《高效液相色谱培训》课件.pptx

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1、高效液相色谱培训高效液相色谱简介高效液相色谱仪器介绍高效液相色谱操作流程高效液相色谱实验技术高效液相色谱实验注意事项与常见问题解析01高效液相色谱简介0102高效液相色谱的定义它利用固定相和流动相之间的相互作用，使不同成分在色谱柱上得到分离。高效液相色谱（HPLC）是一种分离和检测复杂样品中各种成分的色谱技术。高效液相色谱的原理根据不同物质在固定相和流动相之间的分配系数差异实现分离。通过调整流动相的组成、pH值和离子强度等参数，可以改变分配系数，提高分离效果。在制药行业中用于药物的分离和质量控制。在食品安全领域用于检测食品中的农药残留和有害物质。在环境监测中用于检测水体中的有机污染物。高效液相

2、色谱的应用02高效液相色谱仪器介绍有恒流泵、恒压泵和梯度泵，根据不同的需求选择合适的泵。常见类型流量范围、流量精度、压力范围和稳定性等，这些参数直接影响分离效果和实验的重现性。泵的性能参数泵有紫外-可见光检测器、荧光检测器、电化学检测器和质谱检测器等，根据被测物质的性质选择合适的检测器。灵敏度、线性范围、噪音和漂移等，这些参数影响检测的准确性和可靠性。检测器检测器的性能参数常见类型有硅胶柱、聚合物柱和复合柱等，根据分离需求选择合适的色谱柱。常见类型粒径、孔径、填料类型和装填技术等，这些参数影响分离效果和色谱柱的使用寿命。色谱柱的性能参数色谱柱其他附件包括进样器、馏分收集器、在线脱气机、梯度混合

3、器等，这些附件对实验的准确性和可靠性起到辅助作用。选择合适的附件可以提升实验效率，降低误差，提高数据的可靠性。其他附件03高效液相色谱操作流程样品收集样品提取样品净化样品浓缩样品前处理01020304确保样品来源可靠，无污染，并按照规定的方法进行收集。根据样品性质，选择合适的溶剂进行提取，以获得目标组分。去除杂质，提高目标组分的纯度，以便更好地分离和检测。将提取液进行浓缩，以便于上机分析。根据目标组分的性质，选择合适的流动相，如有机溶剂或混合溶剂。选择合适的流动相确保流动相无杂质，以提高色谱柱的使用寿命和分离效果。流动相的纯化根据实验要求，按照比例配制流动相。流动相的配制去除流动相中的气泡，以

4、免影响泵的正常运行和检测器的稳定性。流动相的脱气流动相的准备根据目标组分的性质和分离要求，选择合适的色谱柱类型和规格。选择合适的色谱柱色谱柱的安装色谱柱的预处理按照规定的步骤安装色谱柱，确保密封性和稳定性。使用适当的溶剂冲洗色谱柱，以去除残留物并提高分离效果。030201连接色谱柱打开高效液相色谱仪的泵，检查泵的运行是否正常。启动泵将检测器与色谱柱连接，确保检测器正常运行。连接检测器根据实验要求，设置适当的检测波长和灵敏度等参数。设置检测器参数启动泵和检测器注入样品将处理好的样品注入进样器中，按照规定的进样量进行进样。运行样品启动泵和检测器，开始运行样品，记录色谱图和数据。运行样品 数据处理与

5、分析数据采集将检测器输出的信号采集到计算机中，记录色谱图和数据。数据处理对采集到的数据进行基线校正、峰识别、定量分析和定性分析等处理。结果分析根据处理后的数据，对目标组分的含量、纯度和分离效果进行分析和评估。04高效液相色谱实验技术总结词梯度洗脱技术是高效液相色谱中常用的分离技术，通过在流动相中逐渐改变溶剂的组成，实现对复杂样品的分离。详细描述在梯度洗脱过程中，流动相的组成随时间线性或非线性地变化，使得不同组分在色谱柱上的吸附和解吸平衡不断发生变化，从而实现样品的分离。梯度洗脱技术广泛应用于生物医药、环境监测、食品分析等领域。梯度洗脱技术反相色谱技术总结词反相色谱技术是高效液相色谱中常用的一种

6、分离模式，通过在流动相中加入适量的有机溶剂，降低溶质的极性，从而实现分离。详细描述在反相色谱中，常用的固定相为硅胶或键合型硅胶，流动相一般为乙腈-水或甲醇-水混合物。反相色谱技术适用于极性物质的分离，如氨基酸、蛋白质、核酸等。正相色谱技术是一种高效的分离模式，通过在流动相中加入适量的极性溶剂，提高溶质的极性，从而实现分离。总结词在正相色谱中，常用的固定相为硅胶或键合型硅胶，流动相一般为醇类、胺类等极性溶剂。正相色谱技术适用于非极性物质的分离，如烃类、酯类等。详细描述正相色谱技术总结词离子交换色谱技术是一种基于离子交换原理的分离模式，通过流动相中的离子与固定相中的离子进行交换，实现对样品的分离。

7、详细描述在离子交换色谱中，常用的固定相为离子交换树脂或硅胶键合型离子交换剂，流动相一般为电解质溶液。离子交换色谱技术适用于阴离子和阳离子的分离，如氨基酸、核苷酸等生物分子以及各种无机和有机离子的分离。离子交换色谱技术05高效液相色谱实验注意事项与常见问题解析在实验过程中，应始终关注实验室安全，遵守实验室规定，避免发生意外事故。确保实验室安全正确设置仪器参数保持仪器清洁正确操作进样器在开始实验前，应仔细检查并设置高效液相色谱仪的参数，以确保实验结果的准确性和可靠性。实验过程中要保持仪器清洁，避免污染和交叉污染，以确保实验结果的准确性。进样器是高效液相色谱实验中非常重要的设备之一，应正确操作进样器

8、，避免样品污染和交叉污染。实验注意事项峰形异常可能是由于进样量过大、色谱柱损坏或流动相不匹配等原因引起的，需要进行相应的排查和调整。峰形异常分离度不足可能是由于流动相选择不当、色谱柱选择不当或样品性质等原因引起的，需要进行相应的调整和优化。分离度不足重现性差可能是由于仪器性能不稳定、流动相不纯或样品不均匀等原因引起的，需要进行相应的排查和优化。重现性差基线漂移可能是由于流动相不纯、仪器性能不稳定或环境因素等原因引起的，需要进行相应的排查和优化。基线漂移常见问题解析为了保持色谱柱的性能和延长其使用寿命，应定期清洗色谱柱，以去除残留物和污染物。定期清洗色谱柱应定期检查高效液相色谱仪的性能，以确保其正常运行和准确性。定期检查仪器性能流动相的存储和使用应遵循相应的规定和注意事项，以确保其质量和稳定性。正确存储流动相维护与保养感谢观看THANKS