DB37_T 4484-2021 小麦种子活力测定 加速老化法、干旱胁迫法、盐胁迫法.docx

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1、ICS65.020.20CCSB2137山东省地方标准DB37/T44842021小麦种子活力测定加速老化法、干旱胁迫法、盐胁迫法Wheatseedvigourtestbyacceleratedageingtest,droughtstresstest,saltstresstest2021-12-29发布2022-01-29实施山东省市场监督管理局发布DB37/T44842021目次前言.II1范围.12规范性引用文件.13术语和定义.14缩略语.25测定原理.25.1加速老化法.25.2干旱胁迫法.25.3盐胁迫法.26测定方案.26.16.26.36.4总则.2样品.2测定平台.2测定条件.

2、27试材和设备.37.1试材.37.2设备.38试验步骤.38.1加速老化法.38.2干旱胁迫法.48.3盐胁迫法.59试验数据处理.69.19.29.39.4加速老化法.6干旱胁迫法.7盐胁迫法.7重新试验.810结果计算和表示.911结果报告.9附录A（资料性）小麦种子活力测定发芽试验原始记录表.11附录B（资料性）小麦种子活力测定结果报告单.12参考文献.13IDB37/T44842021前言本文件按照GB/T1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由山东省农业农村厅提出并

3、组织实施。本文件由山东省农业标准化技术委员会种植业分技术委员会归口。IIDB37/T44842021小麦种子活力测定加速老化法、干旱胁迫法、盐胁迫法1范围本文件规定了小麦(TriticumaestivumL.)种子活力测定干旱胁迫法、加速老化法、盐胁迫法的测定原则、测定方案、测定程序和结果报告。本文件适用于冬小麦和春小麦品种的种子活力测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T3543.2农作物种子检验规程扦样GB/T3543

4、.4农作物种子检验规程发芽试验GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示与判定GB/T26462种子发芽纸3术语和定义GB/T3543.2界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1种子活力seedvigour在广泛的田间条件下，决定种子迅速整齐出苗和长成正常幼苗潜在能力的总称。3.2种子批seedlot同一来源、同一品种、同一年度、同一时期收获和质量基本一致、在规定数量之内的种子。来源：GB/T3543.21995，3.13.3送验样品submittedsample送到种子检验机构检验、规定数量的样品。来源：GB/T3543.21995，3.43.4试验样品（简称“试样”）workings

5、ample在实验室中从送验样品中分出的部分样品，供测定某一检验项目之用。来源：GB/T3543.21995，3.53.5加速老化测定acceleratedageingtest将试样置于高温高湿条件下进行人工老化处理，处理后进行标准发芽试验，统计正常幼苗数，计算发芽率。3.6干旱胁迫测定droughtstresstest1DB37/T44842021将试样置于含高渗溶液的发芽床上进行干旱胁迫发芽试验，定期统计正常幼苗数，计算发芽率。3.7盐胁迫测定saltstresstest将试样置于含高盐溶液发芽床上进行盐胁迫发芽试验，定期统计正常幼苗数，计算发芽率。4缩略语下列缩略语适用于本文件。AAT:加

6、速老化测定（AcceleratedAgeingTest）DST:干旱胁迫测定（DroughtStressTest）SST:盐胁迫测定（SaltStressTest）5测定原理5.1加速老化法采用高温高湿处理种子，加速种子老化，其劣变程度在几天内相当于数月或数年之久的自然劣变程度。高活力种子经一定条件的老化处理后仍能正常发芽，低活力种子则产生不正常幼苗甚至丧失生活力。因此，加速老化法能较好地预测田间出苗率和种子耐贮藏性。5.2干旱胁迫法小麦播种常遇干旱等逆境胁迫，将种子置于干旱胁迫环境中，模拟田间逆境条件，观察种子发芽成苗的能力。高活力种子耐旱、抗旱能力强，经一定条件的干旱胁迫下仍能正常发芽，而

