乙型肝炎病毒的生物危害评估报告医学心理学病毒学.pdf

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1、.乙型肝炎病毒的生物危害评估报告 1危害程度分类 1.1 分类等级 根据中华人民共和国传染病防治法，乙型肝炎病毒（HBV）属于乙类传染病。在卫生部20XX 公布的人间传染的病原微生物名录中将其列为危害程度第三类病原微生物。运输包装仅病毒培养物为A类，UN 编号为UN2814。1.2 实验室操作生物安全实验室级别要求 根据人间传染的病原微生物名录要求：乙肝血清学检测未经培养的感染材料的操作，应在级生物安全实验室（BSL-2）实验室中进行。2背景资料 2.1 一般生物学特性 乙型肝炎病毒属嗜肝 DNA 病毒，有包膜，病毒颗粒为直径 42nm的圆球形。在病毒感染者的外周血中还有直径 22nm的圆形和

2、管形颗粒。这种颗粒为乙型肝炎表面抗原，没有核酸，无传染性。1）大球形颗粒：亦称 Dane 颗粒，它是一种由一个囊膜和一个含有 DNA 分子的核衣壳组成的病毒颗粒，直径约 42nm。核衣壳为 20 面体对称结构。游离的核衣壳只能在肝细胞核内观察到。血中 Dane 颗粒浓度以急性肝炎潜伏期后期为最高，在疾病起始后则迅速下降。Dane 颗粒表面含有 HBsAg，核心中还含有双股有缺口的 DNA 链和依赖 DNA 的 DNA 多聚酶。目前认为 Dane颗粒即完整的 HBV。HBV DNA 的两链长短不一，长链（L）完整，为负链，长度恒定，约 3200 个核苷酸。短链（S）为正链，长度可变，约为长链长度

3、的 50100%，链的增生按 5-3顺序进行。在不同分子中短链 3端的位置是可变的，而短链和长链的 5端位置固定点为粘性末端，通过 250300 个核苷酸碱基配对，以维持 DNA 分子的环状结构。在粘性末端两侧，两链 5端各有一个由 11 个 bp 组成的直接重复序列（Direct repeat DR）-5TTCACCTCTCC，该 DR位于第 1824 个核苷酸者称 DR1，位于第 1590 个核苷酸者称 DR2，在病毒复制中起作用。2）小形球颗粒：直径约 22nm的小球形颗粒是 HBV 感染后血液中最多见的一种。它由 HBsAg，即病毒的囊膜组成。化学组成为脂蛋白，可按其特有的密度与正常血

4、清蛋白部分分离。在此颗粒中未检出达DNA 多聚酶活性。目前认为 HBV 的小颗粒不是 HBV，可能是它感染肝细胞时合成过剩的囊膜而游离于血循环中。3）管形颗粒：直径约 22nm，长度可在 100700nm之间。实际上它是一串聚合起来的小颗粒，但同样具有 HBsAg的抗原性。2.2 对外界环境的稳定性 HBV 对外界抵抗力环境抵抗力较强，对干燥、紫外线、75%乙醇等均有耐受性，60可存活 2 小时，30-32至少可存活 6 个月，20可存活 5 年。但 100煮沸 10 分钟；高压蒸汽灭菌、0.5%过氧乙酸、5%次氯酸钠等均能灭活病毒，因此，注射器具、医疗用具通过高温消毒、煮沸或蒸汽消毒完全可以

5、达到消毒目的。2.3 传播途径与致病性 乙型肝炎病毒通常是经过肠道外途径传播,其典型的传播途径是输入污染的血与血制品。HBV的传染性很强，外科和口腔手术、针剌、使用公用剃刀、牙刷等物品，皮肤微小操作污染含少量病毒的血液，均可成为传染源。另外,由于乙型肝炎患者和 HBsAg携带者的精液、阴道分泌物均可检出 HBsAg，因此，两性接触传播乙型肝炎的可能性是存在的。近来有人报告在急性乙型肝炎患者和慢性 HBsAg携带者唾液.标本中检测到 HBsAg与 Dane 颗粒，因此，HBsAg随唾液经口传播的途径应当重视。孕妇在妊娠后期患急性乙型肝炎，新生儿易感染此病。2.4 乙型肝炎预防、诊断和治疗 2.4

