【生物】《土壤中分解尿素的细菌的分离和计数》课件 高二下学期人教版（2019）选择性必修3.pptx

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1、尿素尿素【COCO（NHNH2 2）2 2】是一种重要的农业氮肥，不能直接被农作物吸收是一种重要的农业氮肥，不能直接被农作物吸收。尿素尿素是一种重要的是一种重要的农业氮肥。农业氮肥。尿素尿素不能直接不能直接被农作物被农作物吸收。吸收。土壤中的细菌将尿素土壤中的细菌将尿素分解成氨分解成氨之后才能被植物利用。之后才能被植物利用。尿素尿素是一种重要的是一种重要的农业农业氮肥氮肥。尿素尿素不能直接不能直接被农作物被农作物吸吸收。收。土壤中的细菌将尿素土壤中的细菌将尿素分解成氨分解成氨之后才能被植物利用。之后才能被植物利用。CO(NH2)2+H2OCO2+2NH3尿素尿素是一种重要的是一种重要的农业氮肥

2、。农业氮肥。尿素尿素不能直接不能直接被农作物被农作物吸收。吸收。土壤中的细菌将尿素土壤中的细菌将尿素分解成氨分解成氨之后才能被植物利用。之后才能被植物利用。CO(NH2)2+H2OCO2+2NH3从土壤中从土壤中分离分离出能够分解尿素的细菌出能够分解尿素的细菌统计统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌.筛选菌株筛选菌株.统计菌落数目统计菌落数目.设置对照设置对照（纯且活的菌种纯且活的菌种）(一一)筛选菌株筛选菌株启启示示?1 1、实例：、实例：寻找目的菌种时要根据它对寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求生存环境的要求，到到相应的环境相应的环境中去寻找。中

3、去寻找。DNADNA多聚酶链式反应多聚酶链式反应要求使用要求使用耐高耐高温（温（93930 0C C）的）的DNADNA聚合酶。聚合酶。（纯且活的菌种纯且活的菌种）选择培养基选择培养基概念概念在微生物学中，将在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选的培养基称为选择培养基。择培养基。2、实验室中微生物的筛选原理：、实验室中微生物的筛选原理：人为提供人为提供有利于目的菌株生长有利于目的菌株生长的条件的条件(包括营养、温包括营养、温度、度、pH等等)，同时，同时抑制或阻止其他微生物抑制或阻止其他微

4、生物生长。生长。用途：使混合菌株中的用途：使混合菌株中的目的菌变成优势菌目的菌变成优势菌，提高该，提高该菌的筛选率。菌的筛选率。（1）在培养基中加入某种化学物质。利用选择培养基分离微生物的方法：例如，加入例如，加入青霉素青霉素可以分离出可以分离出 ；加入加入高浓度的食盐高浓度的食盐可以得到可以得到 。酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌这里的加入是在培养成分的基础上加入。这里的加入是在培养成分的基础上加入。（2）改变培养基中的营养成分。例如，缺乏例如，缺乏氮源氮源时可以分离时可以分离 ；尿素尿素作为作为唯一氮源唯一氮源时，可以分离出时，可以分离出 ;石油石油作为作为唯一碳源唯一

5、碳源时，可以分离出时，可以分离出 ;不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基,可以分离出可以分离出 ;（3）改变微生物的培养条件。固氮微生物固氮微生物能分解尿素的细菌能分解尿素的细菌能消除石油污染的微生物能消除石油污染的微生物自养型微生物自养型微生物例如，将培养基放在例如，将培养基放在高温环境高温环境中培养可以得到中培养可以得到 .耐高温的微生物耐高温的微生物制备原理：制备原理：根据不同微生物的根据不同微生物的特殊化学物质要求特殊化学物质要求或其或其对某一化学、对某一化学、物理因素的抗性不物理因素的抗性不同同而制备培养基。而制备培养基。本课题使用的培养基的配方如下：本课题使用的培养

6、基的配方如下：成分成分KH2PO4Na2HPO4MgSO47H2O葡萄糖葡萄糖尿素尿素琼脂琼脂水水含量含量1.4g2.1g0.2g10.0g1.0g15.0g1000mL请分析后回答：请分析后回答：(1)(1)在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是源的分别是_和和_。(2)(2)该培养基为该培养基为_培养基培养基(按物理状态分按物理状态分)，理，理由是由是_。从功能上属于哪类培养基？从功能上属于哪类培养基？从功能上属于哪类培养基？从功能上属于哪类培养基？(3)(3)想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用？如果想一想这种培养基对微

