DB22_T 3316-2021 滞育松毛虫赤眼蜂生产技术规程.docx

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1、ICS65.020CCSB15DB22吉林省地方标准DB22/T33162021滞育松毛虫赤眼蜂生产技术规程CodeofpracticeforproductionofdiapauseTrichogrammadendrolimi2021-11-26发布2021-12-15实施吉林省市场监督管理厅发布DB22/T33162021前言本文件按照GB/T1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由吉林省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：吉林农业大学。本文件主要起草人：张俊杰、杜文梅、阮

2、长春、张雪。IDB22/T33162021滞育松毛虫赤眼蜂生产技术规程1范围本文件确立了滞育松毛虫赤眼蜂（TrichogrammadendrolimiIshii）生产的程序，规定了前期准备、赤眼蜂繁育、精选与储存等阶段的操作指示，描述了记录档案等追溯方法。本文件适用于利用柞蚕卵繁育的滞育松毛虫赤眼蜂工厂化生产。2规范性引用文件本文件没有规范性引用文件。3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1滞育诱导diapauseinduction利用持续低温诱导松毛虫赤眼蜂稳定进入滞育状态的一个过程。3.2滞育持续期diapausemaintenance赤眼蜂进入稳定滞育到解除滞育前的阶段。3.3滞育

3、解除diapausetermination通过条件控制，使赤眼蜂结束滞育期，继续发育至羽化出蜂的过程。4滞育赤眼蜂生产程序滞育松毛虫赤眼蜂生产分为3个阶段。程序流程图如图1所示：图1滞育松毛虫赤眼蜂工厂化生产流程5生产前准备1a)蜂种繁育室不低于20m；b)暖茧车间不低于300m；c)采卵室不低于50m；d)洗卵室不低于20m；e)消毒及晾干室不低于25m；f)接种室不低于10m；g)暗室不低于50m；h)发育室不低于50m；i)保鲜冷藏室不低于100m；j)物品保存库不低于20m。DB22/T331620215.1厂房及规模按照150亿头滞育松毛虫赤眼蜂生产规模应包括：22222222225

4、.2设备低温生化培养箱、药品保存箱、搅拌器、脱水机、烘干机、柞蚕卵色选机、空调、排风机、电暖气、加湿器、温湿度自控仪、电脑及打印机、发育盘架、手推运输车。5.3常用药品及材料5.3.125g/L30g/L苯扎溴铵溶液（新洁尔灭消毒液）。5.3.2孔径为0.15mm的纱网。5.3.3孔径为2.00mm的纱网。5.4蜂种5.4.1蜂种采集生产前1年的7月下旬至8月初，在自然条件下未放蜂玉米田采集玉米螟卵块，以半山区近水边为宜。5.4.2蜂种纯化采集的玉米螟卵块带回室内发育培养，将寄生变黑的卵块单独装入试管，羽化出蜂后引单头雌蜂，放入装有100粒米蛾卵的试管（10mm70mm）转接寄生。发育条件为（

5、251）、RH（755）%、光照16h、黑暗8h。5.4.3松毛虫赤眼蜂鉴定根据雄性赤眼蜂外生殖器的形态特征进行种类鉴定，参照附录A执行。5.4.4蜂种滞育保存鉴定纯化的松毛虫赤眼蜂，经3代5代筛选繁殖，建立实验种群后保存使用：a)将纯化的松毛虫赤眼蜂蜂种在(251)、RH(755)%条件下，按蜂卵（柞蚕卵）比2:1接种24h后去除种蜂；b)接蜂后发育36h46h到幼虫中期，置入12、RH(755)%的条件下，滞育诱导30d，赤眼蜂滞育；2DB22/T33162021c)将滞育持续期的赤眼蜂置入(31)、RH(755)%的条件下，进行滞育解除60d90d；d)经1048h、1524h过渡后，按

6、光照16h，(251)、RH(755)%；黑暗8h，(201)、RH(755)%，变温发育至出蜂。5.5柞蚕茧5.5.1备茧5.5.1.1备茧时期在生产前一年的11月12月份开始按预定计划备茧。5.5.1.2茧质要求5.5.1.2.1健康雌茧率90%；5.5.1.2.2雄茧率7%；5.5.1.2.3死伤茧率3%；5.5.1.2.4割口茧率8%；5.5.1.2.5发育蛹和嫩蛹5%；5.5.1.2.6茧层率10%，无薄皮茧、瘪茧；5.5.1.2.7茧干燥，未在-3以下低温储存。5.5.1.3备茧数量按每繁150亿头松毛虫赤眼蜂用茧15000kg计算。5.5.2蚕茧保存5.5.2.1保存温度(31)

