DB23∕T 2488-2019 土壤 硝基芳烃的测定 高效液相色谱法.docx

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1、ICS13.080Z18DB23地方标准DB23/T24882019土壤硝基芳烃的测定高效液相色谱法（报批稿）2019-11-20发布2019-12-19实施黑龙江省市场监督管理局发布DB23/T24882019目次前言.II1范围.12规范性引用文件.13方法原理.14试剂和材料.15仪器和设备.26样品.27分析步骤.38结果计算和表示.39精密度和准确度.410质量保证与质量控制.511注意事项.5附录A（规范性附录）方法的检出限和测定下限.6附录B（资料性附录）目标物的基本信息和保留时间.7附录C（资料性附录）方法的精密度和准确度.8IDB23/T24882019前言本标准依据GB/T

2、1.1-2009给出的规则编写。本标准由黑龙江省生态环境厅提出并归口。本标准参与起草单位：哈尔滨市环境监测中心站，黑龙江科瑞检测技术有限公司。本标准起草人:王伟华、陈莹、王娜、刘蕊、张万峰、白昕、腾世长、陈姝蓉、张京、孟冰冰、张景欣、王雅辉、屈红艳、张立彬。IIDB23/T24882019土壤硝基芳烃的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了测定土壤中硝基芳烃的高效液相色谱法。本标准适用于土壤中硝基苯（NB）、1,3-二硝基苯（1,3-DNB）、1,3,5三硝基苯（1,3,5-TNB）、邻硝基甲苯（2-NT）、间硝基甲苯（3-NT）、对硝基甲苯（4-NT）、2,4-二硝基甲苯（2,4-DNT）、2

3、,6-二硝基甲苯（2,6-DNT）、4-氨基-2,6-二硝基甲苯（4-Am-DNT）、2-氨基-4,6-二硝基甲苯（2-Am-DNT）等10种硝基芳烃的测定。本标准中，当取样量为20.0g时，10种硝基芳烃的方法检出限为0.01mg/kg0.06mg/kg，测定下限为0.04mg/kg0.24mg/kg，具体结果详见附录A。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。HJ/T166土壤环境监测技术规范HJ613土壤干物质和水分的测定重量法3方法原理土壤中的硝基芳烃用

4、乙腈或甲醇萃取后，取上清液用高效液相色谱分离，紫外检测器检测，根据保留时间定性，外标法定量。4试剂和材料除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂和实验用水。4.1乙腈（CH3CN）：HPLC级。4.2甲醇（CH3OH）：HPLC级。4.3硝基芳烃标准贮备液：=1000mg/L。使用有证标准溶液（硝基苯、1,3-二硝基苯、1,3,5三硝基苯、邻硝基甲苯、间硝基甲苯、对硝基甲苯、2,4-二硝基甲苯、2,6-二硝基甲苯、4-氨基-2,6-二硝基甲苯、2-氨基-4,6-二硝基甲苯），于-10下冷藏、避光保存，或参照标准溶液证书进行保存。使用时应恢复至室温并摇匀。4.4硝基芳烃标准使用液：=1

5、0.0mg/L。用乙腈（4.1）或甲醇（4.2）稀释硝基芳烃标准贮备液（4.3），于4下冷藏、避光保存。4.5石英砂：300830m（5020目）。1DB23/T24882019在马弗炉中400下灼烧4h，置于干燥器中冷却至室温，转移至磨口玻璃瓶中保存。5仪器和设备5.1高效液相色谱仪：配套紫外检测器，具有梯度洗脱功能。5.2色谱柱：填料为ODS（十八烷基硅烷键合硅胶），填料粒径5m，柱长250mm，内径4.6mm的反相色谱柱或其它性能相近的色谱柱。5.3采样瓶：具聚四氟乙烯内衬盖的250ml螺纹棕色玻璃瓶。5.4提取瓶：100ml，具聚四氟乙烯-硅胶衬垫螺旋盖的玻璃瓶。5.5水平振荡器：振荡

6、频率50250次/min左右。5.6超声波提取器：35Hz，有效高频功率至少为140W，水浴温度能控制在305及505。5.7玻璃注射器：可装0.45m滤膜。5.8离心机：转速10003000r/min。5.9便携式冷藏箱：控温4以下。5.10天平：感量为0.01g。5.11一般实验室常用仪器和设备。6样品6.1样品采集和保存按照HJ/T166的相关规定进行土壤样品的采集和保存。用铁铲或不锈钢勺将样品尽快采集至采样瓶（5.3）中，并填满。快速清除掉样品瓶螺纹及外表面上黏附的样品，密封样品瓶，避光保存。如不能及时分析，于4以下冷藏，避光保存，在5d内完成提取。6.2试样的制备除去样品中的枝棒、叶

