化妆品常用植物提取物中16种香豆素类化合物测定液质联用法(T-FSBMEA 0001—2023).pdf

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1、佛 山 市 生 物 医 学 工 程 学 会 团 体 标 准T/FSBMEA 00012023化妆品常用植物提取物中 16 种香豆素类化合物的测定 液质联用法SimultaneousDetermination of 16 Coumarin Compounds in Cosmetics PlantExtract RawMaterials by Ultra Performance Liquid Chromatography-MassSpectrometry2023-10-18 发布2023-10-19 实施佛山市生物医学工程学会发 布ICS 71.100.70CCS Y 42T T/FSBMEAT/

2、FSBMEA 00012023I目次前言.II1范围.12规范性引用文件.13术语和定义.14原理.15试剂和材料.16仪器和设备.37样品.38试验步骤.39结果计算.610精密度和准确度.611检出限和定量限.6附录 A（资料性）16 种香豆素化合物标准溶液典型提取离子图谱.8T/FSBMEA 00012023II前言本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由佛山市生物医学工程学会提出并归口。本文件起草单位：佛山市食品药品检验检测中心、佛山科学技术学

3、院、佛山市仁汇医药科技有限公司、佛山市安安美容保健品有限公司、广东诗妃化妆品有限公司本文件主要起草人：张艳萍、黄婉锋、何作民、杨安平、周宗洲、杨定霖、马志浩、郑衡阳。T/FSBMEA 000120231化妆品常用植物提取物中 16 种香豆素类化合物的测定 液质联用法1范围本文件规定了化妆品中常用植物提取物中 16 种香豆素类化合物的液质联用测定的原理、试剂和材料、仪器和设备、样品、试验步骤、结果计算、精密度、准确度以及检出限、定量限。本文件适用于液体类常用植物提取物中 16 种香豆素类化合物的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引

4、用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理样品提取后，采用高效液相色谱仪分离，质谱检测器检测。根据保留时间和特征离子对的相对丰度比定性、定量离子对峰面积定量，以标准曲线法计算含量。5试剂和材料除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。5.1试剂5.1.1乙腈：色谱纯。5.1.2甲酸：色谱纯。5.1.3甲醇：色谱纯。5.1.40.1%甲酸溶液：取 1 mL 甲酸（5.2）用水定容至 1000 mL，混匀。5

5、.2标准品香豆素、7-羟基香豆素、补骨脂素、7-甲基香豆素、异补骨脂素、8-甲氧基补骨脂素、欧前胡素、异欧前胡素、6,7-二甲氧基香豆素、新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮、4-甲基-7-羟基香豆素、4-甲基-7-乙氧香豆素、5-甲氧基补骨脂素、2,4,8-三甲基补骨脂素、环香豆素标准品纯度均98%。5.3标准储备溶液T/FSBMEA 000120232称取香豆素、7-羟基香豆素、补骨脂素、7-甲基香豆素、异补骨脂素、8-甲氧基补骨脂素、欧前胡素、异欧前胡素、6,7-二甲氧基香豆素、新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮、4-甲基-7-羟基香豆素、4-甲基-7-乙氧香豆素、5-甲氧基补骨脂素、2,4,8-

6、三甲基补骨脂素、环香豆素各 10 mg（精确到 0.0001g），分别置于 10 mL 棕色容量瓶中，用甲醇（5.1.2）溶解并定容至刻度，混匀。制成标准储备溶液的质量浓度均为 1000 mg/L。置于-18 以下冰箱中避光保存，有效期 3 个月。5.4混合标准准备溶液精密移取标准储备溶液（5.3）香豆素 4.0 mL、7-羟基香豆素、补骨脂素、7-甲基香豆素、异补骨脂素、8-甲氧基补骨脂素（5.3）2.0 mL，欧前胡素、异欧前胡素、6,7-二甲氧基香豆素、新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮（5.3）0.40 mL，4-甲基-7-羟基香豆素、4-甲基-7-乙氧香豆素、5-甲氧基补骨脂素、2,4,

7、8-三甲基补骨脂素、环香豆素（5.3）0.20 mL 置于 20 mL 棕色容量瓶中，用甲醇（5.1.2）并定容至刻度，摇匀，制成配制香豆素质量浓度范围为 80 g/mL，7-羟基香豆素、补骨脂素、7-甲基香豆素、异补骨脂素、8-甲氧基补骨脂素质量浓度范围为 40 g/mL，欧前胡素、异欧前胡素、6,7-二甲氧基香豆素、新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮质量浓度范围为 8.0 g/mL，4-甲基-7-羟基香豆素、4-甲基-7-乙氧香豆素、5-甲氧基补骨脂素、2,4,8-三甲基补骨脂素、环香豆素质量浓度范围为 4.0 g/mL的混合标准储备溶液。置于-18 以下冰箱中避光保存，有效期 1 个月。5.