7、生物是否具有选择作用？如果具有，又是如何进行选择的？具有，又是如何进行选择的？葡萄糖葡萄糖尿素尿素固体固体有凝固剂琼脂有凝固剂琼脂有选择作用。此配方中尿素是唯一氮源，因此，只有能够利用有选择作用。此配方中尿素是唯一氮源，因此，只有能够利用尿素的微生物才能够生长。尿素的微生物才能够生长。选择培养基选择培养基选择培养基选择培养基思维延伸思维延伸能在选择培养基上生长的细菌一定是所筛选的目的菌吗？能在选择培养基上生长的细菌一定是所筛选的目的菌吗？原则上选择培养基只允许特定种类的微生物生长，但实际上，微生物的培养是一个非常复杂的问题，有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖，因此能在选择培养基上生

8、长的微生物不一定都是所需微生物，还需要进一步验证。课后思考：选择培养基和鉴别培养基的比较？课后思考：选择培养基和鉴别培养基的比较？怎样证明此培养基具有选择性呢？怎样证明此培养基具有选择性呢？牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨培养基培养基是是判断该培判断该培养基有无养基有无选择性选择性实验组实验组对照组对照组培养基培养基成分成分是否是否接种接种目的目的结果结果生长多种生长多种微生物微生物以尿素为以尿素为唯一氮源唯一氮源的培养基的培养基分离分离尿素细菌尿素细菌只生长只生长尿素细菌尿素细菌是是1、常用方法：_法 原理：当样品的_足够高时，培养基表面生长的_，来源于稀释培养液中的_；通过统计平板上的_来推测样品

9、中大约含有的活菌数。稀释涂布平板稀释度一个菌落一个活菌菌落数（二）统计菌落数目：二）统计菌落数目：410107 7410105 5410104 4410103 3410107 7 思考1、1g土的体积约为_ml，10g土加入到90ml无菌水，相当于稀释了_倍。思考2、假如104稀释度下涂布的3个平板的菌落数分别为42、40和38，则1ml稀释液中的菌株数为_，104稀释度的试管中 的 菌 株 数 为 _，102稀 释 度 的 试 管 中 的 菌 株 数 为_，101稀释度的锥形瓶中的菌株数为_。101稀释度的试管中的菌株来自于10g土，所以1g土中的菌株数为_。1104004103410541

10、074106教材P23图2-7410107 7410105 5410104 4410103 3410107 7计算公式：_g土中的菌株数=（CV）M C：代表_ V：代表_ M：_1 某一稀释度下平板上生长的平均菌落数涂布平板时所用的稀释液体积稀释倍数【例1】某同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上的菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL）A.2.34108B.2.34109C.234D.23.4思考思考1 1：如何根据平板上的菌落数推测：如何根据平板上的菌落数推测出每出每mLmL样品中的菌株数？样品中的菌株数？B B思考思考2 2：为什

11、么测平板上的菌落数可以：为什么测平板上的菌落数可以推测样品中的活菌的数目？推测样品中的活菌的数目？当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约有多少活菌。为了保证结果准确，一般选用菌落数在30300的平板进行计数。想一想：为什么？思考思考3 3：统计的菌落数往往比活菌的实：统计的菌落数往往比活菌的实际数目高还是低，为什么？际数目高还是低，为什么？低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。选 30300 个菌落的平板统计。每个稀释度取3个平板取其平均值。统计的菌落往往比活菌的实际数目低，因此，统

12、计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。注意事项因因为当两个或多个细胞连在一起时，平为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落板上观察到的只是一个菌落。利用利用血球计数板血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。品中微生物的数量。不能区分死菌与活菌；不能区分死菌与活菌；缺点：缺点：统计菌落数目统计菌落数目旧知回顾旧知回顾稀释稀释 2108解析解析：根据公式：根据公式：540010000102108例例1：用血球计数板对培养液中酵母菌进行计数，若计数室：用血球计数板对培养液中酵母菌进行计数，若计数室为为1mm1mm0.1mm方格，由方格，由4

