确认认的的实实际际操作区操作区别别要要求求FDA批准的批准的检检测

20、测实实验验室室自自建建方法方法或或自配自配试试剂剂（LDT）可报告范围,线性范围研 究(定量检测)覆盖所述线性范围内57个浓度，每个浓度双份 检测覆盖预计测定范围内（或超出所确定的最宽的可能范围的2030%）79个浓度，每个浓度23个重复检测，进行多项回归分析分分析敏析敏感感性性，测定下限（LOD）研究CLIA不要求不要求，但CAP要求对定量进行LOD验证，使用在5天内收集的20个数据点60个数据点（例如在预计的检测下限范围内5个样本，12次重复），研究时间5天，使用probit回归分析（或如果采用LOB研究，则使用SD加置信限）精精密密度度,重复实验定定性性检检测测：检检测测1个个对对照照/

21、天，天，共共20天天，或或双份重双份重 复复/天，天，共共10天天。定量检测：2个浓度的每1个检测2个样本（共4个 样本），加1个对照，检测20天，或检测2个浓度，3管重复，检测5天定性检测：最少3个浓度（LOD、LOD+20%、LOD-20），获得40个数据点。定量检测：最少3个浓度（高、低和LOD），双管重复检测12次/天，检测20天，计算批内、批间、每天之间SD和/或CV，以及总的变异分分析特析特异异性性,干扰研究CLIA不要求不要求未建议最小样本数量；检测样本相关的干扰物质（溶血、脂血、黄疸等）和遗传 上相似的微生物或具有相同临床表现同一样本位点可见到的微生物，加入低浓度 待测物质。采

22、用t检测统计分析。准准确确度度（正确度），方 法学比较研究在在检测检测范范围围内内的的20个患个患者者样样本本或或2个个浓浓度（度（低低和和 高高）标标准准物物质质，复复管管检检测测25批。批。使用比较方法和拟评价方法至少5天进行双管重复检测，典型的40个以上的样本，进行xy散点回归统计分析；采用Bland-Altman 差异描点，加偏倚测定;使用kappa 统计学分析%符合率参考区间厂家说明书内提出的参考区间在特定实验室用于 其所服务的人群时可能会发生“改变”，如果实 验室希望进行验证，检测可代表相应人群的20份 样本，如果人群完全不同，则通过要60份（至少 40）建立参考区间。如果在健康个

23、体靶核酸不会存在，则属于定性检测，参考范围这“阴性”或“未 检测到”，则不需要进行参考区间研究。对于定量检测，参考区间可报告为低于 最低检测限（LOD或LLOD）；对于某些待测物，参考区间可能是一个临床决策限（a clinical decision limit）；如果检测的预期用途限于已知被检测的待测物是阳性 的患者，则不适用参考区间。注：所有性能确认和性能验证研究必须使用于适当基质中制备的样本，必须对检测的所有样本类 型以及每种基因型和多重检测中的每种待测物进行评价。Burd EM。Clin Microbiol Rev.2010自建方法和自配自建方法和自配试剂试剂有严格的试剂制备SOP建立相

24、应的性能指标：重复性、准确性、特异 性、测定下限和抗干扰能力等应做成一个试剂盒的样子：名称、方法、制备 日期、制备人、有效期等有使用说明书理理想的想的操操作方作方法法定量测定的精密度是测定组成步骤的变异和的平方根(SD)=上式中SDa、SDb、SDc是步骤a、b、c等（例 如试剂准备、标本采集、核酸提取、扩增 和产物检测等）的标准差SD2 SD2 SD2.abc理想的操作方法改善测定精密度的措施 必须首先着重在最不精 密的步骤上，应对试剂 准备、标本收集、核酸 提取、测定方法和仪器 操作写出“标准操作程 序”(SOP)实验实验室室质质量管理的量管理的“灵灵魂魂”标标准操作程序（准操作程序（SO