6、.1 预防措施 1）健康教育：应向群众宣传乙肝知识，认清乙肝病毒传播途径的复杂性和乙肝在我国人群中的普遍性，树立预防为主，自我保护意识。2）执行新生儿乙肝疫苗计划免疫，做好产前检查，特别是 HBsAg伴有 HBeAg的双阳母亲新生儿，用乙肝疫苗联合乙肝高效价免疫球蛋白注射以阻断母婴传播。3）献血员的筛选：献血员必须做到每次献血前检测血清转氨酶（ALT），以敏感的方法（ELISA）检测 HBsAg，两项中任何一项阳性均不得献血。4）防止医源性传播，各级医疗卫生单位，应严格实行一人一针一管。实验室检查与其诊断 乙型肝炎的临床表现形式多样，诊断的依据除病人症状，体征外，须根据流行病学，实验室检查和或

7、肝活检等手段进行综合分析，动态观察诊断。1）流行病学资料：半年内接受过血与血制品或曾有其他医源性感染，生活中的密切接触，尤其是性接触。2）症状：近期出现的无其他原因可解释的持续一周以上的明显乏力和消化道症状。3）体征：肝肿大，伴有触痛或叩痛；皮肤，巩膜黄染。4）肝功能检查：谷丙转氨酶（ALT）明显增高。5）HBV 标记物检查：乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阳性。治疗 病毒性肝炎目前还缺乏可靠的特效治疗方法。各型肝炎的治疗原则均以足够的休息、营养为主，辅以适当药物，避免饮洒、过劳或损害肝脏药物。1）急性肝炎以一般与支持疗法为主。休息与隔离 应强调早期卧床休息，至症状明显减退，可逐步增加活动。饮食

8、 饮食宜清淡，热量足够，蛋白质摄入争取达到每日 11.5g/kg，适当补充维生素 B族和 C，不强调高糖和低脂肪饮食。2）轻度慢性肝炎除一般与支持疗法以外，还需要进行对症和抗病毒治疗。休息 无需绝对卧床休息，宜用动静结合的疗养措施。处于活动期的患者，应以静养为主；处于静止期的患者，可从事力所能与的轻工作。症状消失，肝功能正常 3 个月以上者，可恢复其原来工作，但仍需随访 12 年。饮食 应适当进食较多的蛋白质，避免过高热量饮食。以防止肝脏脂肪变性。也不宜进食过多的糖，以免导致糖尿病。对症治疗 包括降低转氨酶制剂，如联苯双脂、垂盆草、齐墩果酸等，具有非特异性降低 ALT的作用。这些降酶药物虽然可

9、能具有护肝的作用，但停药后容易产生 ALT反跳。故在显效后应注意逐渐停药。一般的非特异性护肝药物，主要包括维生素类（B族、C、E、K等），促进解毒功能药物如葡醛内脂（肝泰乐）、还原型谷胱甘肽、维丙胺、硫辛酸等，促进能量代谢药三磷酸腺苷（ATP）、促进蛋白质合成药物（肝安、水解蛋白等）以改善微循环药物（丹参、低分子右旋糖酐等）可作为辅助治疗，但宜精简，避免使用过多药物。素使用的指征为在活动性复制中肝炎处于活动期血浓度低抗阳性使用干扰素治疗时剂量应偏大万万次疗程应偏长个并详细记录用药情况首次用药时间药物副作用情况包括肝肾功能化验结果用药的依从性状况定期检测暴露后即刻周如发现溢漏应立即将尚存留的样品

10、移出若样本外漏到标本容器外面应立即用浸有含氯消毒液的多重软布与擦拭标本.抗病毒治疗：a.干扰素 慢性乙型肝炎时干扰素使用的指征为：HBV 在活动性复制中；肝炎处于活动期；HBV DNA 血浓度低；抗-HBc IgM 阳性。使用干扰素治疗时剂量应偏大（300 万600 万 U/次），疗程应偏长（6 个月1 年）。干扰素一般仅能抑制 HBV 复制，使 HBeAg和 HBV DNA 转阴，而难以使 HBsAg转阴。b.核苷类似物 拉米夫定（lamivudine，3TC，TM）主要通过抑制 HBV DNA 逆转录酶的活性与抑制共价闭合环 DNA（covalently closed circle DNA