13、00个小方格组成，如果一个个小方格组成，如果一个小方格内酵母菌过多，难以计数，应先小方格内酵母菌过多，难以计数，应先后再计数。若后再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有该培养液中酵母菌总数有个。个。3、滤、滤膜法膜法 以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例。将已知体积以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例。将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养液基上培养。在的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养液基上培养。在该培养基上，大肠杆菌的菌落呈现黑色。可以根据培养该培养基上，大肠杆菌的菌落呈现黑色。可以根据培

14、养基上基上黑色菌落黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。大肠杆菌呈黑色（深紫色）中心大肠杆菌呈黑色（深紫色）中心 ,有或无有或无金属光泽金属光泽大肠杆菌在伊大肠杆菌在伊红美蓝琼脂红美蓝琼脂(EMB)(EMB)上典型特征上典型特征 练练习习、无无菌菌操操作作下下将将90ml无无菌菌水水加加入入到到10ml待待测测水水样样中中，这这样样就就将将待待测测水水样样稀稀释释了了_倍倍，将将稀稀释释后后的的菌菌液液通通过过滤滤膜膜法法测测得得EMB培培养养基基上上的的菌菌落落数数为为45，黑色菌落为黑色菌落为5，则，则1升待测水样中的大肠杆菌数目为升待测水样中的大

15、肠杆菌数目为_个。个。10500.筛选菌株筛选菌株.统计菌落数目统计菌落数目.设置对照设置对照（纯且活的菌种纯且活的菌种）课堂小结 研究思路实验室中微生物的筛选实验室中微生物的筛选实验室中微生物的筛选实验室中微生物的筛选：选择培养基：选择培养基：选择培养基：选择培养基1、概念2、用途3、筛选方法4、制备原理1、稀释涂布平板法（活菌计数法）2、显微镜直接计数法3滤膜法原理计算公式注意事项（2018新课标I卷37节选）甲乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量，在同一稀释倍数下得到以下结果:甲同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是110、140、149，取平均值是133；乙同学涂布

16、了3个平板，统计的菌落数分别是27、169、176，取平均值是124。有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其原因是_。乙同学的结果中，1 个平板的计数结果与另 2 个相差悬殊，结果的重复性差 原理：原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。一个单细胞。原理：原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先

17、的个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。一个单细胞。常用方法：稀释涂布平板法常用方法：稀释涂布平板法原理：原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。一个单细胞。每克样品中的菌落数每克样品中的菌落数(CV)M其中，其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代代表涂布平板时所用的稀释液的体积表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。代表稀

18、释倍数。常用方法：稀释涂布平板法常用方法：稀释涂布平板法两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统的培养基中，得到以下两种统计结果计结果:1.第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为落数为230。2.第二位同学在该深度下涂布了三个平板，统计的菌第二位同学在该深度下涂布了三个平板，统计的菌落数分别为落数分别为21、212和和256，该同学以这三个平板菌落数的，该同学以这三个平板菌落数的平均值平均值163作为统计结果。作

19、为统计结果。思考书本思考书本22页问题页问题：说明设置重复组的重要性：说明设置重复组的重要性：为了保证结果准确，一般选择菌落数在为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平的平板上进行计数。板上进行计数。为了保证结果准确，一般选择菌落数在为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平的平板上进行计数。板上进行计数。为使结果接近真实值可将为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。经涂布，培养计算出菌落平均数。为了保证结果准确，一般选择菌落数在为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平的平板上进行计数

20、。板上进行计数。为使结果接近真实值可将为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。经涂布，培养计算出菌落平均数。统计的菌落往往比活菌的实际数目统计的菌落往往比活菌的实际数目_。为了保证结果准确，一般选择菌落数在为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平的平板上进行计数。板上进行计数。为使结果接近真实值可将为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。经涂布，培养计算出菌落平均数。统计的菌落往往比活菌的实际数目统计的菌落往往比

21、活菌的实际数目_。低低统计的菌落往往比活菌的统计的菌落往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因上观察到的只是一个菌落。因此结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。显微镜直接计数此结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。也是测定微生物数量的常用方法。注意：计数法计数法直接计数法、直接计数法、活菌平板计数法、活菌平板计数法、比浊法比浊法（原理是在一定范围内，菌的悬液中细胞浓度（原理是在一定范围内，菌的悬液中细胞浓度与混浊度成正比，即与光密度成正比，菌越多，光密度

