生物第一单元 有机体中的细胞 第一章 细胞概述 第3节 测定微生物的数量 中图版必修1.ppt

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1、第第3节节测测定微生物的数量定微生物的数量学习导航学习导航1.概述微生物概述微生物计计数的基本方法。数的基本方法。2.运用稀运用稀释释平板法平板法测测定定样样品中微生物的数量。品中微生物的数量。重、重、难难点点新知初探思维启动新知初探思维启动一、直接一、直接计计数法数法1.常用方法：常用方法：显显微微镜镜直接直接计计数法。数法。2.具体步具体步骤骤：将待将待测样测样品制成品制成悬悬液液取一定取一定量的量的悬悬液放在液放在显显微微镜镜下下进进行行计计数数观观察并察并计计算出算出单单位体位体积积内的微生物内的微生物总总数。数。3.优优点点4.缺点：缺点：难难以以计计数数_的的细细菌。菌。5.适用范

2、适用范围围：一般适用于一般适用于纯纯培养培养悬悬浮液中各种浮液中各种_的的计计数。数。二、二、间间接接计计数法数法1.常用方法：常用方法：_。所需所需设备设备_，可迅速得到，可迅速得到结结果果能能观观察到微生物的察到微生物的_简单简单形形态态特征特征微小微小单细单细胞菌体胞菌体稀稀释释平板平板计计数法数法2.具具体体步步骤骤：需需要要将将待待测测样样品品配配制制成成均均匀匀的的_并并使使其其均均匀匀分分布布于于平平板板中中的的培培养养基基内内，经经过过培培养养后后，统统计计培培养养基基中中出出现现的的_,即即可可推推算算出出检检测测样样品品中中的的活活菌数。菌数。3.优优点：点：在在样样品中含

3、菌数品中含菌数_的情形下的情形下也可以完成也可以完成计计数。数。系列稀系列稀释释液液菌落数菌落数较较少少判一判判一判(1)在在用用直直接接计计数数法法测测量量培培养养瓶瓶中中酵酵母母菌菌时时，应应在在培培养养液液静静置置一一段段时时间间后后，从从瓶瓶底底部部吸吸取取液体液体样样本。本。()(2)用用稀稀释释平平板板计计数数法法，通通过过观观察察菌菌落落，得得出的数出的数值值往往比往往比实验值实验值要大。要大。()(3)在在计计数数时时，用于培养的器皿要，用于培养的器皿要进进行行灭灭菌。菌。()三、三、间间接接计计数法数法实实例例1.土壤中好气性土壤中好气性细细菌的菌的计计数数(1)制制备备土壤

4、稀土壤稀释释液液取土壤表取土壤表层层_处处的土的土样样。准。准确称取确称取1 g土土样样，放入盛有，放入盛有_ mL无菌水的无菌水的锥锥形瓶中，振形瓶中，振荡荡20 min后制成后制成102倍的稀倍的稀释释液。然后液。然后进进行系列稀行系列稀释释，得到，得到103、104、105、106的系列稀的系列稀释释菌液。菌液。5 cm10 cm99(2)取取样样及倒平板：每个号及倒平板：每个号码设码设置置_个重复。个重复。(3)培养。培养。(4)观观察察记录记录计计数数时对时对于于细细菌、放菌、放线线菌、酵母菌以每个菌、酵母菌以每个培养皿内有培养皿内有_个菌落个菌落为为宜。霉菌宜。霉菌以每个培养皿内有

5、以每个培养皿内有_个菌落个菌落为为宜。宜。330300101002.检测检测天然水源中天然水源中细细菌菌总总数和大数和大肠肠菌群数菌群数(1)细细菌菌总总数数通通常常是是指指1 g或或1 mL检检测测样样品品中中所所含含_的的总总数数,单单位位用用cfu/g(mL)表示。表示。细细菌菌落菌菌落(2)大大肠肠菌群数通常是指每菌群数通常是指每100 g或或100 mL检检测样测样品中所含大品中所含大肠肠菌群的菌群的实验实验数数值值，以，以(MPN)表示。大表示。大肠肠菌群是指在菌群是指在_条件下，条件下，24 h内能内能发发酵酵_，产产酸酸产产气的一气的一类类_氧或氧或_氧型革氧型革兰兰氏阴性无芽

