大黄消痔栓的质量评价研究.docx

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1、题 目： 大黄消痔栓的质量评价研究 目 录1 文献综述11.1 新型直肠给药系统11.1.1中空栓剂21.1.2凝胶栓剂21.1.3缓释栓剂31.2 直肠给药系统的临床新用途31.2.1抗疟疾31.2.2调节血糖41.2.3降血压51.2.4抗肿瘤51.2.5止吐61.2.6抗癫痫61.3 论文选题意义及主要研究内容71.3.1选题意义71.3.2研究内容72 材料与方法72.1 仪器72.2 试药82.3 试验方法82.3.1空白栓的制备82.3.2含药栓的制备82.3.3重量差异检查82.3.4外观、硬度、融变时间检查83 结果与分析83.1 重量差异83.2 外观、硬度、融变时间93.3

2、 大黄消痔栓中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量测定93.5.1溶液的制备93.5.2色谱条件103.5.3系统适用性 103.5.4线性关系的考察 113.5.5精密度试验 113.5.6稳定性试验123.5.7重复性试验 123.5.8加样回收试验 133.5.9样品含量测定134 讨论与结论14参考文献15致 谢17III大黄消痔栓的质量评价研究摘 要：目的 进行大黄消痔栓的质量评价研究。方法 以大黄、槐角、冰片为原料药，混合脂肪酸甘油酯和蜂蜡为基质，热熔法制备栓剂，并对其外观、硬度、融变时限、重量差异进行评价，采用HPLC法测定大黄消痔栓中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、

3、大黄酚、大黄素甲醚的含量。结果 制得的栓剂药物与基质混合均匀，栓剂为棕褐色子弹头形，平均栓重为1.45 g，融变时限在30 min内，含药量为每枚1.05 g。结论 大黄消痔栓符合中国药典栓剂质量检测要求。关键词：大黄消痔栓；总蒽醌；质量评价Study on the Quality Evaluation of Dahuang Xiaozhi SuppositoryAbstract: Objective To conduct a quality evaluation study of dahuang xiaozhi suppository. Methods Using Rheum officin

4、ale Baill.、Sophora japonica L.、Cinnamomum camphora (L.)Presl as raw materials, mixed fatty glycerides and beeswax as the matrix, suppositories were prepared by hot-melt method, and the appearance,hardness,weight variation and melting time were evaluated, Contents of aloe emodin, rhein, emodin, chrys

5、ophanol, emodin methyl ether in the suppository was determined by HPLC. Results The suppository drug and the matrix were mixed uniformly. The suppository was a tan bullet-shaped bullet, with an average suppository weight of 1.45 g, a melting time limit within 30 minutes, and a drug content of 1.05 g

6、 per tablet. Conclusion Dahuang xiaozhi suppository can reach the quality requirements of Chinese Pharmacopoeia.Key words: dahuang xiaozhi suppository; total anthraquinone; quality evaluation1 文献综述1.1 新型直肠给药系统常用直肠给药制剂主要用以解热镇痛、或润肠、导泻、消痔等局部治疗。普通栓剂药物暴露部分易氧化、潮解，在释药过程血药浓度不稳定，存在峰谷现象，影响疗效1。为了改善栓剂的稳定性和生物利用度

7、，新基质和新工艺成为研究热点，出现了一些新型栓剂，归纳起来主要有下列几种。1.1.1中空栓剂中空栓剂（Hollow Type Suppositories）是1984年渡道善照等研制的新型栓剂，中空栓外壳为空白或含药基质，中空部分填充液体药物，药物以溶液形式释放2。Kaneto Uekama等3尝试在Witepsol H-15空心栓剂中使用环糊精作为吸收促进剂，多糖作为溶胀水凝胶来优化吗啡的直肠输送，并且在兔子中进行了测试。实验证明，-和-环糊精提高了生物利用度的速度和程度，前者的效果更加显著，-环糊精降低吗啡的吸收。使用切除的直肠囊进行体外膜渗透研究表明，-环糊精增强了吗啡通过直肠膜的渗透。相

8、反，直肠给药后，诸如黄原胶之类的粘性多糖会延迟血浆吗啡水平，反映出体外缓释特性。对于直肠给药后观察到栓剂在兔直肠和结肠中的分布，发现黄原胶可以阻止药物向上扩散。所以，-环糊精和黄原胶的结合产生了吗啡持续的血浆特征，并增加了直肠的生物利用度（超过4倍）。1.1.2凝胶栓剂凝胶栓剂（Gel Suppositories）是指利用亲水性、生物相容性、粘附性及生物惰性的高分子材料为基质制成的栓剂。W. Reanmongkol4使用泊洛沙姆或羟乙基纤维素作为凝胶基质开发曲马多直肠凝胶制剂。在体外释放研究中，药物从两种直肠凝胶的释放曲线相似。在体内镇痛研究中，使用泊洛沙姆作为凝胶基质的曲马多（0.25、0.

