生物 五 DNA和蛋白质技术 新人教版选修1.ppt

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1、专题专题5 DNA5 DNA和蛋白质技术和蛋白质技术考纲要求：考纲要求：1 1、蛋白质的提取和分离、蛋白质的提取和分离2 2、PCRPCR技术的基本操作和应用技术的基本操作和应用课题课题1 DNA1 DNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定（一）提取（一）提取DNADNA的方法的方法DNADNA提取的原理提取的原理一、基础知识一、基础知识DNADNA在在NaCLNaCL溶液中的溶解度曲线溶液中的溶解度曲线（1 1）DNADNA在不同浓度在不同浓度NaCLNaCL中的中的溶溶 解度解度不同，不同，0.140.14mol/Lmol/L最小，最小，2 2mol/Lmol/L的的NaClNaCl溶解溶解DN

2、ADNA。加水。加水 稀释降至稀释降至0.140.14molmolL L时析出。时析出。DNA DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性某些某些蛋白质蛋白质溶于酒精，溶于酒精，DNADNA析出析出蛋白酶：蛋白酶：高高 温：温：洗涤剂：洗涤剂：DNA DNA不溶于不溶于酒精酒精溶液溶液水解水解蛋白质蛋白质多数蛋白质不能忍受多数蛋白质不能忍受60608080，DNADNA在在8080以上才会变性以上才会变性瓦解瓦解细胞膜细胞膜，对，对DNADNA无影响。无影响。（二）（二）DNADNA鉴定的原理鉴定的原理沸水浴沸水浴条件下，条件下，DNADNA遇遇二苯胺二苯胺被染成被染成蓝蓝色色

3、二、实验设计二、实验设计（一）实验材料的选取（一）实验材料的选取（二）破碎细胞，获取含（二）破碎细胞，获取含DNADNA的滤液的滤液选取选取DNADNA含量较高含量较高的生物材料的生物材料注意安全，环境保护，不用珍稀濒危生物注意安全，环境保护，不用珍稀濒危生物动物细胞动物细胞蒸馏水蒸馏水植物细胞植物细胞洗涤剂洗涤剂食盐食盐所用溶液所用溶液目的目的细胞吸水胀破细胞吸水胀破溶解细胞膜溶解细胞膜溶解溶解DNADNA（都要搅拌）（都要搅拌）提取的提取的DNADNA少少，看不到，看不到丝状物丝状物，鉴定，鉴定无无蓝色蓝色植物材料研磨不充分，结果会怎样？植物材料研磨不充分，结果会怎样？滤液中可能含有哪些成

4、分？滤液中可能含有哪些成分？核蛋白、多糖核蛋白、多糖和和RNARNA等杂质等杂质（三）除去滤液中的杂质（三）除去滤液中的杂质、方案一为什么反复地溶解与析出、方案一为什么反复地溶解与析出DNADNA，能够去除，能够去除 杂质？杂质？高盐溶液高盐溶液溶解溶解DNADNA除除高盐不溶高盐不溶的杂质的杂质除除溶于低盐溶于低盐的杂质的杂质低盐溶液低盐溶液析出析出DNADNA、方案二与方案三的原理有什么不同？、方案二与方案三的原理有什么不同？方案三：用方案三：用DNADNA和蛋白质对和蛋白质对高温高温耐受性不同，耐受性不同，蛋白质变性，与蛋白质变性，与DNADNA分离。分离。（四）（四）DNADNA的析出

5、与鉴定的析出与鉴定析出析出加与滤液加与滤液等体积的冷等体积的冷酒精酒精(体积分数体积分数9595)，静置，静置2 23min3min，出现，出现白色丝状物白色丝状物。用。用玻璃棒玻璃棒沿一个方向沿一个方向搅拌，卷搅拌，卷起丝状物，用滤纸吸干水分。起丝状物，用滤纸吸干水分。将处理后的溶液过滤将处理后的溶液过滤方案二：方案二：蛋白酶蛋白酶分解杂质蛋白分解杂质蛋白鉴定鉴定二苯胺、沸水浴、设置对照二苯胺、沸水浴、设置对照2 2、加入洗涤剂后，动作、加入洗涤剂后，动作轻缓轻缓、柔和柔和，否则产生大量的泡，否则产生大量的泡 沫。加入酒精和玻璃棒搅沫。加入酒精和玻璃棒搅 拌时，动作拌时，动作轻缓轻缓，以免加