7、低活力则产生不正常幼苗甚至丧失生活力。因此，干旱胁迫法能较好地预测田间出苗率。5.3盐胁迫法小麦播种常遇到盐碱等逆境胁迫，将种子置于一定条件的盐胁迫环境中，模拟田间逆境条件，观察种子发芽成苗的能力。高活力种子细胞膜系统完整且修复快，抗盐、耐盐能力强，盐胁迫下仍能正常发芽，而低活力种子则产生不正常幼苗甚至丧失生活力。因此，盐胁迫法能较好地预测田间出苗情况。6测定方案6.1总则在严格控制条件下，对试样按模拟逆境处理、标准发芽、数据分析的程序（加速老化法）和模拟逆境发芽、数据分析的程序（干旱胁迫法、盐胁迫法）进行测定。按规定要求填报测定结果，测定报告应注明测定方案所规定的条件。6.2样品送验样品为小

8、麦种子，重量应不低于1000g。6.3测定平台人工气候箱、光照培养箱、发芽室或其它能够精准控温的发芽环境。6.4测定条件2DB37/T44842021种子活力测定应在有利于正确实施测定的控制条件下进行，包括但不限于下列条件：种子检验员具备熟悉所使用测定方法的知识和技能；所有仪器与使用的技术相适应，并已经过定期维护、验证和校准。7试材和设备7.1试材7.1.1老化盒：100mm100mm30mm等规格。7.1.2尼龙网袋：150mm100mm、400mm150mm等规格。7.1.3置种板：可辅助小麦种子置床，每次可平行或交错置种50粒或100粒。7.1.4数种板：可辅助数取一定数目的小麦种子。7

9、.1.5自封袋：12号（450mm340mm）等规格。7.1.6发芽盒（盘）：120mm120mm50mm等规格。7.1.7发芽纸：GB/T26462，110mm110mm、380mm255mm等规格。7.1.8试剂药品：次氯酸钠溶液、聚乙二醇6000（PolyethyleneGlycol-6000，PEG-6000）、氯化钠（NaCl）等。7.1.9其它：其它发芽装置、温湿度计、玻璃棒、三角瓶、镊子、蒸馏水、标签纸、纱布、油性记号笔、酒精等。7.2设备7.2.1人工老化处理设备：种子老化箱等。7.2.2发芽设备：人工气候箱、光照培养箱、发芽室、恒温循环槽或其它能够精准控温发芽的设备。7.2.

10、3消毒干燥设备：高压蒸汽灭菌锅、电热鼓风干燥箱等。8试验步骤8.1加速老化法8.1.1试样准备启封后，随机数取试样净种子100粒，4次重复，共400粒。种子老化处理前用1.0%的次氯酸钠溶液浸泡消毒5min，消毒后用无菌蒸馏水冲洗3遍，拭去种子表面浮水，备用。包衣种子可先柔性清洗然后消毒，或无须消毒处理。8.1.2试验材料准备发芽纸：将发芽纸1211高压蒸汽灭菌20min后，烘干备用。发芽盒：将发芽盒清洗干净后，用75%的酒精溶液擦拭消毒，风干备用。8.1.3加速老化测定将种子放入老化盒或尼龙网袋中，放入种子老化箱内，控制温度在410.3，相对湿度不低于98%，加速老化处理72h，取出，薄摊，

11、回干（自然晾干或在不高于60的条件下烘干），备用。纸上发芽：取2张发芽纸（110mm110mm），叠放入发芽盒（120mm120mm50mm）内，加入蒸馏水，充分润湿，用无菌纱布轻拭床面，除去余液和纸间气泡后，置种板辅助置种，纸边距1cm1.5cm。3DB37/T44842021种子置床后，盖上发芽盒盖，贴好标签并标注品种名称、样品编号、重复次数、置床时间等基本信息，后，放入人工气候箱。按照GB/T3543.4，200.5标准发芽8d统计正常幼苗数，计算发芽率。盖纸发芽：取2张发芽纸（110mm110mm），叠放入发芽盒（120mm120mm50mm）内，加入蒸馏水，充分润湿，用无菌纱布轻拭床

