2023届高考生物考前梳理-选择性必修3生物技术与工程实验-4.土壤中分解尿素的细菌的分离和计数.docx

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1、2023届高考生物考前梳理-选必3 生物技术与工程实验4.土壤中分解尿素的细菌的分离和计数实验目的（1）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌。（2）统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌。实验原理绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，利用以尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分离尿素的细菌。常见的分解尿素的微生物：芽孢杆菌、小球菌、棒状杆菌等细菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。实验步骤（1）土壤取样取样地点要求：酸碱度接近中性的潮湿土壤。细菌适宜在该环境中生长。取样过程：铲去表层土（一般3 cm左右）。细菌绝大部分分布在距地表38 cm的土壤层。注意事

2、项：取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要灭菌。操作完成后，一定要洗手。（2）样品的稀释与涂布平板不同微生物在土壤中含量不同，分离不同的微生物采用不同的稀释度，以保证获得菌落数在30300之间适于计数的平板。测细菌数：一般用104、105、106稀释液。测放线菌：一般用103、104、105稀释液。测真菌数：一般用102、103、104稀释液。每个浓度至少设置4个平板，1、2、3平板是选择培养基（实验组，三个重复），4为牛肉膏蛋白胨培养基（用以判断选择培养基是否具有选择作用）；整个实验还要设置2个平板：不涂布稀释液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基，以验证培养基中是否含有杂菌。注意事项：本实验使

3、用的平板和试管较多，为了避免混淆，最好在使用前做好标记。例如，在标记培养皿时应该注明组别、培养日期和平板上培养样品的稀释度等。（3）微生物的培养与观察培养条件：不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌一般在3037的温度下培养12 d。观察：每隔24 h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如形状、大小和颜色等。讨论（1）说出下列各组培养基目的。3组接种的选择培养基：对土壤中分解尿素的细菌分离和计数。1组接种的牛肉膏蛋白胨培养基：判断选择培养基是否具有选择作用。不

4、接种的选择培养基：验证选择培养基中是否含有杂菌。不接种的牛肉膏蛋白胨培养基：验证牛肉膏蛋白胨培养基中是否含有杂菌。（2）说出以下现象对应的结果分析。现象分析未涂布培养基上无菌落生长培养基未被杂菌污染未涂布培养基上有菌落生长培养基被杂菌污染牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目明显多于选择培养基上的菌落数目选择培养基具有选择作用（3）结合对照组，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。提示：如果没有接种的培养基上没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。如果接种后的完全培养基上的菌落数明显多于选择培养基上的菌落数，说明选择培养基筛选出了一些尿素分解菌。（4）你是否获得了某一稀释度下菌落

5、数为30300的平板？在这一稀释度下，是否至少有2个平板的菌落数接近？提示：如果得到了两个或多个菌落数为30300的平板，说明稀释度合适，操作比较成功，能够进行菌落的计数。（5）你统计的每克土样中能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他同学统计的结果接近吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？提示：如果使用同一土样进行的操作，数据应该比较接近。如果差异很大，就需要从操作是否规范、培养基配制是否合理等方面查找原因。进一步探究本活动只是初步筛选了能分解尿素的细菌，对分离的菌种进行鉴定还需要借助生物化学的方法。你可以查阅相关资料，进一步设计实验来鉴定自己分高的菌种。（1）原理细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，因此可以通过检测培养基pH的变化来判断是否发生了该化学反应，进而判断该菌是否为尿素分解细菌。（2）方法在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变红：液体培养基可以直接看液体的变色情况；固体培养基上可以观察菌落周围是否出现红色环带，红色环带直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越强。