6、，以免加 剧剧DNADNA分子的断裂。分子的断裂。三、操作提示三、操作提示1 1、以血液为实验材料时，加、以血液为实验材料时，加 柠檬酸钠柠檬酸钠，防止血液凝固。，防止血液凝固。3 3、二苯胺试剂要、二苯胺试剂要现配现用现配现用。四、结果分析与评价四、结果分析与评价2 2、如果不呈现蓝色，或实验结果不明显，可能的、如果不呈现蓝色，或实验结果不明显，可能的 原因有哪些？原因有哪些？1 1、观察你提取的、观察你提取的DNADNA颜色，如果不是白色丝状物，颜色，如果不是白色丝状物，说明什么？说明什么？杂质较多杂质较多核物质没充分释放，如核物质没充分释放，如研磨研磨不充分或不充分或蒸馏水蒸馏水少少多次

7、搅拌，目的、操作方法不同，要注意区分多次搅拌，目的、操作方法不同，要注意区分二苯胺二苯胺现配现用现配现用加入酒精时摇动或搅拌时过猛，加入酒精时摇动或搅拌时过猛，DNADNA被破坏；被破坏；蛋白质蛋白质难度大。因易失活；空间结构、理化性质难度大。因易失活；空间结构、理化性质不同，无统一方法。不同，无统一方法。3 3、你认为从细胞中提取某种特定的蛋白质与提取、你认为从细胞中提取某种特定的蛋白质与提取DNADNA一样容易吗？一样容易吗？课题课题2 多聚酶链式反应扩增多聚酶链式反应扩增DNA片断片断体外迅速扩增体外迅速扩增DNADNA片段的技术片段的技术1 1、什么是多聚酶链式反应、什么是多聚酶链式反

8、应（PCRPCR）？2 2、PCRPCR技术有何意义？技术有何意义？3 3、PCRPCR技术有哪些应用？技术有哪些应用？解决样品中解决样品中DNADNA含量太低含量太低而难以分析研究的问题而难以分析研究的问题遗传疾病的诊断、刑侦破案、古生物学、遗传疾病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆、基因克隆、DNADNA序列测定等。序列测定等。课题背景课题背景一、基础知识一、基础知识（一）（一）PCRPCR原理原理条件条件 组分组分 作用作用模板模板原料原料酶酶能量能量DNADNA两条单链两条单链四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸 解旋酶解旋酶DNADNA聚合酶聚合酶ATPATP一小段一小段DNADNA或或R

9、NARNA提供复制模板提供复制模板合成子链的原料合成子链的原料打开打开DNADNA双螺旋双螺旋催化合成催化合成DNADNA子链子链为解旋和合成子链供能为解旋和合成子链供能使使DNADNA聚合酶能够从引物的聚合酶能够从引物的33端开始连接脱氧核苷酸端开始连接脱氧核苷酸1 1、DNADNA分子复制需要哪些基本条件？有何作用？分子复制需要哪些基本条件？有何作用？引物引物2 2、DNADNA复制为什么需要引物？复制为什么需要引物？DNADNA聚合酶不能够从头开始合成聚合酶不能够从头开始合成DNADNA，而只能从，而只能从33端延伸端延伸DNADNA链。链。A AA AA AT TT TT TG GG

10、GG GG GC CC CC CC C55端：端：33端：端：55端端33端端反向平行反向平行DNADNA的羟基（的羟基（OHOH）末端）末端磷酸基团的末端磷酸基团的末端当引物与当引物与DNADNA母链通过碱基互补配对结合后，母链通过碱基互补配对结合后，DNADNA聚合聚合酶就能从酶就能从 开始延伸开始延伸DNADNA链，链，DNADNA的合成方的合成方向总是从向总是从 向向 延伸。延伸。引物的引物的33端端子链的子链的55端端33端端引物引物母链的母链的33端端缓慢冷却复性（缓慢冷却复性（55 55）加热变性（加热变性（8080100100）3 3、双链的解开是、双链的解开是DNADNA复制