9、5和1.0 mg）直肠凝胶给药在小鼠中产生伤害性反应的潜伏期显著增加。结果表明，以泊洛沙姆或羟乙基纤维素为凝胶基质制备的曲马多直肠凝胶显示出该药物从该基质中完全释放出来，并延长了实验动物的痛觉响应潜伏期。LinHR等5设计了原位凝胶和Pluronic-聚丙烯酸（Pluronic-PAA）液体栓剂，以奥沙利铂为模型药物，测定口服奥沙利铂溶液和直肠给药奥沙利铂栓剂后Sprague-Dawley大鼠的血浆奥沙利铂浓度。直肠给药奥沙利铂栓剂后药物的峰浓度Cm和曲线下面积AUC012h明显高于口服奥沙利铂溶液的。这是因为PAA是一种粘附性聚合物，可以进一步提高奥沙利铂的直肠生物利用度，同时，口服奥沙利铂

10、溶液可能会在给药后经历广泛的胃肠道和肝脏首过清除作用。溃疡性结肠炎（UC）是一种主要影响结肠粘膜的慢性炎症性疾病。美沙拉敏已被确立为治疗轻度至中度UC的一线药物6。在目前的研究中，已经使用pH 温度敏感的I型胶原蛋白制备了一种新型美沙拉敏原位凝胶。流变学研究证实，这种水凝胶在生理pH和温度下会经历溶胶-凝胶转变过程，体外释放曲线表明美沙拉敏能够在规定时间内持续释放。另外，进行了组织病理学研究以评估粘膜损伤和炎症浸润的严重性，与参考组相比，胶原美沙拉敏原位凝胶组的直肠出血和粘膜损伤评分显著降低。除了以受控方式释放美沙拉敏外，通过胶原原位凝胶施用美沙拉敏的策略还促进了受损粘膜的再生，从而产生了治疗

11、溃疡性结肠炎的协同作用。1.1.3缓释栓剂缓释栓剂（Sustained Release Suppositories）是将药物包合于不溶性高分子材料中制成栓剂7。Takatori T等8制备了以对乙酰氨基酚为模型药物，由脂肪栓剂基质Witepsol H15或固体脂肪（如PS500，HB750和蜂蜡）组成的控释栓剂。实验结果证明，因为固体脂肪的添加导致熔融基质中药物扩散性降低，药物释放速率减缓，所有混合基栓剂的平均滞留时间MRT值均长于Witepsol H15栓剂。得出结论，由Witepsol H15HB750或Witepsol H15蜂蜡制成的几种栓剂可以在不降低曲线下面积的情况下成功延长药物的

12、直肠吸收。吲哚美辛是一种非甾体类抗炎药，用于缓解类风湿疾病的疼痛和僵硬，通常是口服给药，会产生胃肠道副作用，因此直肠给药可替代口服途径。Gulcin Uzunkaya等9设计了吲哚美辛微球的缓释栓剂，通过体外溶出试验评估药物的释放，含有吲哚美辛微球的缓释栓剂与传统的缓释栓剂比较结果表明，前者在相同时间内累计释放量小于常规栓剂，故吲哚美辛微球缓释栓剂释放药物的速度比常规栓剂慢。据此，患者可以通过减少给药频率来提供更方便的治疗方法和更低的副作用风险，建议将吲哚美辛微球组成的缓释栓剂作为常规剂型的替代方法。1.2 直肠给药系统的临床新用途作为一种传统的剂型，直肠给药制剂不仅有局部作用，而且是全身作用