25、P）是）是实验实验室的室的“最高最高标标准准”！SOP等于等于试剂试剂盒盒说说明明书书吗吗？源于一些标准文件（如仪器试剂说明书、国际国内标准文件）和实验室实际工作经验积累。因此因此高于相关高于相关标标准文准文件件！有有可可操操作性作性的的SOP是是质质量量管管理理的的“灵灵魂魂”！怎样编写SOP？XXX单位XXX实验室XXX标准操作程序编号：启用日期：版本：第 页 共 页一目的：二适用范围：三职责或责任人：四（方法原理）五（检测设备和试剂）六（所需的环境条件）七操作步骤：123五、本操作程序变动程序：六、相关的文件七、相关的记录表格和报告编写人审核人批准人SOP（5W和和1H）谁来做(Who)

26、：责责任人任人做什么(What)：适用适用范范围围何时（When）：适用适用范范围围何地（Where）：适适用范用范围围为什么做（Why）：目的目的如何做（How）：操操作作步步骤骤“文文字字”加加“图图 片片”的的SOP能能给给 我我们带们带来什来什么么？人人员员培培训训目的：知其然知其所以知其然知其所以然然。检测技术人员需进行上上岗岗培培训训和在在岗岗持持续续培培训训。上岗培训是实验室人员需接受医政医管局指定机构进行的 个个体体化化医医学学检检测测实验室人员培训，并取得上岗证，方能从 事个体化医学实验室检测。如检测技术涉及临临床床基基因因扩扩增增 技技术术的，还应取得临床基因扩增检测实验室

27、人员上岗证。在岗持续培训指在工作中要根据需要接受复培训，实验室 技术人员至少每2年1 次，除接受检测基本培训内容外，要 求了解相关技术、质控及安全要求的新进展。实验实验室室人人员员内内部部培培训训的的重重要性要性外部培训提供的是“理念”，是被 动的，更多的是“学习”内部培训是主动的，源于实践，高 于实践，更多的是“思考”内内 部部 培培 训训 所所 涉涉 及及 的的 范范 围围理论专业试剂、方法原理质量控制方法相关领域的新 技术其他相关法律法规质量管理体系新理念和新进展操作仪器设备使用、维护和校准实验操作技能如何培如何培训训讲座自学练习咨询讨论培训 评估书面考 试实验考核综述问题的 解决报 告

28、论文讨论心得室内室内质质控方法控方法非统计学方法统计质控方法非非统计统计学方法学方法在检测临床标本的同时，检测一定数量（与临床样本的数量相适应）的已知弱阳 性（与试剂宣称的测定下限相适应）和阴 性的质控样本检测有效的质控判断方法：阳性检测为阳 性（反应性），阴性检测为阴性（非反应 性）。SNP、突、突变变等定等定性性检检测测质质控控品品从从哪哪来来？日常检验阳性样本的收集弱阳性质控品：浓度为试剂盒检测限2-4倍的样本较强阳性质控样本？阴性质控品：日常检验的阴性标本突突变变及及SNP检测检测的的质质控如何做？控如何做？首先得到不同突变或基因型的较弱阳性质控样 本及阴性样本然后在每次检测临床标本时

29、，带入其中12种 突变或基因型，在一定时间内将所有突变等全 部轮到。统计统计学学质质量控制量控制理想的室内质控样本的条件测定中质控样本的设置、数量及排列 顺序统计学质控的特点统计质控方法每次（批）每次（批）测测定定质质控物的数量及放置控物的数量及放置标本数量如小于30，弱阳性和阴性质控各1份，标本数量增加，质控物数量相应按比例增加均匀分散于临床标本中，与临床标本一同处理（核酸提取）扩增时的排列顺序，可排于标准品或校准品之 后，临床样本之前。但在扩增仪中的位置，不 应永久性的固定的在一个孔，而应在每次扩增 检测时，进行相应的顺延，以使在一定的时间 内，可以尽可能的监测每一个孔的扩增有效性。常用质

30、控规则的符号及定义符符 号号定定义义12S1个质控测定值超出均值2SD控制限13S1个质控测定值超出均值3SD控制限22S2个连续的质控测定值同时超出均值+2SD或2SD控制限R4S同一批测定中，2个不同浓度质控品测定值之间的差值超出4SD控制限41S4个连续的质控测定值同时超出均值+1SD或1SD控制限7T7个连续的质控测定值呈现一个向上或向下的趋势变化10X10个连续的质控测定值同时处于均值的同一侧Levey-Jennings质质控控图图Levey-Jennings质质控控图图 基基本本的的统统计计学学含含义义稳定条件下，在20个IQC结果中不应有多于1 个结果超过2SD（95.5%可信限

