抑菌试验 PPT课件.ppt

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1、BETTERBETTER实验三实验三 牛津杯法抑菌试验牛津杯法抑菌试验 （杯碟法）（杯碟法）u扩散法又包括纸片法、牛津杯法和打孔法。扩散法又包括纸片法、牛津杯法和打孔法。u由于扩散法操作简单，成本低，已经被大多数由于扩散法操作简单，成本低，已经被大多数实验室和基层单位所采用实验室和基层单位所采用n n稀释法包括试管稀释法和微量稀释法，通稀释法包括试管稀释法和微量稀释法，通过测试细菌在含不同浓度药物培养基内的过测试细菌在含不同浓度药物培养基内的生长情况，判断其最低抑菌浓度（生长情况，判断其最低抑菌浓度（MIC）。）。n n扩散法扩散法 uu将培养基平板置培养箱中培养，一方面试验菌（指将培养基平板

2、置培养箱中培养，一方面试验菌（指将培养基平板置培养箱中培养，一方面试验菌（指将培养基平板置培养箱中培养，一方面试验菌（指示菌）开始生长繁殖；另一方面抗生素呈球面扩散，示菌）开始生长繁殖；另一方面抗生素呈球面扩散，示菌）开始生长繁殖；另一方面抗生素呈球面扩散，示菌）开始生长繁殖；另一方面抗生素呈球面扩散，形成递减的梯度浓度，离杯越近，抗生素浓度越大，形成递减的梯度浓度，离杯越近，抗生素浓度越大，形成递减的梯度浓度，离杯越近，抗生素浓度越大，形成递减的梯度浓度，离杯越近，抗生素浓度越大，离杯越远抗生素浓度越小。离杯越远抗生素浓度越小。离杯越远抗生素浓度越小。离杯越远抗生素浓度越小。uu在牛津杯周围

3、抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，在牛津杯周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，在牛津杯周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，在牛津杯周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。形成透明的抑菌圈。形成透明的抑菌圈。形成透明的抑菌圈。uu抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度（药敏实验）或药物对指示细菌的抑菌程度（抑菌（药敏实验）或药物对指示细菌的抑菌程度（抑菌（药敏实验）或药物对指示细菌的抑菌程度（抑菌（药敏实验）或药物对指示细菌的抑菌程度（抑菌试验）。

4、试验）。试验）。试验）。一、实验原理一、实验原理一、实验原理一、实验原理uu抗生素浓度越高，抑菌圈越大。抗生素浓度越高，抑菌圈越大。uu在抑菌圈的边缘处，琼脂培养基中所含抑菌在抑菌圈的边缘处，琼脂培养基中所含抑菌物质的浓度即为该菌悬液中对该种指示菌的物质的浓度即为该菌悬液中对该种指示菌的最低抑菌浓度（最低抑菌浓度（MIC）。uu抑菌圈直径与药物对测试菌的最低抑菌浓度抑菌圈直径与药物对测试菌的最低抑菌浓度 呈负相关，即抑菌圈愈大，呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。愈小。一、实验原理一、实验原理一、实验原理一、实验原理二、实验材料二、实验材料二、实验材料二、实验材料n n培养基：培养基：培养基：

5、培养基：牛肉膏蛋白胨固体培养基牛肉膏蛋白胨固体培养基牛肉膏蛋白胨固体培养基牛肉膏蛋白胨固体培养基n n菌种：菌种：菌种：菌种：大肠杆菌（大肠杆菌（大肠杆菌（大肠杆菌（E.coliE.coli)金黄色葡萄球菌（金黄色葡萄球菌（金黄色葡萄球菌（金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus)枯草芽孢杆菌（枯草芽孢杆菌（枯草芽孢杆菌（枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilisBacillus subtilis)n n药品：阿莫西林、黄芪多糖、药品：阿莫西林、黄芪多糖、药品：阿莫西林、黄芪多糖、药品：阿莫西林、黄芪多糖、n n 其他：牛津杯、

6、培养皿、酒精棉、酒精灯、涂布器、其他：牛津杯、培养皿、酒精棉、酒精灯、涂布器、其他：牛津杯、培养皿、酒精棉、酒精灯、涂布器、其他：牛津杯、培养皿、酒精棉、酒精灯、涂布器、移液枪、移液枪、移液枪、移液枪、1mL1mL、200uL 200uL 枪头、枪头、枪头、枪头、恒温培养箱、恒温培养箱、恒温培养箱、恒温培养箱、超净工超净工超净工超净工作台、接种环作台、接种环作台、接种环作台、接种环n n“牛津杯”是放被测抗生素的不锈钢小管，小管内径为6mm，外径为8mm，高10mm的圆筒形管子，管子的重量尽可能相等。牛津杯牛津杯三、实验操作三、实验操作三、实验操作三、实验操作1.倒平板倒平板：将已灭菌的琼脂培

7、养基加热到完全融化，倒在培养皿内，每皿约20ml，凝固。2.标记标记：菌种、牛津杯摆放位置、药物及其 浓度3.制备菌悬液制备菌悬液：用生理盐水洗下试管内的菌苔并稀释。4.菌液涂布菌液涂布：吸取1mL 菌液入平板表面，用涂布器涂布将菌液涂布均匀5.摆放牛津杯摆放牛津杯：在培养基表面垂直摆放牛津杯，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙。6.加入待检药液加入待检药液：在杯中加入不同稀释度的药液或待检样品。7.孵育孵育：加满后在37 培养1618 h。8.结果报告：结果报告：用毫米尺量取抑菌圈直径，参用毫米尺量取抑菌圈直径，参考表的标准判读结果，按敏感（考表的标准判读结果，按敏感（S）、中介）、中介（I）、耐药（）、耐药（R）报）报 注意事项注意事项注意事项注意事项n n在超净工作台中或酒精灯旁操作n n平板倒好，一定要平 n n牛津杯立直，才能保证杯内抑菌物质均匀的向四周扩散 n n牛津杯均匀摆放于培养基上，位置安排适中，防止出现抑制圈重叠，可在平皿中央摆一个，外周等距离摆56个。思考题思考题思考题思考题n n青霉素、头孢菌素类药物的抗菌机制如何？药敏试验药敏试验药敏试验药敏试验n n抗菌药物敏感性试验，简称药敏试验，是指对敏感性不能预测的分离菌株进行试验，测试抗菌药在体外对病原微生物有无抑制作用，以指导选择治疗药物和了解区域内常见病原菌耐药性变迁，有助于经验性治疗选药