13、制剂。局部作用的栓剂一般只在用药局部起作用，例如痔疮药，局麻药，消毒剂等，退热、镇痛及抗炎全身作用栓剂也有较多应用。近年来，随着医药界和患者对栓剂新剂型优点的进一步了解，随着新基质的出现和工艺改进，直肠给药系统的临床新用途得到了大大的拓展。1.2.1抗疟疾-蒿甲醚是一种有效且快速作用的抗疟药，已被列入WHO的用于治疗严重多重耐药性疟疾的基本药物清单。目前，-蒿甲醚可作为片剂用于口服治疗，也可作为肌肉（IM）油性注射剂用于治疗疟疾感染。然而，-蒿甲醚的口服生物利用度较低（40），这归因于其水溶性差和在胃酸中的降解，从而导致其治疗功效显著降低。因此，Gugulothu D等11配制了-蒿甲醚的自微

14、乳化栓剂（SMES）作为替代天然剂型，以克服口服和IM给药途径的缺点。比较了SMES和传统的基于PEG的栓剂的体外药物释放，PEG栓剂释放药物的速度更快。但是，两种栓剂在30分钟结束时的释放情况相当。在伯氏疟原虫感染的小鼠中进行测试，测定了在不同时间点不同群体的存活百分比，可以观察到SMES组的六只小鼠中有两只在感染后存活了50天，较其他组时间长，这再次证实了SMES与常规药物相比可以有效地延长抗疟活性，进一步临床试验正在进行。1.2.2调节血糖胰岛素（INS）不仅控制葡萄糖水平，而且调节蛋白质，糖原和脂肪的代谢和储存。由于这些生理功能，INS通常用于治疗胰岛素依赖型糖尿病，临床上也称为型糖尿

15、病。但是，其蛋白质特性阻止了INS口服，INS容易被蛋白酶水解成氨基酸，为了保持其疗效，必须以缓慢而频繁的剂量皮下注射INS。同时，注射会引起患者的不适和疼痛，从而降低了患者治疗的依从性。更糟糕的是，频繁注射可能会对注射部位产生严重的副作用。此外，昂贵的设备，例如INS注射笔，也增加患者的治疗负担。因此，迫切需要能够有效递送INS而无副作用的新型制剂。使用pH敏感水凝胶将INS递送到肠道环境中，从而避免了INS被胃蛋白酶水解，并且这些制剂可以避免皮下注射引起的疼痛和不适感，从而在一定程度上改善患者的依从性。Jintao Xue等12研究的目的是制造一种新型的二元水凝胶，将载有胰岛素的水凝胶用作

16、直肠栓剂以预防I型糖尿病。选择INS作为模型药物，并封装到二元水凝胶中。INS释放研究是在pH 7.4缓冲液中进行的，通过直肠给药研究了负载INS的水凝胶的降血糖作用。INS释放曲线表明，负载INS的水凝胶可以持续扩散INS，且动物研究证明，INS负载的二元水凝胶具有明显的降血糖作用。因此，可以推测该二元水凝胶在通过直肠给药治疗I型糖尿病方面具有潜在的应用。ShiYongli等13开发一种新型羟丙基甲基纤维素-共聚丙烯酰胺-甲基丙烯酸（HPMC-co-PAM-co-PMAA）水凝胶，以其用作直肠栓剂以调节糖尿病的血糖。为了研究其降血糖作用，将HPMC-co-PAM-co-PMAA水凝胶通过直肠

17、给药（20IU INS / kg）作用于糖尿病大鼠，以腹膜内注射相同剂量的糖尿病大鼠为阳性对照，未加药的正常大鼠为空白对照组。结果证明，负载INS的HPMC-co-PAM-co-PMAA水凝胶和INS注射液显示出明显的降血糖作用，两个小时后，阳性对照的葡萄糖水平降至15.65.0 mmol / L，用负载INS的水凝胶处理的大鼠的葡萄糖水平降至16.93.7 mmol / L，与正常水平相差不远（低于16.7 mmol / L）。但是，通过直肠给药治疗，这种INS的水凝胶更方便和经济。此外，糖尿病可引起严重的并发症，其中许多是致命的。观察用INS负载水凝胶，INS注射液（阳性对照）和生理盐水（

