DNA重组技术的基本工具 PPT课件.ppt

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1、专题专题1 基因工程基因工程基因工程基因工程又叫做又叫做基因拼接技术基因拼接技术或或DNA重组技术重组技术。是在生物体外，通过对是在生物体外，通过对DNA分子进行人工分子进行人工“剪剪切切”和和“拼接拼接”，对生物的基因进行改造和重新组，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出在受体细胞内表达，产生出人类所需要的新的生物类人类所需要的新的生物类型和生物产品型和生物产品 基础理论基础理论 和技术的发展和技术的发展 催生了基因工程催生了基因工程阅读课本第阅读课本第2页页1.1 DNA重组技术的基

2、本工具重组技术的基本工具n是在生物体外，通过对是在生物体外，通过对DNA分子进行人工分子进行人工“剪切剪切”和和“拼接拼接”，对生物的基因进行改，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出生出人类所需要的新的生物类型和生物产品人类所需要的新的生物类型和生物产品分析概念分析概念：工工具具为什么为什么要加工要加工什么是什么是表达表达用什么用什么导入导入基因操作的工具基因操作的工具 基因的剪刀（分子手术刀）基因的剪刀（分子手术刀）限制性核酸内切酶（限制酶）限制性核酸内切

3、酶（限制酶）基因的针线（分子缝合针）基因的针线（分子缝合针）DNA连接酶连接酶基因的运输工具（分子运输车）基因的运输工具（分子运输车）运载体运载体 到哪里去寻找这种酶到哪里去寻找这种酶（1）限制酶）限制酶 n 分布：主要在原核生物中。分布：主要在原核生物中。n 作用特点作用特点:专一性，识别特定核苷酸序列，专一性，识别特定核苷酸序列，切割特定切点。切割特定切点。n 结果：产生黏性未端和平末端结果：产生黏性未端和平末端n 举例：举例：EcoR1限制酶、限制酶、Sma1限制酶限制酶 与我们学过的与我们学过的DNA酶相同吗？酶相同吗？识别序列的特点识别序列的特点作用是什么作用是什么两者的区别两者的区

4、别这两种酶切的特点这两种酶切的特点切断的是什么键切断的是什么键限制酶的识别特点限制酶的识别特点n以中轴线双侧的以中轴线双侧的DNA上碱基呈反向对称，重复排列上碱基呈反向对称，重复排列n n如：如：GAA TTC CCC GGGn CTT AAG GGG CCC（2）DNA连接酶连接酶 n连接的部位：磷酸和脱氧核糖之间的键：连接的部位：磷酸和脱氧核糖之间的键：磷酸二酯键（梯子的扶手）磷酸二酯键（梯子的扶手）n 结果：两个相同的未端的连接。结果：两个相同的未端的连接。n举例：举例：Ecoli DNA连接酶连接酶 n T4 DNA连接酶连接酶 与与DNA聚合酶聚合酶相同吗相同吗二者在性质二者在性质上的区别上的区别（3）运载体）运载体 作用：将外源基因送入受体细胞。作用：将外源基因送入受体细胞。具备的条件：具备的条件：能在宿主细胞内复制能在宿主细胞内复制 并稳定地保存。并稳定地保存。具有多个限制酶切点。具有多个限制酶切点。具有某些标记基因具有某些标记基因 对受体细胞无害对受体细胞无害 举例：质粒、噬菌体举例：质粒、噬菌体 和动植物病毒。和动植物病毒。为什么为什么要具备要具备这些条件这些条件