12、面，除去余液和纸间气泡后，置种板辅助置种，纸边距1cm1.5cm。种子置床后，加盖1张润湿的发芽纸，盖上发芽盒盖，贴好标签并标注品种名称、样品编号、重复次数、置床时间等基本信息，放入人工气候箱。按照GB/T3543.4，200.5标准发芽8d统计正常幼苗数，计算发芽率。卷纸发芽：用75%的酒精溶液消毒操作台，将2张发芽纸（380mm255mm）叠放好，用油性记号笔在发芽纸一角较小区域标识样品信息（或备样品信息防水条），如：样品名称、重复编号等。发芽纸用蒸馏水充分润湿，用无菌纱布轻拭床面，除去余液和纸间气泡后，置种板辅助交错置种，种孔朝向一致，纸边距5cm。种子置床后加盖1张润湿的发芽纸，将纸床

13、（或夹样品信息防水条）卷起，纸卷两端整平，并用皮筋扣住。将纸卷放入自封袋密封好（朝向一致），在自封袋上粘贴标签纸或用油性记号笔标识相关信息后，垂直放入人工气候箱（纸卷种孔端朝下）。按照GB/T3543.4，200.5标准发芽8d统计正常幼苗数，计算发芽率。同时按照GB/T3543.4，对未老化处理的试样种子进行标准发芽测定。200.5发芽8d统计正常幼苗数，计算发芽率。8.1.4检查管理在种子老化处理和发芽期间，应进行适当的检查管理，以维持原有老化处理及发芽条件。老化36h和发芽4d分别检查1次老化和发芽环境，若有问题及时进行相应维护。老化处理：温度保持在410.3范围内，相对湿度不低于98%

14、。发芽床检查：发芽床始终保持湿润。发芽温度检查：温度保持在200.5范围内。种子检查：发霉的种子应及时取出洗涤去霉。当发霉种子超过5%时，应更换发芽床，以免霉菌因素影响测定结果。如发现腐烂无生活力的种子，应及时去除并做好相应记载。8.1.5数据记录按照GB/T3543.4中正常幼苗、新鲜不发芽种子、硬实、不正常幼苗和死种子的鉴定标准进行数据统计，根据正常幼苗数，计算发芽率。8.2干旱胁迫法8.2.1试样准备启封后，随机数取试样净种子100粒，4次重复，共400粒。种子置床前用1.0%的次氯酸钠溶液浸泡消毒5min，消毒后用无菌蒸馏水冲洗3遍，拭去种子表面浮水，备用。包衣种子可先柔性清洗然后消毒

15、，或无须消毒处理。8.2.2试验材料准备发芽纸：将发芽纸1211高压蒸汽灭菌20min后，烘干备用。发芽盒：将发芽盒清洗干净后，用75%的酒精溶液擦拭消毒，风干备用。配制够量的15%的PEG-6000溶液。参考配制方法：称取PEG-6000溶质150g，溶于蒸馏水中，定容至1000mL，备用。8.2.3干旱胁迫测定4DB37/T44842021采取纸上或纸间（盖纸和卷纸）置床方式对小麦种子进行干旱胁迫测定。纸上发芽：取2张发芽纸（110mm110mm），叠放入发芽盒（120mm120mm50mm）内，加入PEG-6000溶液，充分润湿，用无菌纱布轻拭床面，除去余液和纸间气泡后，置种板辅助置种，

16、纸边距1cm1.5cm，盖上发芽盒盖，贴好标签并标注品种名称、样品编号、重复次数、置床时间等基本信息，放入人工气候箱，200.5发芽8d（12h光暗交替）统计正常幼苗数，计算发芽率。盖纸发芽：取2张发芽纸（110mm110mm），叠放入发芽盒（120mm120mm50mm）内，加入PEG-6000溶液，充分润湿，用无菌纱布轻拭床面，除去余液和纸间气泡后，置种板辅助置种，纸边距1cm1.5cm。种子置床后加盖1张PEG-6000溶液润湿的发芽纸，盖上发芽盒盖，贴好标签并标注品种名称、样品编号、重复次数、置床时间等基本信息，放入人工气候箱，200.5发芽8d（12h光暗交替）统计正常幼苗数，计算发