18、阴性对照）治疗的糖尿病大鼠的存活率，结果可得，有两只大鼠在阴性对照组中死亡，但在其他两组中均未发现死亡（即负载INS的水凝胶治疗的大鼠和阳性对照组）。另外，用负载INS的水凝胶治疗的糖尿病大鼠不会在大鼠的皮肤和皮下组织上引起炎症，因为在其切片中未发现炎症细胞，与注射部位观察到现象不同，故栓剂能够改善糖尿病人的依从性。1.2.3降血压硫化氢（H2S）参与了循环系统动态平衡，有助于控制动脉血压（BP）和止血，已发现H2S供体通过外周和中心机制降低血压的例子，H2S还具有抗血小板和抗凝活性。可用的H2S供体可根据其H2S释放速率分为快速释放剂和缓慢释放剂。TomasovaL等13在两个方案中进行评估

19、：1）静脉内注入媒介物或Na2S；2）施用媒介物栓剂或Na2S栓剂。通过研究雄性麻醉的WistarKyoto大鼠（WKY）和自发性高血压大鼠（SHR），结果可得静脉内施用媒介物和媒介物栓剂不会影响平均动脉血压（MABP）和心率（HR），静脉内施用Na2S会引起MABP短暂（2-5 分钟）下降，而Na2S栓剂则会产生剂量依赖性的降压反应，在WKY中持续45 分钟，在SHR中持续75-80 分钟。Na2S栓剂在校正的QT（心脏毒性的指标）上未产生显著变化，故没有明显的心脏毒性作用。如果没有参考缓释H2S供体，快速释放H2S供体的栓剂制剂可用于研究。1.2.4抗肿瘤由人乳头瘤病毒引起的宫颈发育异常会

20、不可预测地发展为宫颈癌，维生素A类似物SHetA2已证明对其有治疗作用，但其口服生物利用度小于1。SanjidaMahjabeen等14优化的阴道栓剂配方可以以足够的剂量递送SHetA2，以预防宫颈发育异常，通过优化得到由可可脂为基质，5Kolliphor和40SHetA2组成的栓剂配方。将栓剂给予小鼠，子宫颈达到的浓度明显高于口服治疗浓度，峰浓度（Cm= 336.78g/g）大于口服治疗浓度的100倍。验证研究表明，SHetA2优化的阴道栓剂可能在预防宫颈发育异常中具有潜在用途，但需要进行详细的功效研究以证实这一假设。同样，Ci Ren等10提出基因治疗也是一种有前途的宫颈癌治疗方法，临床应

21、用的关键取决于有效的基因递送方法。研究人员首次开发了一种新型的基于聚乙烯亚胺（PEI）的阴道栓剂，截面免疫荧光结果证实了体内和体外的递送功效，绿色荧光蛋白（GFP）转基因小鼠的局部上皮中的猝灭荧光和基因表达降低证明了该栓剂的有效靶向潜力。据调查所知，这也是第一个系统地，全面地研究体内毒性的实验，此研究为基于PEI的栓剂在宫颈癌防治中的翻译应用提供了新思路。为了开发一种能够增强抗肿瘤活性和减轻肝毒性的栓剂，Chul Soon Yongd等15研究了基于泊洛沙姆的克霉唑栓剂的溶解和抗肿瘤活性。特别地，具有32熔点的泊洛沙姆混合物 P188 /丙二醇（70/30）在室温下为固体形式，并且在生理温度下

22、立即熔化。P188 /丙二醇的比例极大地影响了克霉唑从泊洛沙姆类栓剂中的溶出速率，与口服给药相比，P188和丙二醇的克霉唑栓剂不会刺激或损伤鼠的直肠组织，能够降低药物的肝毒性，并且对鼠的抗肿瘤活性与剂量成正相关。因此，具有基于泊洛沙姆 P188 /丙二醇的克霉唑固体栓剂是用于减轻的肿瘤副作用的有效直肠剂型。1.2.5止吐呕吐是小儿疾病的常见症状。直肠途径可以被认为是止吐药的替代途径，因为呕吐的口服治疗存在困难，并且由于疼痛和急诊入院而导致肠胃外途径不合需要。Amal M等16尝试通过在原位胶凝系统中配制甲氧氯普胺盐酸盐（MET HCL）来寻找替代和有效途径，负载MET HCL的液体栓剂是由Po

