国内外奶牛胚胎移植技术研究及产业化进展 PPT课件.ppt

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1、国内外奶牛胚胎移植技术研究及产业化进展第一部分奶牛胚胎移植及相关技术的研究进展奶牛胚胎移植技术奶牛胚胎移植技术定义是指对生产性能优良和遗传性稳定的母牛经过超数排卵处理后，将多出自然排卵数几倍的受精卵取出，或者将通过体外受精方式获得的胚胎，分别移植到生理状态相同的受体母牛体内，使之产出优良后代的技术。奶牛胚胎移植技术的意义奶牛胚胎移植技术的意义1充分发挥优良母畜的繁殖潜力，成倍提高繁殖效率2用MOET技术培育种公牛，加大选择强度，缩短世代间隔3代替活畜进行洲际、国际引种4建立基因库，保存品种资源奶牛胚胎移植技术的关键技术环节奶牛胚胎移植技术的关键技术环节超数排卵技术非手术胚胎采集技术胚胎冷冻/解

2、冻技术受体牛同期发情技术非手术胚胎移植技术以胚胎移植为基础的相关胚胎生物技术以胚胎移植为基础的相关胚胎生物技术胚胎移植胚胎移植A ADDB BC CE E其它体外受精技术胚胎性别鉴定技术胚胎分割技术胚胎性别控制技术国内外胚胎移植及主要相关生物技术的研究成果时间表国内外胚胎移植及主要相关生物技术的研究成果时间表技技术术名称名称国内国内国国际际时间时间差差牛超数排卵牛超数排卵1978中科院遗传所和上海市奶牛公司1940Casida38年牛非手牛非手术术冲胚冲胚1978中科院遗传所和上海市奶牛公司1972Sugie6年胚胎程序化冷胚胎程序化冷冻冻1982中科院遗传所和上海市奶牛公司1972Whitt

3、ingham10年胚胎玻璃化冷胚胎玻璃化冷冻冻1993朱士恩1985Rall8年胚胎分割胚胎分割1987窦忠英1981Willadsen6年胚胎嵌合体胚胎嵌合体1989丛笑倩1984Bradley5年牛体外受精牛体外受精1989旭日干1978Brackett11年PCR胚胎性胚胎性别鉴别鉴定定1992曾溢滔等1990Herr2年牛活体采卵牛活体采卵1999刘云海1982Sirard17年体体细细胞克隆胞克隆2000张涌1997Wilmut3年牛胚胎移植主要专项技术国内外水平比较牛胚胎移植主要专项技术国内外水平比较技技术术名称名称美国、加拿大美国、加拿大国内国内超数排卵获可用胚*5.56.5枚5

4、6枚鲜常规胚胎移植妊娠率*55%65%50%60%冷冻常规胚胎移植妊娠率*50%60%40%50%PCR性别鉴定准确率98%2%98%2%性控胚胎雌性率85%95%85%95%取样后鲜胚移植妊娠率*55%65%50%55%取样后冻胚移植妊娠率*55%65%40%50%性控胚胎妊娠率*55%65%40%50%*饲养管理水平对技术指标影响较大1.超数排卵技术超数排卵技术牛超数排卵的目的：最大限度地获得受精卵和可用胚胎 牛的超排反应和胚胎质量变异性很大促性腺激素种类、批号、处理时间、剂量、年龄、季节、品种处理时卵巢生理状态、营养状况、繁殖状态和重复超排次数等牛的超排方法：CIDR+FSH+PG(16

5、天)目前的研究重点：提高超排效率 1、重复超排：间隔；超排次数 2、抑制素免疫提高牛超排效率 3、与超排有关的基因位点的研究重复超排效果的比较重复超排效果的比较(数据来自北京安伯胚胎生物技术中心)次次别别处处理理牛数牛数超排有效超排有效n%平均平均回收胚数回收胚数平均平均可用胚数可用胚数平均平均退化胚数退化胚数平均平均未受精数未受精数第一次第一次847892.9%10.764.51a7.263.65a2.382.47a1.121.51a第二次第二次322990.6%10.595.94a7.795.04a2.001.73a0.790.94A第三次第三次292896.6%10.364.86a6.2

6、54.06a2.572.65a1.542.53ABab第四次第四次201995.0%12.266.66a7.264.27a2.533.67a2.473.76Bb第五次第五次131292.3%11.427.57a7.085.71a2.252.01a2.082.15ABab注：同列上标大写字母相同者表示差异不显著（P0.05）2.同期发情技术同期发情技术不同牛同期发情方案的效果比较*（李树静等，2002年）*牛同期发情的目的是便于人工受精和胚胎移植，更适于集约化管理。受体牛营养状况对同期发情效果有显著影响。方法方法1次或次或2次次PG肌注肌注CIDR+PGCIDR+E2+PG备备注注原理原理溶黄体