6、氏阴性无芽孢孢杆菌的杆菌的总总称。称。大大肠肠菌群数的菌群数的检测检测，常用，常用_法，法，使用乳糖胆使用乳糖胆盐盐蛋白蛋白胨胨培养基、培养基、_琼琼脂培养基脂培养基(EMB培养基培养基)和乳糖和乳糖发发酵管。酵管。37 乳糖乳糖需需兼性兼性厌厌多管多管发发酵酵伊伊红红美美蓝蓝3.土壤中分解尿素土壤中分解尿素细细菌的菌的计计数数有些有些细细菌含有菌含有_酶酶，能将尿素，能将尿素琼琼脂培养基中的尿素分解生成氨，氨溶于水脂培养基中的尿素分解生成氨，氨溶于水变变成成氢氢氧化氧化铵铵，导导致培养基致培养基变变成成_性，使性，使酚酚红红指示指示剂剂呈呈现现_色。色。尿素分解尿素分解碱碱红红想一想想一想土

7、土壤壤有有“微微生生物物的的天天然然培培养养基基”之之称称，为为什什么？么？【提示提示】由于土壤具由于土壤具备备了各种微生物生了各种微生物生长长所需的所需的营营养、水分、空气、酸碱度、渗透养、水分、空气、酸碱度、渗透压压和温度等条件，是微生物生活的良好和温度等条件，是微生物生活的良好环环境。境。对对微生物来微生物来说说，是微生物的，是微生物的“大本大本营营”；对对人人类类来来说说，是最丰富的，是最丰富的“菌种菌种资资源源库库”。要点突破讲练互动要点突破讲练互动要点一直接要点一直接计计数法和数法和间间接接计计数法的比数法的比较较1.显显微微镜镜直接直接计计数法数法(1)原原理理：利利用用特特定定

8、细细菌菌计计数数板板或或血血细细胞胞计计数数板板，在在显显微微镜镜下下计计算算一一定定容容积积的的样样品品中中微微生物的数量。生物的数量。(2)方法：用方法：用计计数板数板计计数。数。计计数板是特制的数板是特制的载载玻片，其上有特定的面玻片，其上有特定的面积为积为1 mm2，高，高为为0.1 mm的的计计数室，一个数室，一个计计数室又被分成数室又被分成25个个(或或16个个)中格，每个中格再被划分成中格，每个中格再被划分成16个个(或或25个个)小格，每个小格，每个计计数室都由数室都由400个小格个小格组组成。成。(3)操操作作：将将稀稀释释的的样样品品滴滴在在计计数数板板上上，盖盖上上盖盖玻

9、玻片片，然然后后在在显显微微镜镜下下计计数数45个个中中格格中中的的细细菌菌数数，并并求求出出每每个个小小格格所所含含细细菌菌的的平平均均数数，再再按按计计算算公公式式求求出出每每毫毫升升样样品品中中所所含含的的细细菌数。菌数。(4)计计算公式算公式每每毫毫升升原原液液所所含含细细菌菌数数每每小小格格平平均均细细菌菌数数40010000稀稀释释倍数倍数(5)缺点：不能区分死菌与活菌。缺点：不能区分死菌与活菌。2.间间接接计计数法数法(活菌活菌计计数法数法)(1)原理：当原理：当样样品的稀品的稀释释度足度足够够高高时时，培养，培养基表面生基表面生长长的一个菌落，来源于的一个菌落，来源于样样品稀品

10、稀释释液液中的一个活菌，通中的一个活菌，通过统计过统计平板上的菌落数，平板上的菌落数，就能推就能推测测出出样样品中大品中大约约含有多少活菌。含有多少活菌。(2)操作操作设设置重复置重复组组,增增强强实验实验的的说说服力与准确性。服力与准确性。将待将待测样测样品品经经一系列一系列10倍稀倍稀释释，然后，然后选择选择三三个稀个稀释释度的菌液，分度的菌液，分别别取取0.1 mL接种到已制接种到已制备备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面，放在适宜的温度下培养布在整个平板表面，放在适宜的温度下培养计计数菌落数。数菌落数。为为使使结结果接近真果接近真实

11、值实值，可将同，可将同一稀一稀释释度菌液加到三个或三个以上的平板上度菌液加到三个或三个以上的平板上,经经涂布、培养，涂布、培养，计计算出菌落平均数。算出菌落平均数。为为了了保保证证结结果果准准确确，要要选选择择一一个个合合适适的的稀稀释释倍倍数数，且且同同一一稀稀释释倍倍数数的的各各个个重重复复组组菌菌落落数数要要相相近近，若若设设置置的的重重复复组组中中结结果果相相差差太太远远,意味着操作有意味着操作有误误，需重新，需重新实验实验。(3)优优点：能点：能观观察菌落特征。察菌落特征。在探究培养液中酵母菌种群数量在探究培养液中酵母菌种群数量变变化的化的实验实验中，需利用中，需利用计计数板数板对对