22、与混浊度成正比，即与光密度成正比，菌越多，光密度越大。因此可以借助于分光光度计，在一定波长下，测越大。因此可以借助于分光光度计，在一定波长下，测定菌悬液的光密度，以光密度表示菌量。）定菌悬液的光密度，以光密度表示菌量。）膜过滤法膜过滤法（当样品中菌数很低时，可以将一定体积的（当样品中菌数很低时，可以将一定体积的湖水海水或饮用水等样品通过膜过滤器。然后将滤膜干湖水海水或饮用水等样品通过膜过滤器。然后将滤膜干燥、染色，并经处理使膜透明，再在显微镜下计算膜上燥、染色，并经处理使膜透明，再在显微镜下计算膜上(或一定面积中或一定面积中)的细菌数的细菌数）设置对照设置对照设置对照设置对照设置对照的主要目的

23、设置对照的主要目的是排除实验组中是排除实验组中非测试因素非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，时，A同学从对应的同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。个菌落。分析其原因。分析其原因。你能通过设置对照，帮助你能通过设置对照，帮助A A同学排除上同学排除上述两个可能影响实验结果的因素吗？述两个可能影响实验结果的因

24、素吗？原因：原因：土样不同，土样不同，培养基污染或操作失误培养基污染或操作失误(或者是混入或者是混入了其他的含氮物质了其他的含氮物质)在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，时，A同学从对应的同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。个菌落。分析其原因。分析其原因。你能通过设置对照，帮助你能通过设置对照，帮助A A同学排除上同学排除上述两个可能影响实验结果的因素吗？述两个可能影响实验结果的因素吗？方案一

25、：方案一：方案二：方案二：方案一：方案一：由其他同学用与由其他同学用与A同学相同土样进行实验同学相同土样进行实验方案二：方案二：方案一：方案一：由其他同学用与由其他同学用与A同学相同土样进行实验同学相同土样进行实验方案二：方案二：结果预测：结果预测：如果结果与如果结果与A同学一致，则证明同学一致，则证明A无误；如果结果不同，无误；如果结果不同，则证明则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。同学存在操作失误或培养基的配制有问题。方案一：方案一：由其他同学用与由其他同学用与A同学相同土样进行实验同学相同土样进行实验方案二：方案二：将将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，同学配制的培

26、养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。结果预测：结果预测：如果结果与如果结果与A同学一致，则证明同学一致，则证明A无误；如果结果不同，无误；如果结果不同，则证明则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。同学存在操作失误或培养基的配制有问题。方案一：方案一：由其他同学用与由其他同学用与A同学相同土样进行实验同学相同土样进行实验方案二：方案二：将将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。结果预

27、测：结果预测：如果结果与如果结果与A同学一致，则证明同学一致，则证明A无误；如果结果不同，无误；如果结果不同，则证明则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。同学存在操作失误或培养基的配制有问题。说明设置对照的重要性：说明设置对照的重要性：为实现以下目的，对照组应如何设置？为实现以下目的，对照组应如何设置？判断培养基中是否有杂菌污染：判断培养基中是否有杂菌污染：为实现以下目的，对照组应如何设置？为实现以下目的，对照组应如何设置？判断培养基中是否有杂菌污染：判断培养基中是否有杂菌污染：将未接种的培养基同时进行培养。将未接种的培养基同时进行培养。为实现以下目的，对照组应如何设置？为实现以下目的

28、，对照组应如何设置？判断培养基中是否有杂菌污染：判断培养基中是否有杂菌污染：将未接种的培养基同时进行培养。将未接种的培养基同时进行培养。判断选择培养基是否具有筛选作用：判断选择培养基是否具有筛选作用：为实现以下目的，对照组应如何设置？为实现以下目的，对照组应如何设置？判断培养基中是否有杂菌污染：判断培养基中是否有杂菌污染：将未接种的培养基同时进行培养。将未接种的培养基同时进行培养。判断选择培养基是否具有筛选作用：判断选择培养基是否具有筛选作用：完全培养基（营养成分齐全）接种后培养观察菌完全培养基（营养成分齐全）接种后培养观察菌落数目。落数目。为实现以下目的，对照组应如何设置？为实现以下目的，对