11、,cccDNA）的合成而抑制 HBV DNA 的合成。它不抑制线粒体 DNA 和骨髓，无直接调节免疫作用，因而基本上无不良反应。长期（6 个月以上）用药可使 HBV DNA发生变异而产生耐药性。3从事实验室活动的危险性分析与相应的预防措施 3.1 实验室实验活动背景资料 本实验室主要从事 HBV/HCV/HIV 病毒与梅毒螺旋体的血清学检测。HBV 抗体筛查实验:酶免法(ELISA)3.2 可能危害 在实验操作过程中，接收样本时样本包装密封性不好造成样本泄露；操作过程中如打开容器盖时样本外溅，加样、孵育、震荡、分离保存血清等时由于操作不慎导致样本溅出、离心管破裂崩溅、气溶胶等。实验室工作环境的

12、污染，实验人员如果接触污染的实验仪器表面、冰箱、加样器、实验台、门把手与实验废弃物等均可能被感染。3.3 预防与处置措施 预防 避免职业性血液与体液暴露是实验室预防 HBV 传播的主要措施。1)实验检测过程均应在生物安全防护级实验室内进行。2)操作者在实验全过程包括样品接收，都应穿戴好一切生物安全防护装备，一次性的口罩、帽子、乳胶手套，防护衣、必要时配戴防护镜等，操作全过程应严格执行实验室的标准操作规程（SOP）。3)尽量避免在实验室使用针头、刀片、玻璃器皿等利器，以防刺伤。如果必须使用，在处理或清洗时应采取措施防止刺伤或划伤，并应对用过的物品进行消毒处理。4）完成乙型肝炎病毒疫苗接种程序，并

13、且进行抗体检测。5）经过规范的生物安全培训，并经过严格考核和取得上级主管部门人员许可；近期较深的开放性伤口的人员应该禁止或限制其进入相关实验操作区。6）限制在妊娠早期的工作人员进行病毒相关的感染性材料的操作。7)如接触物传染性危险大，可戴双层（两付）手套以增加保护。操作时手套破损，应立即丢弃、洗手并戴上新手套。8)禁止采用口腔吸液管，必须使用移液器来操作实验室的所有液体。9)工作完毕，要对工作台面消毒。工作台面应当用 0.1%0.2%次氯酸溶液消毒；用消毒液清洗后要干燥 20min 以上；10)工作完毕，脱去手套后洗手，再脱去工作衣，用肥皂和流动水洗手。处置措施 1)所有的血液、血清（血浆）均

14、应视为有潜在传染性，都应以安全的方式进行操作。应按操作未知的有传染风险样品一样，小心存放、拿取和使用所有可能有传染性的质量控制和参考物质。2)接收样本时，核对样品与送检单，检查样品管有无破损和溢漏，如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，若样本外漏到标本容器外面，应立即用浸有 5%含氯消毒液的多重软布与擦拭标本容器，必要时通知重新留取标本。打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。废弃的标本视为高危物质放置到高压素使用的指征为在活动性复制中肝炎处于活动期血浓度低抗阳性使用干扰素治疗时剂量应偏大万万次疗程应偏长个并详细记录用药情况首次用药时间药物副作用情况包括肝肾功能化验结果用药的依从性状况定期检测暴露

15、后即刻周如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出若样本外漏到标本容器外面应立即用浸有含氯消毒液的多重软布与擦拭标本.灭菌锅内消毒，同时立即更换污染的手套，污染的手套也应放到高压灭菌锅内灭菌。3)在进行操作时，若发生液体外溅，应将被溅的地方用 5%含氯消毒液浸泡的物质覆盖，待消毒液起作用 10-15 分钟后清理该地方，移走吸水性物质。所有实验用品应按污染物质处理，放入高压灭菌锅内灭菌。4)在离心过程中，若发生离心管破裂与样本外溅，应立即停止离心，待离心机自动停止并发出提示信号 30 分钟后，确保穿戴好一切防护用品后，方可打开离心机盖，用止血钳子夹出离心的碎片，被样本污染的地方，防置浸泡有 5%含氯消毒

16、剂的吸水性物质，待消毒剂起作用后 10-15 分钟再清理污染处，移走吸水性物质，并用 0.5%含氯消毒剂或 2%戊二醛多次消毒污染处所有消毒处理用过的物品应按高危物质处理，放入高压灭菌锅内灭菌。4实验室职业暴露后的立即处理 职业暴露发生后，应立即报告。尽快地使用 HBIG、乙型肝炎疫苗。1)皮肤针刺伤或切割伤：立即用肥皂和大量流水冲洗，过程中挤压伤口尽可能挤出损伤处的血液，持续 1520min 后并用 75%酒精或者 0.5%碘伏进行消毒。2)皮肤污染：用水和肥皂冲洗污染部位，并用适当的消毒剂浸泡，如 75%乙醇或其它皮肤消毒剂。3)粘膜污染：用大量流水或生理盐水彻底冲洗污染部位。4)衣物污染