7、片、石子等异物，称取20g（准确至0.1g）均质化土壤鲜样于提取瓶（5.4）中，加入40ml乙腈（4.1）或甲醇（4.2）后，盖上盖子，密封。经短暂手摇后，将提取瓶置于水平振荡器（5.5）上，振荡18h后，静止沉降30min，取上层清液待测。如有必要，上层清液可经0.45m滤膜（5.7）过滤或离心机（5.8）离心后待测。也可以采用超声波（5.6）提取，在305下超声提取18h，或在505下超声提取5h，静止沉降30min，取上层清液待测。在提取过程中，水浴的水位应至少比提取瓶中的溶剂位高出1cm。提取后的目标物如不能及时分析，可于4条件下暗处冷藏存放，保存7d。6.3空白试样的制备以石英砂（4

8、.5）代替样品，按照与试样的制备（6.2）相同的步骤进行空白试样的制备。6.4干物质含量的测定2时间（min）A%B%05842304852356040381000405842455842DB23/T24882019按照HJ613测定土壤样品干物质含量。7分析步骤7.1色谱参考条件进样量：10l；柱温：30；流速：1.0ml/min；流动相A：甲醇；流动相B：水；检测波长：254nm。梯度洗脱程序见表1。表1梯度洗脱程序7.2标准曲线的建立分别量取5l、10l、20l、50l、100l的硝基芳烃标准使用液（4.4），用乙腈（4.1）或甲醇（4.2）稀释，制备5个浓度点的标准系列，硝基芳烃的质量

9、浓度分别为0.05g/ml、0.10g/ml、0.20g/ml、0.50g/ml和1.00g/ml（此为参考浓度），由低浓度到高浓度依次对标准系列溶液进样，以标准系列溶液中目标物组分浓度为横坐标，以其对应的峰面积（峰高）为纵坐标，建立标准曲线。在推荐的仪器条件下，10种硝基芳烃目标物在C18柱上的色谱图保留时间见附录B。7.3试样测定按照与标准曲线的建立（7.2）相同的步骤进行试样（6.2）的测定。7.4空白试验按照与试样测定（7.3）相同的步骤进行空白试样（6.3）的测定。8结果计算和表示8.1定性分析根据样品中目标物与标准系列中目标物的保留时间进行定性，可采用标准添加法、不同波长下的吸收比

10、或扫描紫外吸收光谱等方法辅助定性。8.2结果计算土壤样品中硝基芳烃的含量（mg/kg），按照公式（1）进行计算。wi=rivmwdm.(1)3DB23/T24882019式中：wi样品中组分i的含量，mg/kg；ri标准曲线中所得组分i的浓度，g/ml；v提取液体积（乙腈或甲醇体积+样品含水量），ml；m样品量（湿重），g；wdm土壤样品干物质含量，%。土壤样品中干物质含量wdm和wH2O，分别按照式（2）和（3）进行计算：wdm=wH2O=(m2-m0)(m1-m0)(m1-m2)(m2-m0)100.(2)100.(3)式中：wdm土壤样品中的干物质含量，%；wH2O土壤样品中的含水量，%

11、；m0带盖容器的质量，g；m1带盖容器及新鲜土壤试样的总质量，g；m2带盖容器及烘干土壤的总质量，g。测定结果精确至0.1%。8.3结果表示测定结果小数位数与方法检出限保持一致，最多保留三位有效数字。9精密度和准确度9.1六家实验室的精密度统计结果对浓度为0.50mg/kg、40.0mg/kg的实际土壤加标样品进行6次平行测定，目标物的实验室内相对标准偏差分别为：2.6%10%，2.2%10%；实验室间相对标准偏差分别为：7.7%16%，5.1%16%；重复性限范围分别为：0.09mg/kg0.12mg/kg，5.45mg/kg8.12mg/kg；再现性限范围分别为：0.12mg/kg0.22

12、mg/kg，7.93mg/kg17.4mg/kg，具体结果详见附录C。9.2六家实验室的准确度统计结果对浓度为0.50mg/kg、40.0mg/kg的实际土壤加标样品进行6次平行测定，目标物的加标回收率分别为：74.0%115%，74.2%115%，具体结果详见附录C。4DB23/T2488201910质量保证与质量控制10.1空白测定本标准规定每20个样品或每批次（少于20个样品/批）应至少测定一个实验室空白样品，目标物浓度应小于方法检出限。如果目标物有检出，需查找原因。10.2校准本标准规定标准曲线至少需5个浓度点，校准曲线的相关系数应大于等于0.995，每20个样品或每批次（少于20个样

