医学教研寄生虫课件实验课件15.pptx

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1、实验十五实验十五 病原学检查技术（一）病原学检查技术（一）技术操作技术操作：一、粪便直接涂片法一、粪便直接涂片法二、碘液染色法二、碘液染色法三、饱和盐水浮聚法三、饱和盐水浮聚法粪便直接涂片法粪便直接涂片法 用用以以检检查查蠕蠕虫虫卵卵、原原虫虫包包囊囊和和滋滋养养体体，方方法法简简单，卵少时易漏诊。单，卵少时易漏诊。（一）试剂：生理盐水（一）试剂：生理盐水（二）操作步骤：（二）操作步骤：滴加滴加1-21-2滴生理盐水于载玻片中央。滴生理盐水于载玻片中央。用竹签取火柴头大小粪便在生理盐水中调匀。用竹签取火柴头大小粪便在生理盐水中调匀。制成薄涂片，厚薄以能透过涂片看清印刷字为宜。制成薄涂片，厚薄以

2、能透过涂片看清印刷字为宜。先在低倍镜下查找，发现可疑物转高倍镜观察。先在低倍镜下查找，发现可疑物转高倍镜观察。注注意意：按按一一定定顺顺序序查查找找，勿勿漏漏掉掉视视野野；查查找找滋滋养养体体时时注意保温，涂片稍薄。注意保温，涂片稍薄。碘液染色法碘液染色法 常常用用于于肠肠道道原原虫虫包包囊囊的的检检查查，具具有有涂涂片片和和染染色色特特性性，便于观察内部结构。便于观察内部结构。操作步骤：操作步骤：滴滴1 1小滴碘液于载玻片上。小滴碘液于载玻片上。用竹棒取少许粪便在碘液中涂成薄涂片。用竹棒取少许粪便在碘液中涂成薄涂片。覆盖玻片镜检。先低倍镜再换高倍镜，不必用油镜。覆盖玻片镜检。先低倍镜再换高倍

3、镜，不必用油镜。碘液配方：碘液配方：碘化钾碘化钾4.0g4.0g，碘，碘2g2g，蒸溜水，蒸溜水100ml100ml。注注意意：涂涂片片应应均均匀匀，不不可可厚厚；碘碘液液不不可可多多，否否则则着着色色过过深，结构不易看清。深，结构不易看清。饱和盐水浮聚法饱和盐水浮聚法 饱饱和和盐盐水水比比重重较较大大，可可使使虫虫卵卵上上浮浮，集集中中于于液液体体表表面面，达达到到浓浓集集目目的的，以以提提高高检检出出率率。本本法法以以查查钩钩虫虫卵卵效果最好。效果最好。饱饱和和盐盐水水配配制制：将将食食盐盐徐徐徐徐加加入入盛盛有有沸沸水水容容器器内内，不不断断搅搅动动，直直至至食食盐盐不不再再溶溶解解为为

4、止止（100ml100ml水水加加353540g40g食食盐）。冷却后过滤，比重达盐）。冷却后过滤，比重达1.201.20即可应用。即可应用。操作步骤：操作步骤：黄豆大粪便（约黄豆大粪便（约1 1克）置盛有少量饱和盐水漂浮杯中。克）置盛有少量饱和盐水漂浮杯中。用竹签将粪便捣碎充分调匀后，加饱和盐水至杯口。用竹签将粪便捣碎充分调匀后，加饱和盐水至杯口。载玻片盖于杯口，玻片下不留气泡，静置载玻片盖于杯口，玻片下不留气泡，静置1515分钟。分钟。向上提起载玻片，迅速翻转，镜检向上提起载玻片，迅速翻转，镜检。实验十六实验十六 病原学检查技术（二）病原学检查技术（二）一、肺孢子菌瑞一、肺孢子菌瑞-姬氏染

5、色及观察姬氏染色及观察二、蔬菜中寄生虫检查：二、蔬菜中寄生虫检查：肺孢子菌瑞肺孢子菌瑞-姬氏染色法姬氏染色法 1取痰液涂片或肺组织印片，干燥待用。取痰液涂片或肺组织印片，干燥待用。2甲醇液固定甲醇液固定5min；3.3.染色：染色：水水平平放放置置标标本本，加加瑞瑞氏氏染染液液，覆覆盖盖标标本本，2min后后加加现现配配1：20姬姬氏氏工工作作液液数数滴滴，1530min后后流流水水冲冲洗洗，（切切勿勿先先倾倾倒倒染染料料再再冲冲洗洗，以以免免染染料料颗颗粒粒沉着），干后油镜观察。沉着），干后油镜观察。隐孢子虫改良抗酸染色法隐孢子虫改良抗酸染色法1将粪便在洁净载玻片上涂成薄膜，自然干燥将粪便在

6、洁净载玻片上涂成薄膜，自然干燥。2用甲醇液固定分钟。用甲醇液固定分钟。3染色：染色：1）石碳酸复红液滴涂片上，）石碳酸复红液滴涂片上，0分钟后流水冲洗；分钟后流水冲洗；2）硫酸液）硫酸液1分钟后流水冲洗；分钟后流水冲洗；3）孔雀绿液）孔雀绿液1分钟后流水冲洗，干后镜检。分钟后流水冲洗，干后镜检。金胺金胺-酚酚-改良抗酸染色法改良抗酸染色法试剂配制：试剂配制：A液：金胺酚液：金胺酚0,1g,石碳酸石碳酸5.0g,蒸馏水蒸馏水100ml;B液：液：盐酸盐酸3ml,95%酒精酒精 100ml;（脱色液）（脱色液）C液：液：高锰酸钾高锰酸钾0.5g,蒸馏水蒸馏水100ml;D液：酸性复红液：酸性复红4