31、）限度；在 1000个测定结果中超过3SD（99.7%可信限）的结果不多于3个。如以3s为失控限，假失控的概率为0.3%。“假阳性假阳性”的的统计统计学室内学室内质质控方法控方法基于日常检验的阳性率比值(呈正态 分布)直接概率计算方法（不呈正态分布）临床标本中每次检测阳性和阴性结果的出现频率，以 及同一基因型或基因突变出现频率或连续出现频率等，均可作为提示实验室“污染”的质控指标。实实验验室室质质量量管管理理的的“精精髓髓”查出异因采取措施保证消除不再出现纳入标准（SOP）预防！防止同样的问题出现第二 次是质量管理的“精髓”！人人是错误的来源？追根溯源往往是管理管理上的问题！出现问题怎么办？厦

32、厦门买门买罐装罐装汽汽油油实实名名制制 个人个人购买购买需需开开两两份份证证明明-搜搜狐狐新新闻闻.htm厦厦门门公交要装自公交要装自动动爆玻爆玻器器 按下按按下按钮钮一推玻璃就碎一推玻璃就碎分析分析用用质质控（控（图图）控制控制用用质质控（控（图图）一个一个临临床床PCR实实验验室室对对全全年室内年室内质质控控结结果的分析果的分析举举例例全面全面质质量量管理管理的的工作工作循循环环:PDCA4个阶段，8个步骤第一阶段（Plan）有4个步骤：分析并找出问题；找出问题产生的原因；确定最主 要原因；制定措施计划。第二阶段（Do）有1个步骤：执行计划第三阶段（Check）有1个步骤：检查计划执行情况

33、。第四阶段（Action）有2个步骤：总结、制定标准（修改质量文件），以巩固提高；发现新出现的问题，转入下一PDCA循环。55PDCA的特点的特点小环合成大环不断循环，阶梯式上升“A”是改进的动力之源56C DADP CA PPlan问题问题：质控品结果偏低原原因因：PCR仪 扩增孔内有灰 尘所致，说明 仪器设备日常 清洁维护不到 位措措施施：修改原 有的仪器设备 维护SOP，加 大扩增孔维护 频度。Do按照 新的 室内 质控 SOP 执行Check是否有 同样的 失控发 生？是否执 行了新 SOP？Action总结，并 将更改的 扩增仪孔 内清洁频 度要求写 进正式的 扩增仪维 护SOP。是

34、否出现新的问题？HBV DNA质质控失控控失控发现质发现质控控结结果超出均果超出均值值3SD）室室间质间质量量评评价价所有个体化医学检测实验室必须参加卫生部临床 检验中心组织的室间质量评价。如该项目未开展室间质量评价，需每年进行三家以上实验室，每次涉及3份以上样本的实验室比对。室间质量评价结果不合格或实验室比对结果不符 合的，应当分析原因，并撰写整改报告。实验室应当规定室间质量评价相关的内容包括：1.室间质评年度计划；2.室间质评试验记录及结果上报程序；3.对不符合结果分析及整改措施。PCR实验实验室最有效的防室最有效的防“污污染染”措施措施实验室的“通风”次氯酸钠溶液的使用1mol/L HC

35、l溶液的使用紫外照射70%或无水乙醇溶液？分析后分析后质质量保量保证证：结结果的果的 报报告和解告和解释释等等遗传检测报遗传检测报告至少要包括的信息告至少要包括的信息将报告与特定患者联系在一起的惟一编号咨询人员的姓名和联系方式与检测结果解释有关的特异的信息和检测性能检验项目及所使用的方法（包括检测范围及检测局限性）标本类型标本接收日期检测实验室名称，地点，包括咨询实验室检验结果根据检测特性和其它提供给实验室的信息对结果的解释报告批准人的签字实验室联系方式报告日期适当时，还应包括：建议的有资质的遗传咨询人员；对其他家庭成员 的意义；进一步的检测建议MM20-A.(vol.32.No.15)Qua