12、微生物微生物细细胞胞进进行直接行直接计计数。数。计计数板是一个特制的可在数板是一个特制的可在显显微微镜镜下下观观察的察的载载玻片，玻片，样样品就滴在品就滴在计计数室内。数室内。计计数室由数室由2516400个小室个小室组组成，容成，容纳纳液液体体总总体体积为积为0.1 mm3。某同学操作。某同学操作时时将将1 mL酵母菌酵母菌样样品加品加99 mL无菌水稀无菌水稀释释，用无菌吸，用无菌吸管吸取少管吸取少许许使其自行渗入使其自行渗入计计数室，盖上盖玻数室，盖上盖玻片并用片并用滤纸滤纸吸去多余菌液，吸去多余菌液，进进行行观观察察计计数。数。例例1(1)在在实实验验中中，某某同同学学的的部部分分实实

13、验验操操作作过过程程是是这这样样的的：从从静静置置试试管管中中吸吸取取酵酵母母菌菌培培养养液液加加入入计计数数板板进进行行计计数数，并并记记录录数数据据；把把酵酵母母菌菌培培养养液液放放置置在在冰冰箱箱中中；第第七七天天再再取取样样计计数数，记录记录数据，数据，统计统计分析分析绘绘成曲成曲线线。请纠请纠正正该该同学同学实验实验操作中的操作中的3处错误处错误：_；_；_。(2)在在实验实验前前应该对计应该对计数板、吸管等器具数板、吸管等器具进进行行_处处理。理。(3)如如果果一一个个小小方方格格内内酵酵母母菌菌过过多多，难难以以数数清清,应应采采取取的的措措施施是是_。(4)如果如果观观察到如察

14、到如图图所示所示a、b、c、d、e 5个个大格共大格共80个小室内共有酵母菌个小室内共有酵母菌48个，个，则则上述上述1 mL酵母菌酵母菌样样品中品中约约有酵母菌有酵母菌_个；个；要要获获得得较为较为准确的数准确的数值值，减少，减少误误差，你差，你认为该认为该怎么做？怎么做？_。【解析解析】(1)在从在从试试管中吸取酵母菌之前管中吸取酵母菌之前,应应将将试试管管轻轻轻轻振振荡荡几次，目的是使酵母菌在几次，目的是使酵母菌在培养液中均匀分布。酵母菌的培养液培养液中均匀分布。酵母菌的培养液应应置于置于适宜温度下培养，并且每隔适宜温度下培养，并且每隔24小小时时就要就要统计统计一次菌落数目。一次菌落数

15、目。(2)为为了避免了避免杂杂菌菌污污染，染，实实验验中所用吸管、中所用吸管、计计数板等器具需数板等器具需进进行行灭灭菌菌处处理。理。(3)、(4)解答解答时时要注意以下两点要注意以下两点:统统一一单单位位;注意体注意体积积的的变变化。化。400个小室共容个小室共容纳纳液体液体总总体体积为积为0.1 mm3，则则80个小室容个小室容纳纳体体积为积为：2102mm3，含，含酵母菌酵母菌48个，又因酵母菌培养液个，又因酵母菌培养液总总体体积为积为100 mL,统统一一单单位后即可求出酵母菌个数。位后即可求出酵母菌个数。【答答案案】(1)应应将将试试管管轻轻轻轻振振荡荡几几次次再再吸吸取酵母菌培养液

16、取酵母菌培养液进进行行计计数数应应将酵母菌培养液放置在适宜温度下培养将酵母菌培养液放置在适宜温度下培养应应连连续续七七天天，每每天天观观察察、取取样样计计数数并并记记录录数据数据(2)灭灭菌菌(3)适当稀适当稀释释(4)2.4108多次多次计计数，求平均数，求平均值值变变式式训练训练用用稀稀释释平平板板法法测测定定同同一一土土壤壤样样品品中中的的细细菌菌数数,在在对对应应稀稀释释倍倍数数为为106的的培培养养基基中中，得得到到以以下下几种几种统计结统计结果，正确的是果，正确的是()A涂布了涂布了1个平板，个平板，统计统计的菌落数是的菌落数是230B涂涂布布了了2个个平平板板，统统计计的的菌菌落

