抗生素效价微生物检定法.pdf

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1、抗生素效价微生物检定法1.概述一、抗生素的概念及抗生素的生物检定抗生素是由微生物所产生的极微量便 具有选择性地杀死或抑制其他病原微生物 生长的一类天然有机化合物。抗生素的生物检定是以貌生素对微生 物的抗菌效力作为效价的衡量标准。，抗生素的效价和单位抗生素的含量用效价和单位表示。该 词有时不加区别统称为效价单位。效价（potency）,指检品的实际 单位数与其标示量的比值。常表示为效价 的百分数。单位（unit,u）单位是衡量抗生素有 效成分的具体尺度。1、重量单位以抗生素的生物活性部分重量作单 位 1微克（ug）=l单位，1毫克=1 0 0 0单 位。2、类似重量单位以特定的纯粹抗生素盐类的重

2、 量作为1单位。如纯粹金霉素盐酸盐及四环素盐 酸盐（包括无生物活性的盐酸根在内）1微克（u g）=1单位，1毫克=1 0 0 0个单位。这是根据国际使用习惯而来的。3、质量折算单*以特定的纯抗生素盐的质量为 单位而加以折算。青霉素0.6ug为1单位4、特定单位 以特定的抗生素标准品的某一质量 定为一单位。微生物发的分类稀释法浊度法双碟法1稀释法是用培养基将待测抗生素稀释到一系列 的浓度，并依次分装到一系列的容器内，再加入等量的“试验菌株”菌液，放在37 保温箱内培养一定时间，观察哪一个稀释 度能抑制细菌生长，该稀释度即为测定终 点，再与同样处理的标准抗生素的终点比 较，即可求得待测抗生素的效价

3、。又一百n口 口口 中阜热sn 养青卯都 培财簿 体撞布荷 在通时之 素乱饰我 生筋匕献 抗邮JS 佣娜力娜O 飘的的长淙 连长值生方生度菌种 啦菌浊验的K出验菌试价 2试细对效3、管碟法：是利用抗生 素在含敏感试验菌的 琼脂培养基中的球面 扩散渗透作用，从而 形成一定的抑菌圈。通过琼脂培养基，可观 察并测量出抑菌圈的 大小。管碟法测定抗生素效价 原理和方法原理.在一定的抗生素浓 度范围内，对数剂量（浓 度）与抑菌圈的表面积或 直径成正比，可以得出 一条曲线。抗生素浓度换算成对，数，则抑菌圈直科即 生素对数成直线关系一触赫必咖1）89-1触赫西幅骷踹新管碟法的材料一，仪器菌种培养基培养皿牛角杯

4、陶瓦圆盖二，试剂无菌生理盐水ph6.0的磷酸缓冲液青霉素标准品储备液青霉素标准品使用液管碟法测定操作 1.试验用菌液金黄色葡萄球菌悬液：取金黄色葡萄球菌 的营养斜面培养物，接种于营养琼脂斜面 上，在3537培养20h到22h,；临用前用 水或者灭菌生理盐水溶液将菌苔洗下，备 用-2供试品及标准品的配制 标准品与样品从冰箱取出后，使与室温平衡。供 试品应放于干燥器内至少30min方可称取。称量 最好为一次取样称量，动作迅速，不得反复称取，取样后立即将称量瓶瓶盖盖好，以免吸水。标准品的称量最好用1/100,000克的分析天平，样品称量不得低于1/10,000克的分析天平。天平 中的干燥加入剂应保持

5、经常注意更换。称量结束后，超声波处理后的磷酸缓冲液，定容至刻度，过滤并稀释。双碟的制备:取内径90mm、高1617mm的平底双碟;注入加热融化的培养基20ml,使在碟底内均匀摊布，放置水平台上使凝固，作为底层。另取培养基适量加热融化后，放冷至48一50（芽抱可至60）,加入规定的试验菌悬液适量（能得清晰的抑菌圈为度。-）二剂量法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径 在 1824 mm。（二）抑菌圈的形成在平板底部四边，分别I 对角注明“SH”、I“SL”和“UH”、“UL”标记将不锈钢小管（俗祢为牛 津杯）放置在含敏感试验 菌的琼脂培养基上。以无菌滴管分别在每个 牛津杯内加入相应的抗 生素溶液至

6、满但不溢出 管外 且四杯内液面高度相同,盖上平皿盖，静置30分 钟。将培养基置入适宜试 验菌生长的培养箱中 琼脂培养基中的试验菌开始生长。4.抑菌圈的测量(1)测量抑菌圈可用游标卡尺或抑菌圈面 积测量仪，用卡尺测量时，眼睛视线 应与读书刻度垂直。(2)注意抑菌圈是否圆整，用卡尺测量时 可对每个抑菌圈作两次互为垂直测量。抑菌圈直径大小与抗生素浓度相关;比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。计算检品的效价 求出W和V W=(SH+TH)-(SL+TL)V=(TH+TL)-(SH+SL)TH供试品高剂量的抑菌圈 TL供试品低剂量的蝉圈 SH标准品高剂量的抑菌圈 SL标准品低剂量的

7、抑菌圈 求出0=D log(IV/W)0供试品和标准品的效价比 D标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般 为1 I高低剂量之比的对数，即Iog2或Iog4 Pr=Ar X 0 二 -Pr供试品实际单位数 Ar供试品标示量或估计单位药敏试验判定标准敏感性抑菌圈直经Em)16药度度度 耐低中高iZY-300 IV工多功能微生物自动测量分析仪多碟高效国际接轨 数码智能自动校准ZY-300系列产品仪器收载于中国药品检验标 准操作规范,通过国家计量院认证及国家药品监督局鉴定，获得了北京市质量技术监督局颁发的“制造计量器具许可证“，井荣获国家级新产品奖，符合2005版中国药典.是国家抗生素标准品标定专用仪器，GMP、GLP认证必备的检测仪器 药敏实验符合美国 NCCLS标准,已广泛用于医院临床检聆及各级畜牧兽医防疫站,菌落计数符合卫生学检查要求，适用于药品检测、生物制品检涌、环保部门及医院防疫部门等ZY-300系列产品仪器已高得了国家、省、地、县药检所、兽监所、畜 牧兽医站、医院及药厂、院校等数千家用户认可及使用