高三一轮复习生物：PCR技术的应用课件.pptx

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1、基因工程娄底市第一中学微专题：PCR技术第2讲 PCR技术的应用一、回顾：娄底市第一中学PCR全称：原理：原料：过程：聚合酶链式反应DNA半保留复制4种脱氧核苷酸变性、复性、延伸二、PCR技术的应用娄底市第一中学1.获取目的基因第一次PCR第二次PCR第三次PCR55335335引1引21235122153531235122112122211小结：获取目的基因：通过在目的基因两端设计引物进行PCR来实现。PCR技术还可应用于病毒、细菌等病原体的检测（核酸检测），身份识别（DNA指纹）及包括DNA操作在内的一些科学研究中。娄底市第一中学例例1-1：常见的病毒疫苗有灭活疫苗、蛋白疫苗和重组疫苗等。

2、已知某甲流病毒的特异性蛋白N（具有抗原性）的cDNA编码序列（目的基因）如下图。为了制备稳定性更好的N蛋白疫苗，可以通过对目的基因加以改造，使PCR扩增出的编码序列在图中标记处的GTG改为ATG,再通过基因工程技术获得大量稳定蛋白N。2.定点诱变指在引物中改变个别碱基，不影响引物与模板链的结合，指在引物中改变个别碱基，不影响引物与模板链的结合，造成扩增产物发生基因突变的操作。造成扩增产物发生基因突变的操作。PCR技术的应用类型如何通过PCR来获得碱基发生改变的目的基因呢？请设计引物1、引物2的碱基序列。3 ATCGCCTAGAACGCTT 55 TGGATACGTAGTACAT 3娄底市第一中

3、学1.若要将基因内部的G/C碱基对替换成A/T碱基对，引物又该设计几种呢？如何设计？引物1引物2引物3引物45 TGGACACGTAGTACAT 35 ACATCGACACACAATC 35 TTCGCAAGATCCGCTA 35 GATTGTGTGTCGATGT 3 引物15 TGGACACGTAGTACAT.ACATCGACACGCAATC.TAGCGGATCTTGCGAA 33 ACCTGTGCATCATGTA.TGTAGCTGTGCGTTAG.ATCGCCTAGAACGCTT 5引物2PCR技术的应用类型2.定点诱变重叠延伸PCR技术2.进行PCR时是4种引物一起加入，还是两两分组加入

4、？3.两两分组加入进行PCR时又是哪两种引物为一组加入呢？引物3引物4娄底市第一中学PCR技术的应用类型GC引3T引2GG引3T引3T引2A引3T引2AGC引1C引4A引4AC引1T引4A引4A引1T混合引2A引1T引3T引4A引2A引1T娄底市第一中学PCR技术的应用类型例例1-21-2：重叠延伸PCR技术利用在需要诱变的位置合成两个带有变异基因碱基的互补引物，然后分别与引物a和引物d做PCR，这样得到的两个PCR引物产物都带有变异基因，并且彼此重叠，再将重叠部位进行重组PCR就能得到诱变PCR产物如图1请据图回答：图1，PCR扩增DNA的过程中，引物a、b、c、d中，PCR1应选择图1中引

5、物_，大量扩增突变产物AD则应选择引物_。重叠延伸PCR通过_实现定点突变。PCR1和PCR2需要分别进行的原因是_。引物b和引物c可以互补配对，导致引物失效在引物b和c上引入突变a和da和b娄底市第一中学PCR技术的应用类型定点诱变：端部突变、内部突变通过在引物中引入突变点碱基来实现。小结：娄底市第一中学1.定量分析:“定量分析定量分析”指在指在PCR反应体系中加入标记物，从反应体系中加入标记物，从而测算而测算PCR产物或模板的量的操作。产物或模板的量的操作。qPCR、RT-PCRPCR技术的应用类型1、TaqMan探针探针依据什么依据什么序列设计？序列设计？2、每个、每个DNA分子复制时结

6、分子复制时结合几个合几个TaqMan探针？探针？3、每增加一个、每增加一个DNA分子，分子，释放几个荧光分子？释放几个荧光分子？RNA（cDNA）内部的一段碱基序列一一娄底市第一中学例例2：若每分子探针水解释放若每分子探针水解释放的的R基因荧光强度为基因荧光强度为a，加入，加入的目的基因为的目的基因为b个，请根据图个，请根据图示过程，使用数学公式表示反示过程，使用数学公式表示反应体系中荧光信号强度应体系中荧光信号强度（Rn）与扩增次数（）与扩增次数（n）之间）之间的关系：的关系：。Rn=ab（2n-1）PCR技术的应用类型3、定量分析 qPCR、RT-PCR根据荧光分子的强度来计算PCR产物量或DNA模板量。一个DNA分子扩增n次，释放荧光分子的数量为2n-1。娄底市第一中学2、定点诱变：端部突变、内部突变通过在引物中引入突变点碱基来实现。总结：1、获取目的基因：通过在目的基因两端设计引物进行PCR来实现。