11、的前提，在体外如何打开复制的前提，在体外如何打开DNADNA 的双螺旋结构的双螺旋结构?利用利用DNADNA的热变性原理，通过控制温度来实现。的热变性原理，通过控制温度来实现。PCRPCR仪仪4 4、PCRPCR技术中如何解决高温使酶失活的问题？技术中如何解决高温使酶失活的问题？用耐高温的用耐高温的TaqDNATaqDNA聚合酶。聚合酶。5 5、PCRPCR反应需要哪些条件？反应需要哪些条件？缓冲溶液、缓冲溶液、DNADNA模板、两种引物、四种脱氧核苷酸、模板、两种引物、四种脱氧核苷酸、耐热的耐热的TaqDNATaqDNA聚合酶聚合酶，通过控制，通过控制温度温度使使DNADNA复制在复制在体外

12、反复进行。（体外反复进行。（PCRPCR仪实质上是一台能够自动调仪实质上是一台能够自动调控温度的仪器）控温度的仪器）（二）（二）PCRPCR的反应过程的反应过程1 1、PCRPCR的每次循环可以分为哪几步？的每次循环可以分为哪几步？变性变性：9595DNADNA解旋解旋复性复性：温度下降到：温度下降到5555，引物与，引物与DNADNA单链结合单链结合延伸延伸：7272左右，合成左右，合成DNADNA子链子链5 53 3G GG GT TC C3 35 5A AG GC CC C5 53 3A AG G引物引物5 53 3G GG G引物引物变性变性9595复性复性5555延伸延伸72722

13、2、预变性有什么作用？、预变性有什么作用？进行一次预变性，以便增加大分子模板进行一次预变性，以便增加大分子模板DNADNA彻底彻底变性的概率。变性的概率。一般要经历三十多次循环，从第二轮循环开始，一般要经历三十多次循环，从第二轮循环开始，上一次循环的产物作为模板参与反应，且引物上一次循环的产物作为模板参与反应，且引物延伸而成的延伸而成的DNADNA单链会与引物单链会与引物结合，进行结合，进行DNADNA的的延伸。这样，延伸。这样，DNADNA聚合酶只能特异地复制处于两聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的个引物之间的DNADNA序列，使这段固定长度的序列序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。呈

14、指数扩增。二、实验操作：二、实验操作：用用3 3个个恒温水浴锅恒温水浴锅，温度分别为，温度分别为9494、5555和和7272，按要求，在按要求，在3 3个水浴锅中来回转移个水浴锅中来回转移PCRPCR反应的微量离心反应的微量离心管即可。管即可。1 1、微量离心管、微量离心管薄壁塑料管薄壁塑料管2 2、微量移液器、微量移液器3 3、如果没有、如果没有PCRPCR仪，如何怎样来控制温度？仪，如何怎样来控制温度？（反应场所）（反应场所）添加药品的工具添加药品的工具三、操作提示：三、操作提示：1 1、避免、避免外源外源DNADNA污染污染：所用仪器、缓冲液、蒸馏水等：所用仪器、缓冲液、蒸馏水等 高压

15、灭菌。高压灭菌。2 2、缓冲液和酶分装成小份，、缓冲液和酶分装成小份，2020低温低温保存。使用保存。使用 前，取出放在冰块上缓慢融化。前，取出放在冰块上缓慢融化。3 3、每添加一种反应成分，更换一个移液器的枪头。、每添加一种反应成分，更换一个移液器的枪头。所有的成分都加入后，盖严离心管的盖子，用手所有的成分都加入后，盖严离心管的盖子，用手 指轻轻弹击管的侧壁，使反应液混合均匀。混匀指轻轻弹击管的侧壁，使反应液混合均匀。混匀 后离心处理，使反应液集中在离心管底部。后离心处理，使反应液集中在离心管底部。（一）理论上（一）理论上DNADNA扩增数目的计算扩增数目的计算四、结果分析与评价：四、结果分