7、、RH(605)%。5.5.2.2适当通风换气，保持空气含氧量。5.5.2.3防止接触有毒有害物质。5.5.2.4储存时间不低于45d。6工厂化生产6.1灭菌消毒在生产前1周，将所有繁蜂车间及繁蜂工具，进行集中消毒。消毒方法为如下：a)首先对消毒对象进行清水或0.5%1%氢氧化钠、1%的漂白粉水冲洗；b)用生石灰或石灰水对繁蜂车间喷刷覆盖；c)将繁蜂工具等置于繁蜂车间内，用毒消散或硫磺等熏蒸消毒。保持室温24以上，RH75%以上，时间24h。6.2蜂种复壮与扩繁6.2.1复壮根据生产计划，定期对松毛虫赤眼蜂蜂种，以米蛾卵和柞蚕卵交替繁育复壮：a)接蜂比例：米蛾卵蜂卵比1：200，柞蚕卵蜂卵比1

8、:1；3DB22/T33162021b)接蜂时间：24h；c)发育条件：(251)、RH(755)%、光照16h、黑暗8h；d)复壮周期：30d。6.2.2扩繁以柞蚕卵为寄主，将蜂种扩繁2代3代：a)接蜂比例：1：30（蜂种寄生柞蚕卵：新鲜卵）；b)接蜂时间：24h；c)接蜂条件：全黑暗，(251)、RH(755)%；d)发育条件:同6.2.1c)；e)将末1代蜂种发育至幼虫中后期置于(31)、RH(755)%条件下冷藏，冷藏时间15d。6.3寄主卵6.3.1暖茧发蛾暖茧室保持1822，RH(705)%，20d25d后柞蚕茧羽化出蛾。6.3.2收蛾在柞蚕蛾羽化期内，随时采收刚羽化（展翅前）雄蛾

9、，避免交尾，次日清晨人工收雌蛾，用于当天繁蜂或储存在(31)的冷库中备用。6.3.3剖腹取卵用人工方法将柞蚕雌蛾腹部与头胸部分离，剖腹取卵。6.3.4洗卵用搅拌器将卵与蛾腹内杂物搅拌分离，漂净杂物，然后反复用清水冲洗至卵粒无杂质。6.3.5卵面消毒将清洗干净的新鲜卵用0.1%的苯扎溴铵溶液浸泡10min。6.3.6脱水晾卵消毒后的新鲜卵用纱网袋装好，用脱水机进行初步脱水，然后用烘干机烘干，温度不超过2528。6.3.7清除绿卵烘干的新鲜卵用色选机等专用设备清除绿卵后，再用于接蜂，绿卵率4%。6.4接蜂蜂种卵与新鲜柞蚕卵按1:251:30比例进行接蜂。当蜂种羽化25%30%时，将种蜂卵均匀撒在接

10、蜂盘中，铺上孔径为2mm的纱网，再将新鲜卵平铺到纱网上，送入(251)、RH(755)%的暗室内产卵寄生，36h48h后，去除蜂种，标明日期送入发育室发育。6.5培养发育4DB22/T33162021接蜂后的寄生卵分批次送入(251)、RH(755)%，自然光照条件下的发育室，继续发育12h24h，镜检至幼虫中后期。6.6滞育诱导将发育到幼虫中后期的松毛虫赤眼蜂，在1012、RH(755)%的全暗条件下，平铺在卵盘内，卵厚3cm4cm，每天翻动两次，诱导25d30d后，赤眼蜂滞育。6.7滞育解除诱导滞育结束后即进入到滞育持续期，将滞育的赤眼蜂转入(31)、RH(755)%的黑暗条件下滞育解除，

11、时间70d90d。6.8变温发育滞育解除后的赤眼蜂采用分步渐变加温的方式进行发育：a)在(101)、RH(755)%全暗条件下加温48h；b)在（151）、RH(755)%全暗条件下加温24h；c)在日间25下16h、夜间20下8h，RH(755)%室内条件下发育至蛹后期。7精选与储存7.1精选将发育至蛹后期的赤眼蜂寄生卵，用绿卵色选机去除未寄生卵、劣质卵、绿卵及其它杂质。7.2储存将精选后的赤眼蜂转入(31)、RH(755)%的保鲜冷藏室储存备用，储存时间7d。8记录档案建立滞育松毛虫赤眼蜂工厂化生产档案，对整个生产过程进行详实记录，保存2年以上，做到可追溯：a)每天的温湿度记录；b)每批次

12、滞育赤眼蜂的生产日期；c)每批次滞育赤眼蜂的滞育率和解除滞育率；d)每批次滞育赤眼蜂的加温日期。5DB22/T33162021AA附录A（资料性）松毛虫赤眼蜂形态学鉴定方法A.1制作鉴定玻片将用浓度75%95%酒精浸泡的雄性赤眼蜂标本按下列方法制作为玻片：a)在5%的KOH溶液中浸泡8h15h，并用水清洗干净，置于载玻片上；b)在解剖镜下，用昆虫针挑取雄蜂的外生殖器，清除其他组织，盖好盖玻片；c)在显微镜下观察并测量阳基背突、腹中突及D值。A.2观察测量并鉴定在显微镜下观察赤眼蜂雄性外生殖器并测量其阳基背突、腹中突及D值，符合下列特征的属于雄性松毛虫赤眼蜂：a)阳基背突有明显宽圆形的侧叶，末端达D值的3/4；b)腹中突的长度约等于D值的3/53/4；c)钩爪末端伸达D值的3/4。图A.1松毛虫赤眼蜂雄性外生殖器-阳基_6