8、5混合标准工作溶液的制备分别精密移取混合标准准备溶液 0.05 mL、0.125 mL、0.25 mL、0.50 mL、1.0 mL、2.0 mL 置于20 mL 棕色容量瓶中，用甲醇（5.1.2）并定容至刻度，摇匀，配制成混合标准工作溶液，各组分浓度见表 1（标准溶液浓度范围可根据实际情况进行调整）。混合标准工作溶液应现用现配。表 1香豆素等 16 种组分的混合标准工作溶液浓度序号名称混合基质标准工作溶液浓度（g/mL）1香豆素0.200.501.02.04.08.027-羟基香豆素0.100.250.501.02.04.03补骨脂素0.100.250.501.02.04.047-甲基香豆素

9、0.100.250.501.02.04.05异补骨脂素0.100.250.501.02.04.068-甲氧基补骨脂素0.100.250.501.02.04.07欧前胡素0.020.050.100.200.400.808异欧前胡素0.020.050.100.200.400.8096,7-二甲氧基香豆素0.020.050.100.200.400.8010新补骨脂异黄酮0.020.050.100.200.400.8011补骨脂二氢黄酮0.020.050.100.200.400.80124-甲基-7-羟基香豆素0.010.0250.050.100.200.40表 1香豆素等 16 种组分的混合标准工作

10、溶液浓度（续）序号名称混合基质标准工作溶液浓度（g/mL）134-甲基-7-乙氧香豆素0.010.0250.050.100.200.40145-甲氧基补骨脂素0.010.0250.050.100.200.40T/FSBMEA 000120233152,4,8-三甲基补骨脂素0.010.0250.050.100.200.4016环香豆素0.010.0250.050.100.200.406仪器和设备6.1高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪：配电喷雾离子源（ESI 源）。6.2分析天平：感量 0.0001 g 和 0.00001 g。6.3超声波清洗器。6.4涡旋混合仪。6.5高速离心机：转速不低于

11、 8000 r/min。6.6微孔滤膜：0.22 m。7样品柑橘类、石斛类、当归类、马齿苋类等化妆品常用植物提取物。8试验步骤8.1样品处理称取样品 1.0 g（精确至 0.001g）于 20 mL 棕色容量瓶中，加入适量甲醇（5.3），在涡旋混合仪上振荡 2 min 后，移至超声波清洗器超声提取 20 min，甲醇（5.3）定容，混匀后取适量溶液至离心管中，8000 r/min 离心 8 min，取上清液用 0.22 m 滤膜过滤，进样，分析测定。8.2仪器参考条件8.2.1色谱条件色谱柱：C18 柱（2.1 mm100.0 mm，1.7 m），或等效色谱柱流动相：A 为乙腈（5.1.1)，

12、B 为 0.1%甲酸溶液（5.1.2)，梯度洗脱程序见表 2。流速：0.30 mL/min柱温：30 进样量：1 L表 2梯度洗脱程序时间（min）流动相 A（%）流动相 B（%）0.005951.005952.002575T/FSBMEA 000120234表 2梯度洗脱程序（续）时间（min）流动相 A（%）流动相 B（%）7.0025759.00703011.00703013.00901015.00901015.1059517.105958.2.2质谱条件监测模式：正离子多反应监测模式（MRM），监测离子对及相关参数设定见表 3。毛细管电压：3600V毛细管温度：500离子源温度：150

13、表 316 种香豆素类化合物质谱检测参数序号名称保留时间(min)母离子（m/z）子离子（m/z）锥孔电压（V）碰撞电压(v)1香豆素5.40146.990.9*322076.92227-甲基香豆素8.33160.9104.9*342090.82037-羟基香豆素3.98162.9106.9*342276.82844-甲基-7-羟基香豆素4.73176.9120.9*3822104.9205补骨脂素8.18186.9130.9*342676.8366异补骨脂素8.43186.9130.8*342276.93474-甲基-7-乙氧香豆素9.19205.0176.9*104.932202286,7

14、-二甲氧基香豆素5.02207.0106.9*3634150.92298-甲氧基补骨脂素8.50217.0201.9*89.5362236105-甲氧基补骨脂素8.89217.0202.0*3424117.932T/FSBMEA 000120235表 316 种香豆素类化合物质谱检测参数（续）序号名称保留时间(min)母离子（m/z）子离子（m/z）锥孔电压（V）碰撞电压(v)112,4,8-三甲基补骨脂素9.70229.1141.8*4224173.02212异欧前胡素10.11271.1203.0*161290.84013欧前胡素9.76271.1146.9*1834202.91214环香

