q柱纯化蛋白原理.docx

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1、q柱纯化蛋白原理Q柱属于离子交换柱层析技术的一种，常用于蛋白质 纯化中。本文将详细介绍Q柱纯化蛋白的原理及操作步 骤。一、原理Q柱的交换基质是一种具有阳离子交换能力的离子交 换树脂。蛋白质在缓冲液中带有正电荷或负电荷，与Q柱 的阴离子或阳离子交换基团发生静电吸附，从而被分离出 来。通常在pH 7. 5-8. 5的缓冲液中进行Q柱层析，pH值 的选择需要考虑到目标蛋白的等电点（pl）,使其保持带 电状态。如果蛋白质的pl小于pH 8.5,则会以负电的形式 存在，可以使用弱阳离子交换柱；如果蛋白质的pl大于pH 7.5,则会以正电的形式存在，可以使用弱阴离子交换柱。 如果目标蛋白的pl与pH 7.

2、5-8. 5之间，则可以使用强阳 离子交换柱或强阴离子交换柱。二、操作步骤1、样品的制备准备待纯化的蛋白质样品，除掉悬浮物和泡沫，并且将样品预冷至4。2、Q柱的操作在打开柱子前，应先在柱子底部放置一些石英砂或氧 化铝，以防止样品浆湖压缩柱层。将Q柱装入柱架中，并 且在顶部加入过滤器床。用缓冲液进行柱子均相化，并清洗柱子。用样品缓冲 液进行柱子均相化，以引起静电吸附，加强分离效果。3、样品装载将待纯化的样品通过0. 45微米滤膜过滤并将样品缓冲 液加入适量的离心管中。将离心管中的样品缓冲液均匀地 加入Q柱柱床中，稳定将样品加入柱子中。4、洗脱柱样品被平衡后，用缓冲液进行柱子冲洗，使不结合于 柱子的蛋白质被彻底清除。清洗完成之后，将柱子中的目 标蛋白缓慢洗脱，收集洗脱液进行后续的纯化或分析。三、注意事项1、准备充分的缓冲液和清洗液，以保证连续的流动和 优质分离。2、使用过滤器床过滤样品和洗脱液，以防止样品中的 悬浮物阻塞柱床。3、控制洗脱流量，避免过快或过慢，流速一般为柱床 高度的1-2倍。4、根据样品的性质和Q柱的性质选择不同的缓冲液和pH值。5、必要时使用其他层析技术进行单步纯化。四、结论在蛋白纯化中，Q柱是值得信赖的一种层析技术，适 用于小至几kDa的小分子到几百kDa的大分子蛋白质的分 离。关键是准确选择充填物和缓冲液，根据样品和柱子的 不同特性进行正确的操作。