17、芽率。卷纸发芽：用75%的酒精溶液消毒操作台，将2张发芽纸（380mm255mm）叠放好，用油性记号笔在发芽纸一角较小区域标识样品信息（或备样品信息防水条），如：样品名称、重复编号等。发芽纸用PEG-6000溶液充分润湿，用无菌纱布轻拭床面，除去余液和纸间气泡后，置种板辅助交错置种，种孔朝向一致，纸边距5cm。种子置床后加盖1张PEG-6000溶液润湿的发芽纸，将纸床（或夹样品信息防水条）卷起，纸卷两端整平，并用皮筋扣住。将纸卷放入自封袋密封好（朝向一致），在自封袋上粘贴标签纸或用油性记号笔标识相关信息后，垂直放入人工气候箱中（纸卷种孔端朝下），200.5发芽8d（12h光暗交替）统计正常幼苗

18、数，计算发芽率。同时按照GB/T3543.4，对试样种子进行标准发芽测定。200.5发芽8d统计正常幼苗数，计算发芽率。8.2.4检查管理种子发芽期间，应进行适当的检查管理，以维持原有发芽条件。发芽4d检查1次发芽环境，若有问题及时进行相应维护。发芽床检查：发芽床始终保持湿润。发芽温度检查：温度始终保持在200.5范围内。种子检查：发霉的种子应及时取出洗涤去霉。当发霉种子超过5%时，应更换发芽床，以免霉菌因素影响测定结果。如发现腐烂无生活力的种子，应及时去除并做好相应记载。8.2.5数据记录按照GB/T3543.4中正常幼苗、新鲜不发芽种子、硬实、不正常幼苗和死种子的鉴定标准进行数据统计，根据

19、正常幼苗数，计算发芽率。8.3盐胁迫法8.3.1试样准备启封后，随机数取试样净种子100粒，4次重复，共400粒。种子置床前用1.0%的次氯酸钠溶液浸泡消毒5min，消毒后用无菌蒸馏水冲洗3遍，拭去种子表面浮水，备用。包衣种子可先柔性清洗然后消毒，或无须消毒处理。8.3.2试验材料准备发芽纸：将发芽纸1211高压蒸汽灭菌20min后，烘干备用。发芽盒：将发芽盒清洗干净后，用75%的酒精溶液擦拭消毒，风干备用。配制够量的200mmol/LNaCl溶液。参考配制方法：称取NaCl溶质11.7g，溶于蒸馏水中，定容至1000mL，备用。5DB37/T448420218.3.3盐胁迫测定采取纸上或纸间

20、（盖纸和卷纸）置床方式对小麦种子进行盐胁迫测定。纸上发芽：取2张发芽纸（110mm110mm），叠放入发芽盒（120mm120mm）内，加入200mmol/LNaCl溶液，充分润湿，用无菌纱布轻拭床面，除去余液和纸间气泡后，置种板辅助平行置种，纸边距11.5cm，盖上发芽盒盖，贴好标签并标注品种名称、样品编号、重复次数、置床时间等基本信息，放入人工气候箱，200.5发芽8d统计正常幼苗数，计算发芽率。盖纸发芽：取2张发芽纸（110mm110mm），叠放入发芽盒（120mm120mm50mm）内，加入200mmol/LNaCl溶液，充分润湿，用无菌纱布轻拭床面，除去余液和纸间气泡后，置种板辅助置

21、种，纸边距1cm1.5cm。种子置床后加盖1张NaCl溶液润湿的发芽纸，盖上发芽盒盖，贴好标签并标注品种名称、样品编号、重复次数、置床时间等基本信息，放入人工气候箱，200.5发芽8d（12h光暗交替）统计正常幼苗数，计算发芽率。卷纸发芽：用75%的酒精溶液消毒操作台，将2张发芽纸（380mm255mm）叠放好，用油性记号笔在发芽纸一角较小区域标识样品信息（或备样品信息防水条），用200mmol/LNaCl溶液充分润湿，用无菌纱布轻拭床面，除去余液和纸间气泡后，置种板辅助交错置种，种孔朝向一致，纸边距5cm。种子置床后加盖1张NaCl溶液润湿的发芽纸，将纸床（或夹样品信息防水条）疏松卷起，纸卷