17、：尽快脱掉污染的衣物，进行消毒处理。5)污染物泼溅：发生小范围污染物泼溅事故时，应立即进行消毒处理。发生大范围污染物泼溅事故时，应立即通知实验室主管领导和安全负责人到达事故现场查清情况，确定消毒的程序。5.职业暴露后预防与管理 5.1 职业暴露后的预防 应考虑几个因素：a.暴露源的 HBsAg状态、暴露者的乙型肝炎疫苗接种情况和疫苗反应状态。对未免疫接种的工作人员的血液或体液暴露，应启动乙型肝炎疫苗接种。并对暴露者的乙型肝炎疫苗接种情况和疫苗反应状态进行评估。推荐预防方案见表 1。表 1 暴露于 HBV 的推荐方案 暴露者的免疫接种 和抗体反应状况 处理 暴露源 HBsAg 阳性 暴露源 HB

18、sAg 阴性 暴露源不明确或未检测 未免疫接种 注射乙型肝炎免疫球蛋白、乙型肝炎疫苗接种 乙型肝炎疫苗接种 乙型肝炎疫苗接种 已免疫接种有反应者 不需处理 不需处理 不需处理 已免疫接种但抗体反应未知 测试抗-HBs，如果有，不需处理；否则施与 HBIG和疫苗增强 不需处理 测试抗-HBs，如果有，不需处理；否则施与疫苗增强和在 12 个月后再检测抗体滴度*HBIG（乙型肝炎免疫球蛋白），剂量 200U，肌肉注射。*有反应者为 HBsAg血清表面抗体阳性的暴露者*无反应者为对免疫接种反应不足的暴露者（检测表面抗体为阴性）。当需要应用 HBIG时，应在暴露后尽可能快地使用（最好在 24 小时内）

19、。在暴露 7 天后 HBIG的有效性不明确。当需要应用乙型肝炎疫苗时，也应在暴露后尽可能快地使用（最好在 24 小时内）；并且可与 HBIG同时注射。素使用的指征为在活动性复制中肝炎处于活动期血浓度低抗阳性使用干扰素治疗时剂量应偏大万万次疗程应偏长个并详细记录用药情况首次用药时间药物副作用情况包括肝肾功能化验结果用药的依从性状况定期检测暴露后即刻周如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出若样本外漏到标本容器外面应立即用浸有含氯消毒液的多重软布与擦拭标本.乙型肝炎疫苗是安全的，接种乙型肝炎疫苗的最常见副反应为注射点疼痛和轻度至中度发热，严重副反应的发生率非常低。对免疫球蛋白有过敏反应史的暴露者不应接受

20、 HBIG。妊娠和哺乳期妇女暴露者都可注射乙型肝炎疫苗接种和 HBIG。5.2 职业暴露后的管理 职业暴露事故的事故发生单位应建立“医务人员职业血液暴露登记表”，对职业暴露情况进行登记、保存和上报。详细记录职业暴露发生的时间、地点与经过；暴露方式；损伤的具体部位、程度；暴露物种类（血液、血清或血浆）；处理方法与处理经过；是否采用暴露后预防药物，并详细记录用药情况、首次用药时间、药物毒副作用情况（包括肝肾功能化验结果）、用药的依从性状况，定期检测（暴露后即刻、4 周、8 周、12 周检测乙肝两对半）与随访情况。对涉与的职业暴露者，均应注意做好 XX工作。每一个得到信息的机构或个人均应做好 XX工作 6.工作人员素质 实验室共有技术人员 9 名，其中申请进入 BSL-2实验室 9名。所有技术人员均参加过生物安全培训，熟知 HBV 实验 SOP与流程。7.评估结论 结合我站实验室的状况（BSL-2），依据卫生部病原微生物实验室生物安全管理条例中的相关要求，符合开展微生物病原体检测的条件。素使用的指征为在活动性复制中肝炎处于活动期血浓度低抗阳性使用干扰素治疗时剂量应偏大万万次疗程应偏长个并详细记录用药情况首次用药时间药物副作用情况包括肝肾功能化验结果用药的依从性状况定期检测暴露后即刻周如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出若样本外漏到标本容器外面应立即用浸有含氯消毒液的多重软布与擦拭标本