人感染H7N9禽流感防控样本采集、检测与运送要求 PPT课件.ppt

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1、人感染人感染H7N9H7N9禽流感防控禽流感防控样本采集、检测与运送要求样本采集、检测与运送要求楊晓恒2024/4/101采集对象采集对象人感染人感染H7N9H7N9禽流感疑似病例禽流感疑似病例经医院专家会诊，不能排除人感染经医院专家会诊，不能排除人感染H7N9H7N9禽流感的禽流感的肺炎病例肺炎病例,应同时具备以下应同时具备以下4 4条条:1 1、发热、发热(腋下体温腋下体温38)38)；2 2、具有肺炎的影像学特征；、具有肺炎的影像学特征；3 3、发病早期白细胞总数降低或正常、发病早期白细胞总数降低或正常,或淋巴细或淋巴细胞分类计数减少；胞分类计数减少；4 4、不能从临床或实验室角度诊断为

2、常见病原所、不能从临床或实验室角度诊断为常见病原所致的肺炎。致的肺炎。出现出现发热及咳嗽等急性呼吸道感染症状发热及咳嗽等急性呼吸道感染症状的人感染的人感染H7N9H7N9禽流感确诊病例的密切接触者。禽流感确诊病例的密切接触者。2024/4/102标本采集的种类标本采集的种类抗病毒治疗之前必须采集：抗病毒治疗之前必须采集：鼻咽分泌物鼻咽分泌物口腔含漱液口腔含漱液呼吸道分泌物呼吸道分泌物气管深部咳痰气管深部咳痰气管吸取物气管吸取物肺深部吸取物肺深部吸取物/灌洗液灌洗液双份血清双份血清优先采集优先采集下呼吸道下呼吸道标本标本2024/4/103病毒采样液（病毒采样液（4ml）MEM或或DMEM液液

3、Hanks液液 商品化采样管商品化采样管聚丙乙烯纤维头拭子（聚丙乙烯纤维头拭子（2根）根）常规采血管常规采血管 全血全血5ml 血清血清2ml2024/4/104采样用具采样用具标本采集的方法标本采集的方法咽拭子咽拭子：用2根拭子同时擦拭双侧咽扁桃体双侧咽扁桃体及咽后壁及咽后壁，将拭子头浸入含4ml采样液的管中，尾部折断弃去。2024/4/107鼻拭子鼻拭子：将1根拭子轻轻插入鼻道内鼻腭鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出；取另1根以同样的方法采集另一侧鼻孔；将上述2根拭子浸入同一含4ml采样液的管中，尾部折断弃去。2024/4/1081 插入鼻腔2 放置数秒鼻拭子采集鼻拭子采集4 放入 VT

4、M3 旋转 2-3Ts5 折断多余部分6 盖紧盖子鼻咽抽取物或呼吸道抽取物鼻咽抽取物或呼吸道抽取物：用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液或从用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液或从气管抽取呼吸道分泌物。先将收集器头部插入鼻气管抽取呼吸道分泌物。先将收集器头部插入鼻腔或气管，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退腔或气管，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出；收集抽取的粘液，并用采样液出；收集抽取的粘液，并用采样液4ml涮洗收集器涮洗收集器1次。次。呼吸道灌洗液：呼吸道灌洗液：将收集器头部从鼻孔或气管插口处插入气管（约将收集器头部从鼻孔或气管插口处插入气管（约30cm30cm深处），注入深处），注入

5、5ml5ml生理盐水，接通负压，旋转生理盐水，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出；收集抽取的粘液，并用收集器头部并缓慢退出；收集抽取的粘液，并用采样液涮洗收集器采样液涮洗收集器1 1次次（可用小孩导尿管接在（可用小孩导尿管接在50ml50ml注射注射器上来代替收集）。器上来代替收集）。2024/4/1010咽漱液：咽漱液：用用10 ml10 ml生理盐水漱喉。漱时让患者头部生理盐水漱喉。漱时让患者头部微后仰，发微后仰，发“噢噢”声，让生理盐水在咽部转动，然声，让生理盐水在咽部转动，然后，用后，用50ml50ml的无菌螺口塑料管收集洗液。的无菌螺口塑料管收集洗液。痰液：痰液：医护人员采取拍背的方

6、式帮助患者深咳，将医护人员采取拍背的方式帮助患者深咳，将咳出的痰液收集到咳出的痰液收集到50ml50ml的无菌螺口塑料管中。最好的无菌螺口塑料管中。最好是医护人员采取吸痰的方法收集深部痰液，注入至是医护人员采取吸痰的方法收集深部痰液，注入至15ml15ml无菌螺口塑料管中。无菌螺口塑料管中。环境污水：环境污水：选择禽类饮水槽选择禽类饮水槽、清洗禽类的盆或桶清洗禽类的盆或桶、禽类活动禽类活动或笼具旁的水沟或水池，用一次性玻璃棒或吸管或笼具旁的水沟或水池，用一次性玻璃棒或吸管充分搅匀充分搅匀后后采集采集5-10ml5-10ml污水于无菌的外螺旋盖的管内，旋紧管盖。污水于无菌的外螺旋盖的管内，旋紧管