36、lity management for molecular genetic testing,Approved guideline供参考的供参考的标标准准报报告格式告格式XXXXXX 医医院院临临床分床分子子检检测测报报告告报报告告编编号号：*年年龄龄：*样样本本编码编码：*临临床床诊诊断：断：*采采样样日期日期：*姓姓名：名：*送送检检科室科室：*采采样样时间时间：*性性别别：*送送检检医医生生：*样样本本类类型型：*样样本的本的处处理理：*检检测测方方法法：主主要要检检测测仪仪器器：*结结果果报报告：告：编编号号*检检测测项项目目*检检测测结结果果参参考考值值/参参考考范范围围*结结果解果解

37、释释（结结果果的的总总体体描描述及述及临临床床意意义义）：）：*检检测测方方法法的主要的主要性性能指能指标标(至至少少含含检检测测范范围围及及检检测测下下限限)：*检检测测局局限限性性：进进一一步步检检测测的建的建议议：建建议议的的咨咨询询人人员员及其及其联联系方系方式式：参考参考文文献献：其其它它(对对其其他可能他可能对对检检测测结结果果产产生生影影响的响的问题问题描描述述)：*收件日期收件日期：*检检测测日期日期：*报报告日告日期期：*检检测测者者：*审审核核者者：备备注注：实验实验室室地地址址：XX 市市 XX 路路X 号号。邮邮编编XXXXXX联联系系电电话话：XXXXXXXX第第 页

38、页，共共 页页结结果解果解释释及与及与临临床沟通床沟通基本概念的重要性基本概念的重要性以染色体非整倍体无创产前检测（NIPT）为例基本概念基本概念假阳性率：阳性预测值：假阴性率：TN（真阴性）FP(假阳性）FP（假阳性）100%100%TP(真阳性）（假阴性）TN(真阴性）阴性预测值：TN（真阴性）FN100%TP（真阳性）FP（假阳性）FN(假阴性）TP（真阳性）FN（假阴性）100%概念不清造成的概念不清造成的误误解解一般的唐氏筛查手 段仅能检出 50%95%的异常，且有5%的假阳性 率1,2。1.Nicolaides KH.Prenat Diagn 2011;31:715.2.Wrigh

39、t D,et al.Fetal Diagn Ther 2014;35:11826.VariableStandard ScreeningCell-free DNA TestingAll Pat ien ts (N=15,841)All Pat ients (N=15,8 41)M at ern al Age 35 Yr (N=11,994)Low Ri sk (N=14,95 7)卞Tru e po si t ive no.3038198Tru e nega t i ve no.14,94915,79411,96914,941Fal se po sit ive no.854968Fal se n

40、egat i ve no.Se ns it ivity(95%Cl)%878.9(62.790.4)。100(90.7 l OO)：t。100(82.41 00 )100(63.1-10 0)S pecifi city(95%Cl)%94.6(94.2.94.9)99.9(99.9100)99.9(99.91 00 )99.9(99.910 0)Pos 巾 ve predict ive val ue(95%Cl)%3.4(2.34.8)80.9(66.790.9)76.0(54.990.6)50.0(24.775.3)Negat ive p dictive val(95%C l)%99.9(9

41、9.9100)100(99.9100,)100(99.91 00 )100(99.9 10 0)Pos itive likelihood ra t io14.61755.91 995.81868.6TheNEWENGLAND JOURNAL ofM E D I C I N E ESTABL I SH ED l N 1 8 1 2APRIL 2 3,201 5VOL.372N O.17Cell-free DNA Analysis for Noninvasive Examination of TrisomyTable 2.Test Perf orm anc e for Tri somy 21 in

42、 t he Prim ary A nalysis Coh ort,According to M at ernal Age and Ri sk.:N egat ive likeli hoo d rat i o0.22。*P val ues are for the compar iso n between st andard screening and cell-fr ee DNA screenin g in t he primary analys is cohortj Low ris k was defined as a mid-t rimest er risk of trisom y 21 o

43、f less tha n 1 in 270 on stand ard screening=P=0.00 8 P 0.001,P=0.00 5.TheNEWENGLAND JOURNAL ofM E D I C I N E ESTA BLISH ED l N 1 8 12APRIL 2 3,201 5VO L.3 7 2N O.17Cell-f ree DNA An alysis for Noninvasive Examina tion of Triso myTable 3.Test Performance for Trisomy 18 and Trisom y 13.：.，：80.0(44.4