17、落数数是是215和和260，取平均，取平均值值238C涂涂布布了了3个个平平板板，统统计计的的菌菌落落数数分分别别是是21、212和和256，取平均，取平均值值163D涂布了涂布了3个平板，个平板，统计统计的菌落数分的菌落数分别别是是210、240和和250，取平均，取平均值值233解析：解析：选选D。在。在设计实验时设计实验时，一定要涂布至，一定要涂布至少少3个平板，作个平板，作为为重复重复组组，才能增，才能增强强实验实验的的说说服力与准确性，所以服力与准确性，所以A、B两两项项不正确。不正确。C项虽项虽涂布了涂布了3个平板，但是，其中个平板，但是，其中1个平板的个平板的计计数数结结果与另两

18、个相差太果与另两个相差太远远，说说明在操作明在操作过过程中可能出程中可能出现现了了错误错误，因此，不能，因此，不能简单简单地用地用3个平板的个平板的计计数数值值求平均求平均值值。要要点点二二间间接接计计数数法法在在统统计计微微生生物物数数目目时时的的注意事注意事项项1.设设置置对对照照(1)目目的的：排排除除实实验验中中非非测测试试因因素素对对实实验验结结果的影响，提高果的影响，提高实验结实验结果的可信度。果的可信度。(2)方法：取一个未接种的培养基与接种好方法：取一个未接种的培养基与接种好的培养基一起培养。的培养基一起培养。2.注意无菌操作注意无菌操作(1)建建立立无无菌菌观观念念，严严格格

19、控控制制实实验验器器材材、实实验验室、室、实验实验操作者的消毒、操作者的消毒、灭灭菌。菌。(2)整个整个实验过实验过程必程必须须保保证证无菌操作。无菌操作。(3)取取样样、稀稀释释都都要要在在酒酒精精灯灯火火焰焰附附近近的的无无菌菌环环境中境中进进行。行。(4)规规范操作，防止其他微生物范操作，防止其他微生物污污染，染，实验实验结结束后洗手、消毒。束后洗手、消毒。3.准确准确计计数数(1)在在计计算算结结果果时时，不不同同的的微微生生物物要要选选择择的的稀稀释释倍倍数数不不同同。细细菌菌、放放线线菌菌、酵酵母母菌菌一一般般以以每每个个培培养养皿皿中中有有30300个个菌菌落落为为宜宜，而而霉菌

20、霉菌则则以有以有10100个个为为宜。宜。(2)要要设设置置3个个或或3个个以以上上的的重重复复组组，然然后后求求其平均其平均值进值进行行计计算。算。(3)每隔每隔24 h统计统计一次，最后一次，最后选选取数目取数目稳稳定定时时的的记录记录作作为结为结果。果。特特别别提提醒醒间间接接计计数数法法主主要要是是用用来来推推测测样样品中大品中大约约含有的活菌数。含有的活菌数。统计统计的菌落数往往比的菌落数往往比实际实际的数目低，因的数目低，因为为当两个或两个以上微生物在一起当两个或两个以上微生物在一起时时，平板上，平板上观观察到的只是一个菌落。察到的只是一个菌落。在在做做分分离离分分解解尿尿素素的的

21、细细菌菌实实验验时时，A同同学学从从对对应应的的培培养养基基上上筛筛选选出出大大约约150个个菌菌落落，而而其其他他同同学学只只选选择择出出大大约约50个个菌菌落落。A同同学学的的结结果果产产生原因可能有生原因可能有()由由于于土土样样不不同同由由于于培培养养基基污污染染由由于于操作失操作失误误没有没有设设置置对对照照ABC D例例2【解解析析】实实验验结结论论是是否否正正确确与与是是否否设设置置对对照照有有直直接接关关系系，但但实实验验结结果果与与是是否否设设计计对对照照无关。无关。【答案答案】A变变式式训练训练下下列列调调查查活活动动或或实实验验中中，计计算算所所得得数数值值与与实实际际数数值值相比，可能偏小的是相比，可能偏小的是()标标志志重重捕捕法法调调查查灰灰喜喜鹊鹊种种群群密密度度时时标标志志物物脱脱落落用用血血球球计计数数板板计计数数酵酵母母菌菌数数量量时时只只统统计计方方格格内菌体内菌体样样方方法法调调查查蒲蒲公公英英种种群群密密度度时时在在分分布布较较密密的地区取的地区取样样调查调查某某遗传遗传病的病的发发病率病率时时以患者家系以患者家系为调为调查对查对象象A BC D