《DNA提取和pcr扩增》课件.pptx
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1、汇报人:,DNA提取和PCR扩增/目录目录02DNA提取01点击此处添加目录标题03PCR扩增05DNA提取和PCR扩增技术的发展趋势04DNA提取和PCR扩增的应用01添加章节标题02DNA提取提取原理提取方法:利用离心和吸附分离DNA原理:利用DNA在不同浓度的盐溶液中的溶解度不同提取步骤:破碎细胞、分离细胞核、溶解DNA、洗涤和纯化提取意义:为后续的PCR扩增提供模板提取步骤样品处理:将样品进行研磨、破碎等处理,使DNA释放出来提取DNA:使用DNA提取试剂盒,按照说明书进行DNA提取纯化DNA:使用DNA纯化试剂盒,将提取的DNA进行纯化检测DNA:使用DNA检测试剂盒,对提取的DNA
2、进行检测,确保其质量和浓度符合要求提取过程中的注意事项确保实验环境无菌,避免污染使用无菌器材和试剂,避免交叉污染提取过程中避免DNA降解,保持DNA完整性提取过程中避免DNA损失,确保提取效率提取过程中避免DNA污染,确保实验结果准确性提取过程中注意安全操作,避免伤害提取结果检测荧光定量PCR:通过荧光信号检测DNA扩增情况电泳法:通过电泳分离DNA片段,观察DNA条带紫外分光光度法:测量DNA溶液的吸光度,判断DNA浓度凝胶电泳法:通过凝胶电泳分离DNA片段,观察DNA条带03PCR扩增PCR原理概念:聚合酶链式反应,是一种在体外快速扩增特定DNA片段的方法。原理:通过DNA聚合酶的催化,以
3、四种脱氧核苷酸为原料,以引物为模板,经多次循环合成新的DNA链。步骤:高温变性、低温复性、中温延伸三个温度循环,使目的DNA片段指数级扩增。应用:广泛用于基因克隆、基因突变、物种进化等研究领域。PCR反应体系模板DNAdNTPsTaq DNA聚合酶引物缓冲液PCR扩增步骤l模板DNA的制备l引物的设计与合成l反应体系的组成与配置l循环扩增过程:变性-退火-延伸三个步骤的循环进行l扩增产物的检测与鉴定PCR扩增过程中的注意事项确保模板DNA的浓度和纯度确保PCR反应体系的成分和浓度确保PCR反应体系的无菌性和无污染性确保PCR反应体系的温度和时间PCR扩增结果检测琼脂糖凝胶电泳:检测PCR产物是
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