22、两端整平，并用皮筋扣住。将纸卷放入自封袋密封好（朝向一致），在自封袋上粘贴标签纸或用油性记号笔标识相关信息后，垂直放入人工气候箱（纸卷种孔端朝下），200.5发芽8d（12h光暗交替）统计正常幼苗数，计算发芽率。同时按照GB/T3543.4，对试样种子进行标准发芽测定。200.5发芽8d统计正常幼苗数，计算发芽率。8.3.4检查管理在种子发芽期间，应进行适当的检查管理，以维持原有发芽条件。发芽4d检查1次发芽环境，若有问题进行相应维护。发芽床检查：发芽床始终保持湿润。发芽温度检查：温度始终保持在200.5范围。种子检查：发霉的种子应及时取出洗涤去霉。当发霉种子超过5%时，应更换发芽床，以免霉菌

23、因素影响测定结果。如发现腐烂无生活力的种子，应及时去除并做好相应记载。8.3.5数据记录按照GB/T3543.4中正常幼苗、新鲜不发芽种子、硬实、不正常幼苗和死种子的鉴定标准进行数据统计，根据正常幼苗数，计算发芽率。9试验数据处理9.1加速老化法分别计算加速老化测定各重复（100粒种子）的发芽率，按照GB/T8170，求得四次重复的平均值，记为加速老化发芽率；标准发芽条件下未老化处理试样四次重复发芽率的平均值记为标准发芽率；加速老化发芽率与标准发芽率的比值记为加速老化相对发芽率。加速老化发芽率=（正常幼苗数/供检种子粒数）100%标准发芽率=（正常幼苗数/供检种子粒数）100%加速老化相对发芽

24、率=（加速老化发芽率/标准发芽率）100%6干旱胁迫相对发芽率%耐旱或抗旱性分级耐旱或抗旱性等级90100极强A级7089强B级5069中等C级3049弱D级029极弱E级加速老化相对发芽率%耐贮藏性分级耐贮藏性等级85100耐A级6584中耐B级3064弱C级029不耐D级100需后熟处理E级DB37/T44842021种子批的标准发芽率和加速老化相对发芽率均较高时，表明种子批的种子活力较高，耐贮藏能力强，反之则弱。由于小麦种子有后熟特性，可能存在少量加速老化相对发芽率大于100%的现象。当加速老化相对发芽率大于100%，而标准发芽率不低于85%时，可认为该种子批的小麦种子需经后熟相关处理以

25、提高小麦种子的发芽率。依照加速老化相对发芽率大小可将小麦种子耐贮藏性分为耐（A）、中耐（B）、弱（C）、不耐（D）、需后熟处理（E）5个等级。小麦种子批耐贮藏性评价见表1。表1小麦种子批耐贮藏性评价9.2干旱胁迫法分别计算干旱胁迫下各重复（100粒种子）的发芽率，按照GB/T8170，求得四次重复的平均值，记为干旱胁迫发芽率；标准发芽条件下试样四次重复发芽率的平均值记为标准发芽率；干旱胁迫发芽率与标准发芽率的比值记为干旱胁迫相对发芽率。干旱胁迫发芽率=（正常幼苗数/供检种子粒数）100%标准发芽率=（正常幼苗数/供检种子粒数）100%干旱胁迫相对发芽率=（干旱胁迫发芽率/标准发芽率）100%种

26、子批的标准发芽率和干旱胁迫相对发芽率均较高时，表明种子批耐旱或抗旱性强，反之则弱。依照干旱胁迫相对发芽率大小可将小麦种子发芽耐旱或抗旱性分为极强（A）、强（B）、中等（C）、弱（D）、极弱（E）5个等级。小麦种子批发芽耐旱或抗旱性评价见表2。表2小麦种子批发芽耐旱或抗旱性评价9.3盐胁迫法分别计算盐胁迫测定各重复（100粒种子）的发芽率，按照GB/T8170，求得四次重复的平均值，记为盐胁迫发芽率；标准发芽条件下试样四次重复发芽率的平均值记为标准发芽率；干旱胁迫发芽与标准发芽率的比值记为盐胁迫相对发芽率。盐胁迫发芽率=（正常幼苗数/供检种子粒数）100%7平均发芽率最大容许差距50%以上50%