29、照组应如何设置？土壤取样土壤取样土壤取样土壤取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样。取土样用的左右，再取样。取土样用的小铁铲小铁铲和盛土样的和盛土样的信封信封在使用前都要在使用前都要灭菌。灭菌。制备培养基制备培养基由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：一个较为宽泛的范围：稀释倍数为稀释倍数为103107。制备培养基制备培养基由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：一个较为宽泛的范围：

30、稀释倍数为稀释倍数为103107。制备培养基制备培养基准备准备_培养基培养基和和_培养基培养基(以以尿尿素素为唯一氮源的为唯一氮源的)。由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：一个较为宽泛的范围：稀释倍数为稀释倍数为103107。牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨选择选择制备培养基制备培养基准备准备_培养基培养基和和_培养基培养基(以以尿尿素素为唯一氮源的为唯一氮源的)。由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：一个较为宽泛的范围：稀释倍数为稀释倍数为10

31、3107。牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨选择选择制备培养基制备培养基准备准备_培养基培养基和和_培养基培养基(以以尿尿素素为唯一氮源的为唯一氮源的)。稀释相同倍数的培养基相比较，在牛肉膏蛋白胨培养稀释相同倍数的培养基相比较，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显基上生长的菌落数目应明显_选择培养基上的数选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为_，用来，用来判断选择培养基是否起到了判断选择培养基是否起到了_作用。作用。由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：一个较为宽泛的范围

32、：稀释倍数为稀释倍数为103107。多于多于牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨选择选择制备培养基制备培养基准备准备_培养基培养基和和_培养基培养基(以以尿尿素素为唯一氮源的为唯一氮源的)。稀释相同倍数的培养基相比较，在牛肉膏蛋白胨培养稀释相同倍数的培养基相比较，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显基上生长的菌落数目应明显_选择培养基上的数选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为_，用来，用来判断选择培养基是否起到了判断选择培养基是否起到了_作用。作用。由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个

33、较为宽泛的范围：一个较为宽泛的范围：稀释倍数为稀释倍数为103107。多于多于牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨选择选择对照对照制备培养基制备培养基准备准备_培养基培养基和和_培养基培养基(以以尿尿素素为唯一氮源的为唯一氮源的)。稀释相同倍数的培养基相比较，在牛肉膏蛋白胨培养稀释相同倍数的培养基相比较，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显基上生长的菌落数目应明显_选择培养基上的数选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为_，用来，用来判断选择培养基是否起到了判断选择培养基是否起到了_作用。作用。由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了由于初次实

34、验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：一个较为宽泛的范围：稀释倍数为稀释倍数为103107。多于多于牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨选择选择对照对照选择选择制备培养基制备培养基准备准备_培养基培养基和和_培养基培养基(以以尿尿素素为唯一氮源的为唯一氮源的)。稀释相同倍数的培养基相比较，在牛肉膏蛋白胨培养稀释相同倍数的培养基相比较，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显基上生长的菌落数目应明显_选择培养基上的数选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为_，用来，用来判断选择培养基是否起到了判断选择培养基是否起到了_作用。作用。通常选用

35、一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在落数在30300之间、适于计数的平板。之间、适于计数的平板。样品的稀释样品的稀释通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在落数在30300之间、适于计数的平板。之间、适于计数的平板。测定土壤中测定土壤中细菌的数量，一般选用细菌的数量，一般选用104、105和和106倍的稀释倍的稀释液液进行平板培养；进行平板培养；测定测定放线菌的数量，一般选用放线菌的数量，一般选用103、104和和105倍倍稀释；稀释；测定测定真菌的数量，一般选用真菌

36、的数量，一般选用102、103和和104倍倍稀释。稀释。样品的稀释样品的稀释思考：思考：为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？度？思考：思考：为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？度？原因：原因：土壤中各类微生物的数量（单位：株土壤中各类微生物的数量（单位：株/kg）是不同的）是不同的;保证获得菌落数在保证获得菌落数在30300之间、适于计数的平板之间、适于计数的平板.取样涂布取样涂布实验时要对培养皿作好实验时要对培养皿作好标记标记。注明培养基类。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。型、培养时间、稀释度