23、loxamer 407（P407）与以下粘膜粘附聚合物之一制备的。与口服普通药物相比，以液体栓剂形式给药MET HCL时，曲线下面积AUC024和达峰时间Tmax显著升高（p 0.05），分别由曲线下面积AUC0（17.9）和（18.8）g/(hL)表示，但是原位凝胶液体栓剂的峰浓度Cm（4.5）g/ml显著高于口服混悬液Cm（4）g/ml（p0.05）。这些结果表明，原位胶凝液栓剂可能是卡马西平的一种有效且方便的递送系统。因此，在无法口服的情况下，尤其是在儿童中，可以在癫痫发作时安全地进行给药。1.3 论文选题意义及主要研究内容1.3.1选题意义直肠给药制剂是一类专门纳入肛门在直肠释药的制剂

24、。虽然口服是最适宜的全身给药途径，但很多药物口服给药后会在胃肠道中不稳定、对胃肠道造成刺激、发生肝脏首过效应。直肠给药则能够规避上述问题，特别是可以避免肝脏首过效应，提高生物利用度19。1.3.2研究内容大黄消痔栓由大黄、槐角和冰片组成，它具有清热消肿、止血化瘀、补气止痛，促进血液循环的作用。组方中各药材合用，可以消除湿热，使血液顺畅并消除肿胀20。为有效控制该制剂质量，确保临床疗效，本实验进行大黄消痔栓的质量评价研究，采用高效液相色谱(HPLC)法测定大黄消痔栓中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量，为本品质量标准的拟定提供依据。2 材料与方法2.1 仪器Ultimate 3

25、000 DGLC 高效液相色谱仪（美国Thermo Fisher Scientific 公司）；BP210S 电子天平（德国Sartorius 公司）；RBY-4自动融变时限检查仪（昆山广测仪器设备有限公司）。2.2 试药大黄消痔栓（甘肃中医药大学附属医院提供）；三氯甲烷（批号20120916）利安隆博华医药化学有限公司、芦荟大黄素（批号110786201042）、大黄酸（批号110765201076）、大黄素（批号110794201087）、大黄酚（批号110789201107）、大黄素甲醚（批号110773201055）均购于中国食品药品检定研究院，纯度98%；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分

26、析纯，水为超纯水。2.3 试验方法2.3.1空白栓的制备 以质量比8:1称取混合脂肪酸甘油酯、蜂蜡，水浴加热，保持温度85 至完全融化，常温冷却至75 ，边搅拌边灌模。常温冷却5 min，用刀削去溢出部分，脱模。2.3.2含药栓的制备 以质量比8:1称取混合脂肪酸甘油酯、蜂蜡，水浴加热，保持温度85 至完全融化，按处方量加入药粉，混合均匀，冷却至75 ，边搅拌边灌模。常温冷却5 min，用刀削去溢出部分，脱模。2.3.3重量差异检查21取10粒大黄消痔栓，精密称定总质量，求得平均粒重后，再精密称定每粒质量，并与平均粒重相比较。2.3.4外观、硬度、融变时间检查22取3粒大黄消痔栓，观察外观，手

27、触硬度，在室温放置1小时后，分别放在3个金属架的下层圆板上，装入各自的套筒内，并用挂钩固定。除另有规定外，将上述装置分别垂直浸入盛有不少于4 L的37.5水的容器中,其上端位置应在水面下90 m处。每隔10分钟在溶液中翻转该装置一次。2.3.5溶液的制备混合对照品溶液 称取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚标准品适量，加甲醇超声溶解并定容至刻度，即得（芦荟大黄素144.0 g/ml、大黄酸87.04 g/ml、大黄素121.60 g/ml、大黄酚121.60 g/ml、大黄素甲醚44.80 g/ml）。供试品溶液 取大黄消痔栓5枚，剪碎，精密称取约3 g，置于锥形瓶中，加入甲醇50

28、 mL，称定重量，加热回流1 h，冷却至常温，用甲醇补足损失重量。-20冷却1 h，滤过，取续滤液10 mL，于烧瓶中挥去溶剂，加入8%盐酸20 mL，超声处理2 min，加入三氯甲烷20 mL加热回流1 h，放冷，置于分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中。分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷萃取3次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，挥去溶剂，残渣加甲醇使溶解，转移至10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度。阴性对照品溶液 取除大黄外的其他处方量药粉，按大黄消痔栓制备工艺制成阴性空白栓，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。2.3.6色谱条件色谱柱：Symmetry C18（4.6 m