27、以下992598369747965895699394781091929101189901112128788131413848615171481831820157880212316盐胁迫相对发芽率%耐贮藏性分级耐贮藏性等级80100高耐A级6079耐B级4059中耐C级2039敏感D级019极度敏感E级DB37/T44842021标准发芽率=（正常幼苗数/供检种子粒数）100%盐胁迫相对发芽率=（盐胁迫发芽率/标准发芽率）100%种子批的标准发芽率和盐胁迫相对发芽率均较高时，表明种子批的种子活力较高，耐盐或抗盐性强，反之则弱。依照盐胁迫相对发芽率大小可将小麦种子发芽耐盐或抗盐性分为极强（A）、强

28、（B）、中等（C）、弱（D）、极弱（E）5个等级。小麦种子批发芽耐盐或抗盐性评价见表3。表3小麦种子批发芽耐盐或抗盐性评价9.4重新试验参考GB/T3543.4，当试验出现下列情况时，应重新试验。由于真菌或细菌的蔓延而使试验结果不一定可靠时，可选择上述其他种子活力测定方法采用纸砂上或纸砂间进行重新试验。如有必要，应增加种子之间的距离。当正确鉴定幼苗数有困难时，可选择上述其他种子活力测定方法采用纸砂上或纸砂间进行重新试验。当发现实验条件、幼苗鉴定或计数有差错时，应采用同样方法进行重新试验。当一次试验的四次重复间的差距超过表4最大容许差距时，应采用同样的方法进行重新试验。如果第二次结果与第一次结果

29、相一致，即其差异不超过表5中所示的容许差距，则将两次试验的平均数填报在结果单上。如果第二次结果与第一次结果不相符合，其差异超过表5所示的容许差距，则采用同样的方法进行第三次试验，填报符合要求的结果平均数。表4同一发芽试验四次重复间的最大容许差距（2.5%显著水平的两尾测定）8平均发芽率最大容许差距50%以上50%以下9899232959746391947104859011165778417246607625417515942508平均发芽率最大容许差距50%以上50%以下677229341856663545195155465020DB37/T44842021表4同一发芽试验四次重复间的最大容许

30、差距（2.5%显著水平的两尾测定）（续）表5同一或不同实验室来自相同或不同送验样品间发芽试验的容许差距（2.5%显著水平的两尾测定）10结果计算和表示按照GB/T3543.4，对试样的测定结果进行填报。正常幼苗、新鲜不发芽种子、硬实、不正常幼苗和死种子的百分率按四次重复平均数计算。正常幼苗、新鲜不发芽种子、硬实、不正常幼苗和死种子的百分率总和必须为100，平均数百分率修约到最近似的整数，修约0.5进入最大值中。11结果报告11.1种子活力测定结果报告应包含以下信息：标题；测定机构的名称与地址，进行测定的地点；测定证书或报告的唯一性标识和每页及总页数的标识；委托方的名称和地址；被测定种子样品的说

31、明和明确标识；测定种子样品的特性和状态；测定种子样品的接收和进行测定的日期；对所采用测定方法的标识的明确说明；涉及的扦样程序；对测定方法的任何偏离、增加或减少以及其他任何与特定的检验有关的信息；测定、检查和导出的结果，以及对结果失效的证明；对估算的测定结果不确定度的说明；对测定证书或报告内容负责人员的签字、职务或等效标识，以及签发日期；委托测定，作出本结果仅对所测定样品有效的声明；未经测定机构书面批准，不得复制测定证书或报告（完整复制除外）的声明。9DB37/T4484202111.2小麦种子活力测定发芽试验原始记录表编写格式可参考附录A。填报测定结果时，须填报正常幼苗、新鲜不发芽种子、硬实、不正常幼苗和死种子的百分率。假如其中任何一项结果为零，则将符号“0.0”填入该格中。同时还须填报采用的标准和发芽前处理和方法。11.3小麦种子活力测定结果报告单编写格式可参考附录B。同时还须填报采用的种子活力测定方法及发芽方式和条件。10样品编号检验日期年月日作物种类品种名称采用标准检验地点发芽实验室（）仪器、编号发芽箱号，分样器号。发芽前处理和方法重复日期结果/%正不死正不死正不死正不死正常幼苗新鲜不发芽硬实不正常幼苗死种子发芽床：温度：置床日期：实验持续时间：天容许误差：实际误差：不正常幼苗种类：备注检验员：日期：校核人：日期：审核人：日期：DB37/T448