37、、培养物等。取样涂布取样涂布实验时要对培养皿作好实验时要对培养皿作好标记标记。注明培养基类。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。型、培养时间、稀释度、培养物等。如果得到了如果得到了2个或个或2个以上菌落数目在个以上菌落数目在30300的平板，则说明稀的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。，需要重新实验。取样涂布取样涂布不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度

38、和培养时间。时间。细菌一般在细菌一般在3037的温度下培养的温度下培养12d；放线菌一般在放线菌一般在2528的温度下培养的温度下培养57d；而霉菌一般在而霉菌一般在2528的温度下培养的温度下培养34d。微生物的培养与观察微生物的培养与观察在菌落计数时，每隔在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数统计一次菌落数目。选取菌落数目目_时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。致遗漏菌落的数目。不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。时间。细菌一般在细菌一般在3037的

39、温度下培养的温度下培养12d；放线菌一般在放线菌一般在2528的温度下培养的温度下培养57d；而霉菌一般在而霉菌一般在2528的温度下培养的温度下培养34d。微生物的培养与观察微生物的培养与观察在菌落计数时，每隔在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数统计一次菌落数目。选取菌落数目目_时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。致遗漏菌落的数目。不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。时间。细菌一般在细菌一般在3037的温度下培养的温度下培养12d；放线菌一般在放线菌

40、一般在2528的温度下培养的温度下培养57d；而霉菌一般在而霉菌一般在2528的温度下培养的温度下培养34d。稳定稳定微生物的培养与观察微生物的培养与观察1、土壤取样、土壤取样2、制备培养基：、制备培养基：3、样品的稀释、样品的稀释4、取样涂布、取样涂布5、微生物的培养与观察、微生物的培养与观察一般来说，在一般来说，在一定的培养条件下一定的培养条件下(相同的培养基、温相同的培养基、温度及培养时间度及培养时间)，同，同种微生物表现出稳种微生物表现出稳定的菌落特征。定的菌落特征。一一无菌操作无菌操作1、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌

41、。2、应应在在火火焰焰旁旁称称取取土土壤壤。在在火火焰焰附附近近将将称称好好的的土土样样倒倒入入锥锥形形瓶中，塞好棉塞。瓶中，塞好棉塞。3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。二二做好标记做好标记注明培养基种类、培养日期、平板培养样品注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。的稀释度等。三三规划时间规划时间1、结合对照，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择结合对照，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。培养基是否筛选出一些菌落。2、是否获得了某一稀释度下，菌落数目在是否获得了某一稀释度下，菌落数目在303

42、00的的平板。在这稀释度下，是否至少有两个平板的菌落数相近平板。在这稀释度下，是否至少有两个平板的菌落数相近？3、你统计的每克土壤中含有能分解尿素的细菌的菌落你统计的每克土壤中含有能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他同学的结果接近吗？如果差异很大，可数是多少？与其他同学的结果接近吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？能是什么原因引起的？原理原理1 1：在以在以尿素尿素为唯一氮源的培养基中加入为唯一氮源的培养基中加入酚红指酚红指示剂示剂。培养某种细菌后，如果。培养某种细菌后，如果pHpH升高，指示剂将变红升高，指示剂将变红，说，说明该细菌能够分解尿素。明该细菌能够分解尿素。CO(NH2)2+

43、H2OCO2+2NH3脲 酶原理原理1 1：在以在以尿素尿素为唯一氮源的培养基中加入为唯一氮源的培养基中加入酚红指酚红指示剂示剂。培养某种细菌后，如果。培养某种细菌后，如果pHpH升高，指示剂将变红升高，指示剂将变红，说，说明该细菌能够分解尿素。明该细菌能够分解尿素。原理原理2 2：测定饮水中测定饮水中大肠杆菌大肠杆菌数量的方法是将一定体数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 伊红美蓝伊红美蓝 培养培养基上培养，大肠杆菌基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色菌落呈现黑色，通过记述得出水样中，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。大肠杆菌的数量。CO(N