44、-97.5)99.7(99.6 99.8)1 4.0(6.225.8)90.0 (55.599.7)100 (99.9100 )卞90.0(55.599.7)tSensit ivi ty (95%CII)%S pecifi c心(95%C|%Posit ive predictive val ue (95%Cl)%N egat ive pred ict ive val ue (95%Cl)%MetricTriso my 18Trisomy l3Standard Sc reen ingCe lI-free D NA Testi ngStandard ScreeningCel l-free DNA

45、Testi ng(IN =l S,841(N=l 5,841)(N=11,185)N=11,185)Tr ue po sit ive no.8912Tru e nega tive no.15,78215,83011,15511,181False po si t ive no.491282False negat i ve n o.211。100(99.91 00)100(99.9100)100 (99.91 00)lnduded in the t risomy 13 analysis are pat i ents who were enrollled after September 20 12.

46、j P0.001 for the com parison with st andard sc reen in g50.0(L 298.7)99.7(99.6-99.83 4 (0.l 1 7.8)1 00 (1 5.81 0 0)100 (99.91 0 0)卞so俨 0(6俨 89 3.2)100 (99.91 0 0)心仑SNIPT假阳性的原因假阳性的原因染色体拷贝数变异（copy-number variation）1母体嵌合（maternal mosaicism）2,3限制性胎盘嵌合（confined placental mosaicism）2,4,5双胎消失综合征（the vanish

47、ing twin syndrome）5孕妇患有恶性肿瘤61.Snyder MW,et al.N Engl J Med.2015 Apr 23;372(17):1639-45.2.Lau TK,et al.Prenat Diagn 2013;33:602-8.3.Wang Y,et al.Clin Chem 2014;60:251-9.4.Grati FR,et al.Genet Med 2014;16:620-4.5.Lau TK,et al.Ultrasound Obstet Gynecol 2014;43:254-64.6.Osborne CM,et al.Prenat Diagn 201

48、3;33:609-11.NIPT假阴假阴性原性原因因胎儿游离胎儿游离DNA浓浓度（度（Fetal fraction）样样本本处处理理：血浆和血细胞要尽快分离，需采用EDTA抗凝管进行样本采集，最好在采集后6个小时内完成血浆分离，最长不能超过24小时。孕孕妇妇体重指数（体重指数（maternal body mass index，BMI）：体重高的孕妇，胎儿 游离DNA浓度更低。孕周（孕周（Gestational age）：在10-21孕周，胎儿游离DNA浓度每周约增加0.1%。21周后，每周增加约1%。胎儿非整倍体（胎儿非整倍体（fetal aneuploidy）类类型型：21三体的胎儿游离DN

49、A浓度更高，而18和13三体的浓度较低。单单胎和多胎妊娠胎和多胎妊娠（singleton and multiple gestations）：如果双胞胎是同种基 因型，他们可与单胎同等有效地进行检测，而且Z值与胎儿游离DNA浓度呈 线性相关。但是，如果双胞胎的非整倍体情况不一致，那么检测就相对困难 一些，因为每个胎儿游离DNA的浓度较单胎更低。有假阴性风险。嵌合体（嵌合体（mosaicism）：10%以下嵌合或低胎儿游离DNA浓度均会导致假阴性 结果。染色体染色体：GC含量中等的染色体使用MPS检测结果最好，例如21和18染色体。13染色体GC含量低，因此需要校正GC偏倚，才能提高13三体检测的

50、敏感性。知知识识不断更新的重要性不断更新的重要性以肺癌基因突变检测与临床用药为例非小非小细细胞肺癌主要靶向胞肺癌主要靶向药药物作物作用用位点位点73KRASKRAS突突变变在非在非亚亚洲人洲人群群、吸、吸烟烟者以者以及及粘液粘液性性腺癌腺癌中中最常最常见见。KRAS突突变变主要主要集集中在中在12、13、61号号密密码码子子上上。KRAS突突变变预预示示非非小小细细胞胞肺癌肺癌患患者生者生存存结结果果较较差差，铂铂类类/长长春春瑞瑞滨滨或或EGFR-TKIs治治疗疗耐耐药药。如患如患者明者明确确存在存在KRAS突突变变，应应首先首先考考虑虑厄厄洛洛替尼替尼以以外的外的治治疗疗方方法法。EML4