7、盖。禽类粪便：禽类粪便：选择禽舍或环境中的选择禽舍或环境中的新鲜新鲜禽类粪便，用无菌拭子禽类粪便，用无菌拭子夹或挑取粪便夹或挑取粪便3-5g3-5g置于含置于含5ml5ml采样液的管中，弃去尾部，旋紧采样液的管中，弃去尾部，旋紧管盖。管盖。笼具涂抹拭子：笼具涂抹拭子：用蘸有采样液的拭子擦拭笼具表面禽类最常用蘸有采样液的拭子擦拭笼具表面禽类最常接触的接触的3-53-5个不同部位（包括笼具底部），然后将擦拭过的拭个不同部位（包括笼具底部），然后将擦拭过的拭子放入含子放入含5ml5ml采样液的采样管中，弃去尾部，旋紧管盖。也可采样液的采样管中，弃去尾部，旋紧管盖。也可以用多个拭子充分擦拭笼具表面后放

8、到一个采样管中。以用多个拭子充分擦拭笼具表面后放到一个采样管中。禽流感外环境标本采集禽流感外环境标本采集环境标本应急监测环境标本应急监测各县市区疾控中心各县市区疾控中心每月每月2 2次次采集活禽批发市场、中采集活禽批发市场、中心农贸市场的环境标本，心农贸市场的环境标本，每地点不少于每地点不少于3 3份标本份标本/次次，采集的标本以禽类饮水和市场污水为重点。，采集的标本以禽类饮水和市场污水为重点。2024/4/1013注注意意事事项项1、出去采样时一定要带够大冰袋，用泡沫箱运输采集后的样本，48h内低温运输至实验室2、采集粪便时一定要采集新鲜的（一般较湿润）粪便，太陈旧（干燥）的粪便对我们的检测

9、意义不大。尤其在缓冲区养殖户家中采集粪便标本时，由于多鸡鸭混养难以分辨鸭粪和鸡粪，最好能找到鸭子刚排泄的新鲜粪便。标本的运送标本的运送H7N9H7N9禽流感病毒实验室活动和样本运输按照人间禽流感病毒实验室活动和样本运输按照人间传染的病原微生物名录中传染的病原微生物名录中高致病性禽流感病毒高致病性禽流感病毒进进行管理。行管理。标本采集、包装、运送等应当严格按照标本采集、包装、运送等应当严格按照可感染人可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定理规定（卫生部第（卫生部第4545号令）等生物安全相关规定号令）等生物安全相关规定执行。执行。病

10、例的病例的临床标本临床标本采集后，县级疾病预防控制机构和采集后，县级疾病预防控制机构和病例收治的医疗机构要密切配合，按照病例收治的医疗机构要密切配合，按照B类感染性类感染性物质物质进行包装运输，在低温条件下，进行包装运输，在低温条件下，24小时内送到小时内送到当地流感监测网络实验室当地流感监测网络实验室进行检测。进行检测。B类感染性物质包装类感染性物质包装2024/4/10172024/4/10182024/4/1019实验室检测检测流程实验室检测检测流程常规监测流感样病例常规监测流感样病例实验室收到标本后实验室收到标本后1 1周内周内完成甲、乙型流感病毒通完成甲、乙型流感病毒通用引物检测。用

11、引物检测。甲型阳性的开展甲型阳性的开展H1H1、H3H3、H7H7、H5H5亚型检测，乙型亚型检测，乙型阳性的开展阳性的开展BYBY、BVBV亚型检测。亚型检测。H5H5、H7H7亚型阳性立即网络报告，标本上送省、国亚型阳性立即网络报告，标本上送省、国家家CDCCDC复核和进一步检测。复核和进一步检测。季节性流感病毒核酸检测阳性的标本继续进行流季节性流感病毒核酸检测阳性的标本继续进行流感病毒分离，毒株上送省、国家感病毒分离，毒株上送省、国家CDCCDC复核。复核。甲型通用引物阳性而不能区分型别或亚型的毒株甲型通用引物阳性而不能区分型别或亚型的毒株和阳性标本要求在和阳性标本要求在4848小时内送

12、至国家流感中心小时内送至国家流感中心（2424小时内送至省小时内送至省CDCCDC）。）。H7N9H7N9排查病例排查病例实验室收到标本后实验室收到标本后2424小时小时内完成甲、乙型流感病内完成甲、乙型流感病毒通用引物和毒通用引物和H5H5、H7H7亚型的检测。亚型的检测。H5H5、H7H7亚型阳性立即网络报告，标本上送省、国亚型阳性立即网络报告，标本上送省、国家家CDCCDC复核和进一步检测。复核和进一步检测。甲型阳性甲型阳性H5H5、H7H7亚型阴性的标本继续开展季节性亚型阴性的标本继续开展季节性流感病毒核酸检测和流感病毒分离，毒株上送省流感病毒核酸检测和流感病毒分离，毒株上送省CDCC

13、DC复核。复核。甲型通用引物阳性而不能区分型别或亚型的毒株甲型通用引物阳性而不能区分型别或亚型的毒株和阳性标本要求在和阳性标本要求在4848小时内送至国家流感中心小时内送至国家流感中心（2424小时内送至省小时内送至省CDCCDC）。）。没有条件开展没有条件开展核酸检测的医核酸检测的医疗机构请尽快疗机构请尽快开展开展快速抗原快速抗原检测检测初筛试验。初筛试验。核酸检测仪器及试剂核酸检测仪器及试剂Realtime PCR仪：仪：ABI7300/7500抽提试剂：抽提试剂：invitrogen Viral RNA/DNA mini kit检测试剂：检测试剂：invitrogen one-step qRT-PCR kit引物探针：自合成引物探针：自合成（见附表）（见附表）2024/4/1024PCR反应体系反应体系2024/4/10252*reaction buffer 12.5ul酶0.5ul上游引物0.25ul下游引物0.25ul探针0.125ulH2O6.375ul模板5ul25ulPCR反应条件反应条件2024/4/1026