29、m150 mm，5 m）；流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液（85:15）；检测波长254 nm；柱温30 ；进样量为10 L；流速为1 mL/min，理论塔板数按大黄素峰计算不低于3000。2.3.7系统适用性 取混合对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各适量，在“2.3.6”项色谱条件下分别进样10 L，记录色谱图。2.3.8线性关系的考察 分别精密量取“2.3.5”项下对照品溶液适量，甲醇依次稀释，得含芦荟大黄素（9.00、18.00、36.00、72.00、144.00 g mL-1）、大黄酸（5.44、10.88、21.76、43.52、87.04 g mL-1）、大黄素（7.60、

30、15.20、30.40、60.80、121.60 g mL-1）、大黄酚（7.60、15.20、30.40、60.80、121.60 g mL-1）、大黄素甲醚（2.80、5.60、11.20、22.40、44.80 g mL-1），将上述稀释后的五种溶液分别等体积混合，按“2.3.6”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。2.3.9精密度试验 精密量取“2.3.5”项下混合对照品溶液1 mL，按“2.3.6”项下色谱条件进行测定，连续进样6次，记录峰面积。2.4.0稳定性试验 取供试品溶液，按“2.3.6”项下色谱条件，在0、2、4、6、8、10、12 h各测定1次，记录峰面积。2.4.1重复性

31、试验 精密称取同一批（190301）样品3g，按“2.3.5”项下供试品溶液制备方法平行制备供试品溶液5份，按“2.3.6”项下色谱条件进行测定。2.4.2加样回收试验 选取样品中含量最高的大黄酚、含量最低的大黄素甲醚两种成分做加样回收试验，精密称取已知含量的样品（190301）约3 g共9份，随机分为低、中、高组，分别精密加入样品中大黄酚、大黄素甲醚含量的80%、100%、120%标准品溶液，按“2.3.5”项下供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按“2.3.6”项下色谱条件进行测定，分别记录大黄酚、大黄素甲醚峰面积，带入标准曲线方程计算回收率及RSD。2.4.3样品含量测定 取2批样品各适量

32、，按“2.3.5”项下方法制备供试品溶液，按“2.3.6”项下色谱条件进行测定。3 结果与分析3.1 重量差异测得平均粒重为1.45g，重量差异为1.66%，消痔栓均在重量差异限度范围（7.5）内，各项数据见表1，符合中国药典规定。 表1 重量差异结果Table 1 Weight variation results编号12345678910平均值质量，g1.491.481.471.421.461.471.481.471.441.481.47重量差异限度2.76%2.07%1.38%-2.07%0.69%1.38%2.07%1.38%-0.69%2.07%1.66%3.2 外观、硬度、融变时间大

33、黄消痔栓均呈均匀棕褐色，无裂缝、无顶端凹陷，硬度适宜，平均融变时间为19 min(n=3)。各项数据见表2，符合中国药典规定。表2 融变时间结果Table 2 Melting time results编号123平均值融变时间，min19.1720193.3 大黄消痔栓中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量测定3.3.1系统适用性 观察色谱图，混合对照品、供试品及阴性对照品中各组分分离度良好，理论塔板数按大黄素峰计算不低于3000。色谱图见图1。A.混合对照品溶液；B.供试品溶液；C.阴性对照品溶液1.芦荟大黄素；2.大黄酸；3.大黄素；4.大黄酚；5.大黄素甲醚A.Mixed

34、control; B.Test sample; C.Negative control1. Aloe emodin; 2. Rhein; 3. Emodin; 4. Chrysophanol; 5. Emodin methyl ether图1 高效液相色谱图Fig. 1 HPLC chromatograms3.3.2线性关系的考察 以对照品溶液浓度（，g mL-1）为横坐标，峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程与线性范围，见表3。表3 回归方程与线性范围Table 3 Regression equation and linear range 成分回归方程线性范围g/mlr芦荟大黄素y=0

35、.5582+0.90429.0000144.000.9997大黄酸y=0.4595+0.43725.440087.0400.9992大黄素y=0.4855+0.61107.6000121.600.9999大黄酚y=0.5697+0.66037.6000121.600.9998大黄素甲醚y=1.1052+0.34782.800044.8000.99983.3.3精密度试验 由表4可得，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚峰面积的RSD分别为1.23%、1.62%、0.85%、0.97%、1.42%，表明仪器精密度良好。表4 精密度试验结果Table 4 Precision test r