15、豆素10.42323.2120.9*2444251.01815新补骨脂异黄酮9.32323.2267.0*3218255.02016补骨脂二氢黄酮9.43325.264.8*3444148.924注 1：*为推荐的定量离子。注 2：当采用不同质谱仪器时，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。8.3定性判定取样品溶液与标准溶液在相同分析条件下测定，样品中如呈现定量离子对和定性离子对的色谱峰，被测成分的特征离子峰保留时间与标准溶液对应的保留时间一致，且选择的定性离子的相对丰度比与相当浓度标准品溶液的定性离子的相对丰度比的最大偏差不超过表 4 规定的范围，则可以确定试样中检出对应的成分

16、。表 4定性确证时相对离子丰度比的最大允许偏差相对离子丰度（X）/%X5050X2020X10X10允许的最大偏差/%202530508.4定量测定取混合标准工作溶液（5.5）依次测定，以待测组分的系列浓度为横坐标，待测组分的峰面积为纵坐标，进行线性回归，绘制标准曲线，其线性相关系数应大于 0.99。取样品溶液测定，将对应的定量离子色谱峰面积代入线性回归方程。按第 9 章的公式计算样品中待测组分的含量。供试品溶液中待测组分的响应值应在标准曲线线性范围内。8.5平行试验按 8.1 条进行样品处理，按 8.2 条仪器参考条件进样，对同一样品进行平行试验测定。8.6空白试验除不加试样外，均按 8.1

17、 条进行条样品处理，按 8.2 条仪器参考条件进样，完成测定。T/FSBMEA 0001202369结果计算结果按式(1)计算：mDV(1)式中：样品中 16 种香豆素类化合物的质量分数，mg/kg；供试品溶液中 16 种香豆素类化合物质量浓度，g/mL；V样品定容体积，mL；m样品取样量，g；D稀释倍数（如未稀释则为 1）。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。10精密度和准确度定量下限浓度回收率为 70%120%，相对标准偏差小于 9.5%（n=6），中、高浓度回收率为

18、 85%115%，相对标准偏差小于 8.0%（n=6）。11检出限和定量限本方法中各组分的检出限、定量下限和取样量为 0.2 g 时的检出浓度、最低定量浓度见表 5。表 516 种香豆素类化合物的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度序号组分名称检出限（g/L）定量下限（g/L）检出浓度（g/kg）最低定量浓度（g/kg）1香豆素0.180.618.060.027-羟基香豆素0.130.4313.043.03补骨脂素0.280.9328.093.047-甲基香豆素0.230.7723.077.05异补骨脂素0.270.927.090.068-甲氧基补骨脂素0.10.3310.033.07欧前

19、胡素0.030.13.010.08异欧前胡素0.010.0331.03.396,7-二甲氧基香豆素0.010.0331.03.310新补骨脂异黄酮0.0070.0220.72.211补骨脂二氢黄酮0.0130.0451.34.5124-甲基-7-羟基香豆素0.0060.020.62.0134-甲基-7-乙氧香豆素0.180.60.72.2T/FSBMEA 000120237表 516 种香豆素类化合物的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度（续）序号组分名称检出限（g/L）定量下限（g/L）检出浓度（g/kg）最低定量浓度（g/kg）145-甲氧基补骨脂素0.130.430.82.8152,

20、4,8-三甲基补骨脂素0.280.930.31.016环香豆素0.230.770.62.0T/FSBMEA 000120238附录A（资料性）16 种香豆素化合物标准溶液典型提取离子图谱16 种香豆素化合物标准溶液典型提取离子图谱见图 A.1图 A.16。图 A.1香豆素提取离子图T/FSBMEA 000120239图 A.27-甲基香豆素提取离子图图 A.37-羟基香豆素提取离子图T/FSBMEA 0001202310图 A.44-甲基-7-羟基香豆素提取离子图图 A.5补骨脂素提取离子图T/FSBMEA 0001202311图 A.6异补骨脂素提取离子图图 A.74-甲基-7-乙氧香豆素提取离子图T/FSBMEA 0001202312图 A.86,7-二甲氧基香豆素提取离子图图 A.98-甲氧基补骨脂素提取离子图T/FSBMEA 0001202313图 A.105-甲氧基补骨脂素提取离子图图 A.112,4,8-三甲基补骨脂素提取离子图T/FSBMEA 0001202314图 A.12异欧前胡素提取离子图图 A.13欧前胡素提取离子图T/FSBMEA 0001202315图 A.14环香豆素提取离子图图 A.15补骨脂异黄酮提取离子图T/FSBMEA 0001202316图 A.16补骨脂二氢黄酮提取离子图