7、.0g,95%酒精酒精 20ml,石碳酸石碳酸8ml,蒸馏水蒸馏水100ml;E液：液：浓硫酸浓硫酸10ml缓缓加入缓缓加入90ml蒸馏水中，边加边蒸馏水中，边加边F液：液：孔雀绿孔雀绿0.2g溶于溶于100ml蒸馏水中。蒸馏水中。染色过程：染色过程：1粪便涂成薄膜，干后甲醇固定粪便涂成薄膜，干后甲醇固定5min；2加加A液液10-15min后水洗；后水洗；3 加加B液液1-2min后水洗；后水洗；4 加加C液液1min后水洗，待干；后水洗，待干；5加加D液液5-10min后水洗；后水洗；6 加加E液液1-10min后水洗；后水洗；7加加F液液1后水洗；干后镜检。后水洗；干后镜检。背景呈蓝绿色

8、，卵囊圆形或椭圆形，呈玫瑰红色背景呈蓝绿色，卵囊圆形或椭圆形，呈玫瑰红色实验十七实验十七 免疫学实验免疫学实验 目的要求：目的要求：目的要求：目的要求：掌握寄生虫免疫学及基因诊断原理及优缺点，掌握掌握寄生虫免疫学及基因诊断原理及优缺点，掌握掌握寄生虫免疫学及基因诊断原理及优缺点，掌握掌握寄生虫免疫学及基因诊断原理及优缺点，掌握常用方法操作技术常用方法操作技术常用方法操作技术常用方法操作技术 技术操作技术操作:1.1.1.1.弓形虫弓形虫弓形虫弓形虫IHAIHAIHAIHA 2.COPT 2.COPT 2.COPT 2.COPT 3.3.3.3.尘螨皮内试验尘螨皮内试验尘螨皮内试验尘螨皮内试验弓

9、形虫弓形虫IHAIHA 原原理理：可可溶溶性性抗抗原原吸吸附附于于红红细细胞胞表表面面，与与相相应应抗抗体体结合发生凝集的现象。结合发生凝集的现象。优点：优点：操作简便，有较高敏感性和一定特异性。操作简便，有较高敏感性和一定特异性。缺缺点点：试试剂剂制制品品欠欠标标准准化化和和商商品品化化，易易发发生生非非特特异异性凝集。性凝集。已用于多种寄生虫病的诊断和流行病学调查。已用于多种寄生虫病的诊断和流行病学调查。操作步骤：操作步骤：1）每孔加每孔加75ul稀释液（稀释液（3滴）滴）2）第第1行第行第1孔加孔加25ul（1滴）阴性血清滴）阴性血清3）第第2行第行第1孔加孔加25ul（1滴）阳性血清滴

10、）阳性血清4）第第3行第行第1孔加孔加25ul（1滴）滴）PBS5）混匀稀释：从第混匀稀释：从第1孔取孔取25ul 加到第加到第2孔，依次进行孔，依次进行6）每孔加每孔加25ul 诊断液，诊断液，7）震荡）震荡12分钟，分钟，223723小时观察结果。小时观察结果。结果判定：结果判定：+红细胞形成明显凝集块，布满全孔底红细胞形成明显凝集块，布满全孔底+红细胞出现薄层凝块，面积较上者小红细胞出现薄层凝块，面积较上者小+红细胞部分沉积孔底，边缘松散，面积较小红细胞部分沉积孔底，边缘松散，面积较小+红细胞沉于孔底，周围有轻微凝集小点红细胞沉于孔底，周围有轻微凝集小点 红细胞沉于孔底，呈圆扣状，周边光

11、滑整齐红细胞沉于孔底，呈圆扣状，周边光滑整齐弓形虫弓形虫IHAIHA结果结果COPT皮内试验（皮内试验（intraderminal test，ID）原原理理：属属于于I型型变变态态反反应应。寄寄生生虫虫抗抗原原刺刺激激宿宿主主后后，集集体体产产生生相相应应抗抗体体，当当同同样样抗抗原原与与该该抗抗体体结结合合后后，导导致致肥肥大大细细胞胞和和嗜嗜碱碱性性粒粒细细胞胞脱脱颗颗粒粒，释释放放出出生生物物活活性性介介质质，引引起起注注射射抗抗原原的的局局部部出出现现红红肿肿。可可用用于于多多种种蠕蠕虫虫病病及及某某些些螨螨类类引引起起的的变变态态反反应应的的诊诊断断或或辅辅助助诊诊断断。在在寄寄生生

12、虫虫病病流流行行病病学学调调查查中中，主主要要用用于于初初筛筛检检查查，阳阳性性者者再再作作进进一一步步追追查查。该该法法简简便便、快快速速，但在多种但在多种 寄生虫病之间存在交叉反应。寄生虫病之间存在交叉反应。操作步骤：操作步骤：将将适适宜宜浓浓度度的的无无菌菌皮皮试试抗抗原原抽抽于于皮皮试试注注射射器器内内，皮皮肤肤消消毒毒后后，皮皮试试针针头头针针孔孔向向上上，在在前前臂臂屈屈面面表表皮皮内内层层注注射射抗抗原原0.03ml,形形成成皮皮丘丘。在在临临近近处处或或另另一一手手臂臂同同样样注注射射生生理理盐盐水水作作对对照照。15分钟后观察结果。分钟后观察结果。皮内试验结果皮内试验结果实验十八实验十八复习考试复习考试