【生物课件】动物细胞融合技术与单克隆抗体 2022—2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

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1、动物细胞融合技术与单克隆抗体细胞工程细胞工程回顾植物体细胞杂交技术回顾植物体细胞杂交技术运用植物体细胞杂交技术，可以跨越不同种植之间生殖隔离的屏障，培育出新的作物类型。01动物细胞融合技术动物细胞融合技术使使两两个个或或多多个个动动物物细细胞胞结结合合形形成成一一个个细细胞胞的的技技术术。融融合合后后形形成的杂交细胞就有原来两个细胞的遗传遗传信息成的杂交细胞就有原来两个细胞的遗传遗传信息。细胞质膜有一定的流动性细胞质膜有一定的流动性1.1.概念概念2.2.原理原理01动物细胞融合技术动物细胞融合技术方法方法物理方法：电融合法、离心法化学方法：聚乙二醇（PEG）法与植物原生质体融合的基本原理相同

2、生物方法：灭活病毒诱导法动物细胞融合特有的诱导方法病毒不灭活可以吗？为什么？01动物细胞融合技术动物细胞融合技术过程过程动物细胞融合技术动物细胞培养细胞质膜有一定的流动性细胞质膜有一定的流动性原理原理细胞增殖细胞增殖细胞融合完成的标志：细胞核融合杂交细胞植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合原理原理细胞融合前细胞融合前的处理方法的处理方法诱导细胞融诱导细胞融合的方法合的方法细胞融合成细胞融合成功的标志功的标志主要主要用途用途意义意义细胞膜具有一定的流动性植物细胞的全能性用果胶酶和纤维素酶去除细胞壁用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散成单个细胞电融合法、离心法；PEG融合法、高Ca2+

3、-高pH融合法电融合法、离心法PEG融合法灭灭活病毒诱导法活病毒诱导法再生出细胞壁细胞核的融合获得完整的杂种植株主要用于制造单克隆抗体打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能细胞膜具有一定的流动性01动物细胞融合技术动物细胞融合技术02单克隆抗体制备单克隆抗体制备1.抗体由什么细胞产生？2.抗体的化学本质是什么？3.抗体与抗原作用的特点？4.抗体主要分布在哪里？02传统抗体的生产方法产量低、纯度低、特异性差产量低、纯度低、特异性差缺陷？大量单一抗体克隆单一的浆细胞 动物会接触多种天然抗原，体内相应产生的特异性抗体种类可以达到百万种以上，但每一个浆细

4、胞只分泌一种特异性抗体。单克隆抗体制备单克隆抗体制备反复注射到小鼠体内获得多种浆细胞某种抗原分离出多种抗体改进？02一个浆细胞浆细胞群抗体克隆产生浆细胞不具有无限增殖的能力单单 克隆克隆 抗体抗体 克隆：从一个共同祖先，通过无性繁殖的方法产生出来的一群遗传特性相同的DNA分子、细胞或个体，在动物细胞水平指动物细胞培养在动物细胞水平指动物细胞培养。如何解决？如何解决？单克隆抗体制备单克隆抗体制备02设计方案设计方案浆浆细胞细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞单克隆抗体英国米尔斯坦英国米尔斯坦 德国科勒德国科勒动物细动物细胞融合胞融合既能迅速大量增殖，又能产生抗体单克隆抗体制备单克隆抗体制备动物细动

5、物细胞胞培养培养用抗原注射小鼠从患骨髓瘤的小鼠体内取骨髓瘤细胞培养浆细胞骨髓瘤细胞小鼠的脾脏中获取杂交瘤细胞融合筛选1诱导融合后，培养液中存在哪几种细胞？未融合的B淋巴细胞未融合的骨髓瘤细胞BB 杂交细胞瘤瘤 杂交细胞B瘤 杂交瘤细胞足够数量的产特定抗体的杂交瘤细胞筛选2继续培养单克隆抗体体外培养注射到小鼠腹腔中02单克隆抗体制备单克隆抗体制备02筛选1：置于HAT 培养基上培养 1.该培养基从功能分类上属于什么培养基？2.能在其中存活并增殖的细胞是？DNA复制中所需的核苷酸有两个合成途径：全全合合成成途途径径和和补补救救合合成成途途径径。正常细胞内两种途径都具备。氨基喋呤(A)可以抑制全合成