36、esults编号芦荟大黄素峰面积（mAU*min）大黄酸（mAU*min）大黄素（mAU*min）大黄酚（mAU*min）大黄素甲醚（mAU*min）110.7015.2487.8589.1656.442210.9895.4417.9899.2836.564310.6855.2407.8399.1356.410410.6715.2387.8119.1106.394510.7115.3367.8939.2716.599610.6135.2207.8159.0616.389RSD,%1.23%1.62%0.85%0.97%1.42%3.3.4稳定性试验 由表5可得，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄

37、酚、大黄素甲醚峰面积的RSD分别为1.25%、0.95%、0.84%、1.53%、0.78%。表明供试品溶液稳定性良好。表5 稳定性试验结果Table 5 Stability test results放置时间（h）芦荟大黄素峰面积（mAU*min）大黄酸（mAU*min）大黄素（mAU*min）大黄酚（mAU*min）大黄素甲醚（mAU*min）08.683 10.402 10.636 25.920 4.740 28.551 10.389 10.525 25.376 4.701 48.725 10.549 10.681 25.989 4.774 68.504 10.314 10.513 25.

38、252 4.711 88.513 10.371 10.531 25.313 4.701 108.511 10.301 10.502 25.460 4.720 128.741 10.538 10.715 26.249 4.794 RSD,%1.25%0.95%0.84%1.53%0.78%3.3.5重复性试验 由表6可得，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的平均含量为0.233、0.363、0.347、0.741、0.067 mg/g ，RSD分别为1.47%、0.85%、1.43%、0.97%、1.34%。表明供试品溶液的制备方法可重复性良好。表6 重复性试验结果Table 6 R

39、epeatability test results编号芦荟大黄素含量,mg/g大黄酸含量,mg/g大黄素含量,mg/g大黄酚含量,mg/g大黄素甲醚含量,mg/g10.232 0.361 0.344 0.739 0.066 20.233 0.363 0.346 0.741 0.067 30.238 0.365 0.349 0.749 0.068 40.229 0.358 0.341 0.730 0.066 50.235 0.366 0.354 0.745 0.066 平均值0.233 0.363 0.347 0.741 0.067 RSD,%1.47%0.85%1.43%0.97%1.34%3

40、.3.6加样回收试验 由表7可得回收率及RSD值，表明该方法准确性良好。表7 加样回收率试验结果（n=3）Table 7 Sampling recovery test results (n =3) 待测成分取样量，g样品含量，mg加入量，mg测得量，mg加样回收率，%平均回收率，%RSD，%大黄酚2.99672.21731.77383.979499.7199.521.60大黄酚3.00452.22031.77623.982799.65大黄酚3.00712.22221.77784.0854102.14大黄酚3.00252.21882.21884.371598.51大黄酚2.99562.21372

41、.21374.382098.97大黄酚2.99802.21552.21554.368098.58大黄酚3.00782.22272.66674.768297.52大黄酚3.00362.21962.66354.9847102.08大黄酚3.00632.22172.66604.817598.56大黄素甲醚2.99670.01980.01580.035198.6099.851.89大黄素甲醚3.00450.01980.01580.034897.75大黄素甲醚3.00710.01980.01580.0363101.97大黄素甲醚3.00250.01980.01980.0407102.78大黄素甲醚2.9

42、9560.01980.01980.038697.47大黄素甲醚2.99800.01980.01980.0399100.78大黄素甲醚3.00780.01980.023760.043299.17大黄素甲醚3.00360.01980.023760.0441101.24大黄素甲醚3.00630.01980.023760.043198.943.3.7样品含量测定 芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的平均含量分别为0.2317 mg/g、0.3613 mg/g、0.3442 mg/g、0.7390 mg/g、0.0066 mg/g。结果见表8。表4 样品测定结果（n=3）Table 4 Sample determination results (n = 3)样品批号芦荟大黄素大黄酸大黄素大黄酚大黄素甲醚百分含量RSD/%含量mg/gRSD/%含量mg/gRSD/%含量mg/gRSD/%含量mg/gRSD/%1905160.24121.10.35121.50.34121.30.75120.90.07101.51905200.22220.80.37091.40.34721.20.72681.30.06101.14 讨论与结论栓剂的基质不仅有赋形作用，而且影响药