44、H2)2+H2OCO2+2NH3脲 酶大肠杆菌的大肠杆菌的菌落呈菌落呈黑色黑色中心中心,有或无有或无金属光泽金属光泽大肠杆菌在大肠杆菌在伊红美蓝琼脂伊红美蓝琼脂(EMB)(EMB)上典型特征上典型特征 EMB培养基与大肠杆菌代谢产物产生紫色带金属培养基与大肠杆菌代谢产物产生紫色带金属光边的菌落光边的菌落例例1在微生物群体生长规律的测定中，种内斗争最显著在微生物群体生长规律的测定中，种内斗争最显著最激烈的时期是（）最激烈的时期是（）A调整期调整期B对数期对数期C稳定期稳定期D衰亡期衰亡期例例1在微生物群体生长规律的测定中，种内斗争最显著在微生物群体生长规律的测定中，种内斗争最显著最激烈的时期是（

45、）最激烈的时期是（）A调整期调整期B对数期对数期C稳定期稳定期D衰亡期衰亡期C解析：解析：种内斗争是一种生态因素。种内斗争反应了种内生种内斗争是一种生态因素。种内斗争反应了种内生物对生存空间和生活资源的争夺。在生活空间充裕，营物对生存空间和生活资源的争夺。在生活空间充裕，营养充足的时候，种内斗争的程度是比较低的。随着微生养充足的时候，种内斗争的程度是比较低的。随着微生物个体数目的增加，每个个体的生存空间越来越少，营物个体数目的增加，每个个体的生存空间越来越少，营养物质也越来越少，每个个体对生存空间和资源的争夺养物质也越来越少，每个个体对生存空间和资源的争夺也越来越激烈，种内斗争就越来越激烈。由

46、此可知，在也越来越激烈，种内斗争就越来越激烈。由此可知，在稳定期稳定期的种内斗争最激烈。在衰亡期，微生物的数目已的种内斗争最激烈。在衰亡期，微生物的数目已经开始减少，经开始减少，pH已经极度不适于微生物的生存，次级代已经极度不适于微生物的生存，次级代谢产物积累到很高的程度，这时的微生物的生存斗争主谢产物积累到很高的程度，这时的微生物的生存斗争主要是与无机环境的斗争。要是与无机环境的斗争。例例2使用选择培养基的目的是（使用选择培养基的目的是（）A.培养细菌培养细菌B.培养真菌培养真菌C.使需要的微生物大量繁殖使需要的微生物大量繁殖D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别表现某微生物的特定性

47、状与其他微生物加以区别例例2使用选择培养基的目的是（使用选择培养基的目的是（）A.培养细菌培养细菌B.培养真菌培养真菌C.使需要的微生物大量繁殖使需要的微生物大量繁殖D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别C例例3能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是()A.CO2和和N2B.葡萄糖和葡萄糖和NH3C.CO2和尿素和尿素D.葡萄糖和尿素葡萄糖和尿素例例3能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是()A.CO2和和N2B.葡萄糖和葡萄糖和NH3C.CO2和尿素和

48、尿素D.葡萄糖和尿素葡萄糖和尿素D例例4下列说法不正确的是（下列说法不正确的是（）A.科学家从科学家从7080度热泉中分离到耐高温的度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合聚合酶。酶。B.统计某一稀释度的统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以，以M3作为该样品菌落数的估计值。作为该样品菌落数的估计值。C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。实验结果的影响，提高实验结果的可信度。D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类同其他生物环境相比，

49、土壤中的微生物数量最大，种类最多。最多。例例4下列说法不正确的是（下列说法不正确的是（）A.科学家从科学家从7080度热泉中分离到耐高温的度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合聚合酶。酶。B.统计某一稀释度的统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以，以M3作为该样品菌落数的估计值。作为该样品菌落数的估计值。C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。实验结果的影响，提高实验结果的可信度。D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类同其他生物环境

50、相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。最多。B例例5为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（）加入（）A.较多的氮源物质较多的氮源物质B.较多的碳源物质较多的碳源物质C.青霉素类药物青霉素类药物D.高浓度食盐高浓度食盐例例5为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（）加入（）A.较多的氮源物质较多的氮源物质B.较多的碳源物质较多的碳源物质C.青霉素类药物青霉素类药物D.高浓度食盐高浓度食盐C例例6利用生物工程生产啤酒、味精、胰岛素、酸奶的常用菌利用生物工程生产啤酒、味精、胰岛素、酸奶的常