DB15_T 3298-2024 苜蓿镰刀菌根腐病室内抗性鉴定技术规程.docx

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1、ICS65.020.01CCSB2015内蒙古自治区地方标准DB15/T32982024苜蓿镰刀菌根腐病室内抗性鉴定技术规程CodeofpracticeforidentificationofalfalfaresistancetoFusariumRootRotinroom2024-01-25发布2024-02-25实施内蒙古自治区市场监督管理局发布DB15/T32982024前言本文件按照GB/T1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由内蒙古自治区林业和草原局提出并归口。本文件起草单位：中国农业科学院草原研究所、内蒙古自治区农牧业技术推广中心、内蒙古草

2、业技术创新中心有限公司、巴彦淖尔市现代农牧事业发展中心、内蒙古自治区林业和草原监测规划院。本文件主要起草人：张园园、林克剑、贾瑞芳、陈正强、张晓萝、王乐、王圣泽、吴杰、肖皓文、韩兆敏、张枫青、杨文。IDB15/T32982024苜蓿镰刀菌根腐病室内抗性鉴定技术规程1范围本文件规定了苜蓿抗镰刀菌根腐病的接种体制备、抗病性鉴定、病情调查和抗病性评价。本文件适用于室内评价苜蓿不同品种对镰刀菌根腐病的抗性水平。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

3、文件。GB6141豆科草种子质量分级3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。苜蓿镰刀菌根腐病AlfalfaFusariumRootRot由镰刀菌（Fusariumspp.）引起的土传性真菌病害，造成根和根颈部出现褐色病斑至腐烂凹陷，开裂或剥脱，中柱红褐色至暗褐色，植株萎蔫直至死亡。接种体Inoculum在实验室条件下培养的用于人工接种的病原菌繁殖体或营养体。4接种体制备供试菌种选取内蒙古苜蓿种植区发病株上分离获得的具有中等致病力的根腐病优势菌株锐顶镰刀菌（Fusariumacuminatum）。培养基制备马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA培养基）：马铃薯200g，洗净去皮切成1cm2cm的小块，加

4、水煮沸20min，纱布过滤，加入葡萄糖20g和琼脂15g，待完全熔化后，用水定容至1000mL，搅拌均匀，高压灭菌（121，20min）。麦麸培养基：将40mL蒸馏水加入60g麦麸中拌匀，装入三角瓶中，高压灭菌（121，30min）。1病情级别代表值症状描述10健康无症状21根颈部出现少量黑褐色、较小斑点32根颈被黑褐病斑包围510个/mL的悬浮液用于接种。DB15/T32982024接种体繁殖在无菌条件下将接种菌株转接于PDA平板培养基上，25恒温培养3d5d，自菌落边缘打取直径6mm菌饼35块，接种于灭菌的麦麸培养基上，摇匀后置于恒温培养箱25培养7d。接种悬浮液制备用200mL300mL

5、无菌水将麦麸进行淘洗，用四层纱布过滤，获得孢子悬浮母液，配制成孢子量为65抗病性鉴定种子质量鉴定品种的种子质量应符合GB6141中苜蓿一级种标准。育苗将种子在3%次氯酸钠溶液中浸泡2min，转至75%乙醇溶液中消毒30s，无菌水冲洗5遍，播种于装有灭菌营养土的穴盘中。置于温度2426，空气相对湿度30%40%的温室条件下，待苜蓿幼苗生长至34片复叶时接种。接种5.3.1接种方法采用蘸根接种法进行接种（详见参考文献1）。将幼苗从穴盘中取出，根系冲洗干净后完全浸泡于接种悬浮液中，30min后将幼苗重新移植于装有灭菌营养土的营养钵（高10cm，直径10cm）中，每钵5株，每个处理30株，重复三次。5

6、.3.2接种后管理将营养钵置于2426，光照10h12h温室条件下生长，保持基质湿润。5.3.3对照品种选择高感苜蓿品种为对照材料。6病情调查病情级别划分病情级别划分见表1（引自参考文献2）。表1苜蓿镰刀菌根腐病抗性室内鉴定病情级别的划分2病情指数（DI）抗病类型DI=0免疫（Immune，I）0DI20高抗（HighResistant，HR）20DI40中抗（Mid-Resistant，MR）40DI60中感（Mid-Susceptible，MS）DI60高感（HighSusceptible，HS）病情级别代表值症状描述43根颈缢缩变黑，出现枯叶54根颈大部分变黑变褐，大多数叶片干枯65根颈

7、部全部腐烂，整株枯死DB15/T32982024表1苜蓿镰刀菌根腐病抗性室内鉴定病情级别的划分（续）DI=（sn）调查方法接种35d后，按病情级别调查并记录接种株发病情况，计算病情指数（DI）。病情指数按公式（1）计算：NS100（1）式中：DI病情指数；S各病情级别代表数值；n各病情级别病株数；N调查总株数；S最高病情级别代表值。注：计算结果精确到小数点后两位。7抗病性评价抗病性评价标准依据病情指数（DI）的平均值评价其抗性水平，划分标准见表2（引自参考文献3）。表2苜蓿镰刀菌根腐病抗性评定标准有效性判别对照高感品种病情指数大于60（DI60），该批次根腐病抗性鉴定视为有效。8鉴定结果根据本

8、文件6和7，将不同病情级别的株数、病情指数、3个重复的平均病情指数、抗性评价等鉴定结果填入附录A。3编号品种/名称送样单位重复病情级别病情指数平均病情指数抗性评价012345播种日期：接种日期：调查日期：DB15/T32982024AA附录A（规范性）苜蓿镰刀菌根腐病抗性鉴定结果记载表苜蓿镰刀菌根腐病抗性鉴定结果记载见表A.1。表A.1苜蓿镰刀菌根腐病抗性鉴定结果记载表鉴定技术负责人（签字）：4DB15/T32982024参考文献1SubbaraoKV,HubbardJC,GreatheadAS,etal.1997.VerticilliumWilt.CompendiumoflettucediseasesM.StPaul,MN:TheAmericanPhytopathologicalSociety,1997:26-27.2蔡文涌,王肖肖,方香玲.不同尖孢镰刀菌菌株对紫花苜蓿幼苗生长的影响J.草地学报,2020,28(05):1233-1239.3潘龙其,张丽,田进山,等.紫花苜蓿不同品种对拟枝孢镰刀菌的抗性评价J.草业学报,2016,25(5):95-101.5