13、品/批）分析1次标准曲线中间点，其测定结果与标准曲线相应点标准值的相对误差不超过20%，否则应查找原因或重新绘制标准曲线。10.3平行样测定本标准规定每20个样品或每批次（少于20个样品/批）至少分析一个平行样，单次平行样测定结果相对偏差应小于等于30%。10.4加标样测定每20个样品或每批次（少于20个样品/批）至少分析1个基体加标样，样品中目标物加标回收率应在60%120%之间。11注意事项11.1实验中产生的废物应集中收集分类保管，并送具有资质的单位统一处置。11.2为了防止采样工具污染，在使用前要用甲醇、纯净水充分洗净。在采集其它样品时，要注意更换采样工具和清洗采样工具，以防止交叉污染

14、。11.3在样品的保存和运输过程中，要避免沾污，样品应放在便携式冷藏箱中冷藏贮存。11.4在分析过程中必要的器具、材料、药品等应事先分析测定有无干扰目标物测定的物质。器具、材料可采用甲醇清洗，尽可能除去干扰。11.5试样提取时，应注意提取瓶的密封，避免由于振荡或超声提取过程造成目标物的损失。5序号目标物中文名称检出限（mg/kg）测定下限（mg/kg）1硝基苯0.010.0421,3-二硝基苯0.020.0831,3,5-三硝基苯0.020.0842-硝基甲苯0.060.2453-硝基甲苯0.050.2064-硝基甲苯0.060.2472,4-二硝基甲苯0.020.0882,6-二硝基甲苯0.

15、020.0894-氨基-2,6-二硝基甲苯0.020.08102-氨基-4,6-二硝基甲苯0.020.08DB23/T24882019AA附录A（规范性附录）方法的检出限和测定下限A.1目标物的检出限和测定下限当土壤取样量为20.0g时，10种目标物的方法检出限和测定下限见表A.1。表A.1方法的检出限和测定下限6中文名称CAS号英文名称简称保留时间（min）1,3,5-三硝基苯99-35-41,3,5-Trinitrobenzene1,3,5-TNB6.4391,3-二硝基苯99-65-01,3-Dinitrobenzene1,3-DNB8.6414-氨基-2,6-二硝基甲苯19406-51

16、-04-Amino-2,6-dinitrotoluene4-Am-DNT9.1712-氨基-4,6-二硝基甲苯35572-78-22-Amino-4,6-dinitrotoluene2-Am-DNT9.595硝基苯98-95-3NitrobenzeneNB10.7392,6-二硝基甲苯606-20-22,6-Dinitrotoluene2,6-DNT11.5062,4-二硝基甲苯121-14-22,4-Dinitrotoluene2,4-DNT11.7562-硝基甲苯88-72-22-Nitrotoluene2-NT14.1323-硝基甲苯1999-8-13-Nitrotoluene3-NT1

17、5.7944-硝基甲苯99-99-04-Nitrotoluene4-NT17.092DB23/T24882019BB附录B（资料性附录）目标物的基本信息和保留时间B.1目标物的基本信息和保留时间目标物的CAS号、英文名称、简称及保留时间见表B.1。表B.1目标物的CAS号、英文名称、简称及保留时间7目标物加标浓度（mg/kg）测试含量（mg/kg）实验室内RSD（%）实验室间RSD（%）重复性限（mg/kg）再现性限（mg/kg）回收率均值（%）加标回收率P2SPNB0.500.424.29.58.00.090.1284.284.21340.035.94.48.85.16.677.9389.6

18、89.691,3-DNB0.500.464.58.7160.090.2293.093.03040.038.23.48.8146.9416.495.595.5271,3,5-TNB0.500.484.29.1100.090.1696.196.12040.037.22.87.0165.4517.493.193.1302-NT0.500.533.99.88.20.110.161051051740.038.23.08.2156.1816.795.595.5283-NT0.500.474.09.7140.100.2094.994.92640.034.33.08.26.65.728.2385.885.81

19、14-NT0.500.497.09.67.70.120.1597.097.01540.037.02.29.1115.9213.192.692.6212,4-DNT0.500.504.39.09.60.100.161001001940.038.63.7109.16.9211.796.593.9102,6-DNT0.500.495.3109.60.120.1797.497.41940.040.53.19.88.58.1212.1101101174-Am-DNT0.500.512.69.88.70.110.161021021840.040.22.88.48.36.0110.8100100172-Am-DNT0.500.494.19.8150.090.2297.697.62940.037.43.68.2116.6513.493.593.522DB23/T24882019CC附录C（资料性附录）方法的精密度和准确度C.1方法的精密度和准确度方法的实验室内相对标准偏差、实验室间相对标准偏差、重复性限、再现性限和加标回收率等精密度和准确度指标见表C.1。表C.1实际土壤样品加标精密度和准确度汇总表_8