7、延长黄体期延长黄体期外周血液孕酮水平迅速下降发发情率情率53.1%（1次PG）；81.0%（2次PG）83.2%88.4%发发情情时间时间注射后4896h撤栓后3672h撤栓后3648h同期化程度同期化程度发情率均匀分布在注射后4896h85%以上在撤栓后48h内发情95%以上在撤栓 后 48h内 发情黄体合格率黄体合格率 86.3%93.8%82.5%移植妊娠率移植妊娠率 43.7%58.3%48.8%优优点点成本低发情较集中，可精确安排工作量；受体牛利用率高发情高度集中，可精确安排工作量缺点缺点发情分散，不易精确安排工作量成本高成本高3.胚胎冷冻技术胚胎冷冻技术胚胎程序化冷冻胚胎程序化冷冻

8、(植冰植冰):1.5M乙二醇（0.1M蔗糖），直接解冻移植 进口胚胎检疫条例要求：进口胚胎检疫条例要求：透明带完整；0.1%胰蛋白酶洗10次；在全封闭的细管中冷冻。胚胎玻璃化冷冻胚胎玻璃化冷冻(玻璃化溶液、提高降温速度)：OPS玻璃化冷冻细管法 冷冻环法滴冻法微细玻璃管法、封闭式拉长塑料细管法 4.胚胎性别鉴定及控制技术胚胎性别鉴定及控制技术胚胎性别鉴定技术：胚胎性别鉴定技术：PCR法（电泳和非电泳鉴定）：双引物一步法PCR扩增，耗时65分钟。灵敏度、准确率高、污染率和不反应率低，适于在生产现场应用。2002年，Hasler对7-8日龄的3,964枚体内胚胎及1181枚体外胚胎进行了性别鉴定，

9、在妊娠后经B超测试获得的准确率为雄性为98.7%、雌性为94.4%。LAMP法：环-媒恒温扩增法，比PCR法更为快速简便，无需电泳，肉眼即可辨别，但鉴定准确率不高，容易产生非特异性扩增。胚胎性别控制技术：胚胎性别控制技术：用分离后的X或Y精子生产体内或体外受精胚胎PCR胚胎性别鉴定与胚胎性别鉴定与X精子胚胎性别控制技术精子胚胎性别控制技术在奶牛中的应用效果比较在奶牛中的应用效果比较（体内受精（体内受精冷冻冷冻胚胎，胚胎，20022010年，李树静等）年，李树静等）胚胎胚胎类类型型常常规规胚胎胚胎PCR性性别鉴别鉴定胚胎定胚胎X精子性精子性别别控制胚胎控制胚胎特点特点对受精后67天的早期胚胎进行

10、取样，分析DNA用分离后的精子输精，获得近90性别一致的后代超排超排获获得的可用胚得的可用胚胎数量胎数量56枚(育成牛、经产牛)56枚(非鉴定，育成牛、经产牛)35枚(育成牛)得到一得到一头头母牛母牛犊犊所所需胚胎数量需胚胎数量5枚5枚(非鉴定)3枚(X性控胚胎)得到一得到一头头母牛母牛犊犊所所需受体母牛数量需受体母牛数量6头3头4头移植妊娠率移植妊娠率45%50%45%50%3545%产产母母犊犊率率4550%9599%7585%获获得得1头头6月月龄龄母牛母牛犊犊的成本的成本14260元8140元人民币6480元优优点点操作简便，可任意选择种公牛准确率高，可任意选择种公牛操作简便，雌性率较

11、高缺点缺点成本高，效率低操作较烦琐，耗时长，成本高对种公牛的选择有局限性不同类型胚胎移植后对妊娠率和产犊情况的影响不同类型胚胎移植后对妊娠率和产犊情况的影响注：i.同一列数值中具有相同字母上标示差异不显著(P0.05)；ii.同一列数值中具有不同字母上标示差异极显著(P0.05)。同一列数值中具有不同字母上标表示差异极显著(p0.05)。同一列数值中具有不同字母上标表示差异极显著(p0.01)。同一列数值中具有相同字母不同大小写之间表示差异显著(p0.05)*表示胚胎移植结合人工授精的繁育技术路线。奶牛胚胎移植技术的效益体现在哪儿？发展模式发展模式高产奶牛优秀种公牛超数排卵常规冻精X冻精性控雌性体内胚胎性鉴雌性体内胚胎性鉴雄性体内胚胎常规胚胎性别鉴定胚胎组织块移植到各地区同期发情的合格受体牛对应的胚胎冷冻解冻技术高产优质母牛犊计算机管理系统