6、途径；补救合成途径需两种酶：胸腺嘧啶核苷激酶(TK)和次黄嘌呤磷酸核苷转移酶(HPRT)，其次还需要次黄嘌呤(H)及胸腺嘧啶核苷(T)作为原料。正常细胞有这两种酶，而用于细胞融合的骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞有有遗遗传传缺缺陷陷，即胸腺嘧啶核苷激酶缺陷(TK)或者次黄嘌呤磷酸核苷转移酶(HGPRT)缺陷。获得杂交瘤细胞单克隆抗体制备单克隆抗体制备选择02克隆化培养与抗体检测（筛选2）：筛选出分泌所需抗体的杂交瘤细胞将杂交瘤细胞进行稀释，每个培养孔只有一个杂交瘤细胞，这样每个孔培养得到的抗体就是单抗。培养一段时间取上清进行抗体检测继续培养足够数量的产特定抗体的杂交瘤细胞体外体外培养培养（从细胞培养液中获

7、取）（从细胞培养液中获取）注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔内内（从小鼠腹水中获取）（从小鼠腹水中获取）单克隆抗体制备单克隆抗体制备多次筛选细胞培养板细胞培养板检测用的抗原检测用的抗原？抗体检测检测原理抗原和抗体能够特异性结合02单克隆抗体制备单克隆抗体制备项目项目腹腔培养腹腔培养体外培养体外培养优点优点缺点缺点易于控制培养条件（如无需提供无菌环境等），操作简单，成本较低操作简单，成本较低规模小，产量少可大规模培养，大量生产可大规模培养，大量生产需要人为控制培养条件成本相对较高单克隆抗体特点？特异性强灵敏度高可大量制备03单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体做成的“早早孕

8、诊断试剂盒”。资资料料:使用高效的细胞毒素类药物进行化疗可以有效杀伤肿瘤细胞，但在杀伤肿瘤细胞的同时还会对健康细胞造成伤害。抗体-药物偶联物(ADC)，将细胞毒素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。1.诊断试剂（最广泛的用途）2.运载药物3.作为药物治疗疾病4.导向手术动物细胞融合动物细胞培养给小鼠注射特定的抗原蛋白浆细胞（免疫）骨髓瘤细胞杂交瘤细胞单克隆抗体能分泌所需抗体的杂交瘤细胞筛选1：选择培养基筛选2：抗原-抗体杂交法诱导融合克隆化培养与抗体检验体外培养或小鼠腹腔内增殖特异性强灵敏度高可大量制备既能大量繁殖又能产生专一抗体注射抗原的目的注射抗原的目的？

9、诱导融合的方法诱导融合的方法？两次筛选的目的两次筛选的目的？大量增殖细胞获得大量增殖细胞获得单抗的方法？单抗的方法？杂交瘤细胞的特点杂交瘤细胞的特点？单克隆抗体制备包单克隆抗体制备包括哪两个阶段？括哪两个阶段？原理？原理？单克隆抗体的优点单克隆抗体的优点？03单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用获得能产生相应获得能产生相应抗体的浆细胞抗体的浆细胞1.下列有关动物细胞融合与植物体细胞杂交比较的叙述,错误的是()A.它们的原理都涉及细胞膜的流动性B.都可以用电融合法或PEG融合法诱导融合C.融合前都需用纤维素酶或果胶酶处理细胞D.前者主要是为了获得细胞产品,后者主要是为了获得杂种植株C2.科学家以SARS病毒的核衣壳蛋白为抗原,制备出了单克隆抗体。下列相关叙述正确的是()A.利用该单克隆抗体可以诊断是否感染SARS病毒B.体外培养单个B淋巴细胞可以获得针对SARS病毒的单克隆抗体C.将等量B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合,经诱导后融合的细胞即为杂交瘤细胞D.将纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内,从小鼠血清中分离出的抗体为单克隆抗体A