16、析与评价：2 2 n na x 2 a x 2 n n（二）实验中（二）实验中DNADNA含量的测定含量的测定1 1、原理：、原理：DNADNA在在260260nmnm的紫外线波段有一强烈的吸收峰，的紫外线波段有一强烈的吸收峰，峰值的大小与峰值的大小与DNADNA的含量的含量有关。可以通过计算有关。可以通过计算DNADNA含量来评价扩增的效果。含量来评价扩增的效果。1 1、一条、一条DNADNA，复制，复制n n次，次，DNADNA为：为：2 2、a a条条DNADNA，复制，复制n n次，次，DNADNA为：为：2 2、过程、过程稀释稀释：PCRPCR反应液稀释反应液稀释5050倍倍对照调零

17、对照调零：蒸馏水作蒸馏水作空白对照空白对照，在波长，在波长260nm260nm处，将处，将紫外分光光度计紫外分光光度计的读数调节至零。的读数调节至零。取取DNADNA稀释液稀释液100uL100uL至比色杯中，测定至比色杯中，测定260nm260nm处处的光吸收值的光吸收值测定：测定：计算计算DNADNA含量（含量（gg/ml/ml ）50 x(260nm50 x(260nm的读数）的读数）x x 稀释倍数稀释倍数5050：在标准厚度为：在标准厚度为1 1cmcm的比色的比色杯中，杯中，ODOD260260为为1 1相当于相当于5050gg /ml/ml的双链的双链DNA.DNA.多多聚聚酶酶

18、链链式式反反应应扩扩增增D DN NA A片片段段PCRPCR原理原理DNADNA的复制需要酶、原料、引物、模板的复制需要酶、原料、引物、模板DNADNA的变性、复性和延伸受温度影响的变性、复性和延伸受温度影响PCRPCR过程过程变性变性复性复性延伸延伸操作步骤操作步骤配制配制PCRPCR反应体系反应体系移入离心管移入离心管放入放入PCRPCR仪仪设置循环程序设置循环程序DNADNA扩增扩增测定含量测定含量稀释稀释调零调零测定并读数测定并读数计算计算根据需要扩增的目标根据需要扩增的目标DNADNA的碱基序列来设计的。的碱基序列来设计的。引物的设计需要丰富的分子生物学实验经验引物的设计需要丰富的

19、分子生物学实验经验练习：如果要使用练习：如果要使用PCRPCR扩增一段已知扩增一段已知DNADNA序列，你打算序列，你打算 如何设计引物？如何设计引物？课题课题3 3 血红蛋白的提取和分离血红蛋白的提取和分离根据根据分子形状、大小、所带电荷的性质和多少、分子形状、大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等等，等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。可以用来分离不同种类的蛋白质。一、基础知识一、基础知识（一）凝胶色谱法（一）凝胶色谱法2 2、凝胶：、凝胶：大多数是由大多数是由多糖多糖（如（如葡聚糖葡聚糖或或琼脂糖琼脂糖）构）构成的微小的成的

20、微小的多孔球体多孔球体，内部有许多，内部有许多贯穿的贯穿的通道通道。也称也称分配色谱法分配色谱法，是，是根据根据相对分子质量的相对分子质量的大小大小分离蛋白质。分离蛋白质。1 1、概念：、概念：3 3、原理：、原理：相对分子量较相对分子量较小小的蛋白质易进入凝胶内部的的蛋白质易进入凝胶内部的通道，路程通道，路程长长，移动速度，移动速度慢慢；相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。相对分子量较相对分子量较大大的蛋白质无法进入凝胶内部的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在外移动，路程的通道，只能在外移动，路程短短，移动速度，移动速度快快。4 4、凝胶色谱

21、法分离蛋白质的原理、凝胶色谱法分离蛋白质的原理凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示 1 1、概念：、概念：一定范围内，能抵制外界一定范围内，能抵制外界酸酸或或碱碱对溶液对溶液PHPH的影响，维持的影响，维持PHPH值值基本不变基本不变的混合溶液。的混合溶液。2 2、缓冲溶液的配制：、缓冲溶液的配制：1 12 2 种缓冲剂种缓冲剂溶于水中配制溶于水中配制模拟生物体内的过程，保持模拟生物体内的过程，保持体外溶液的体外溶液的PHPH与体内与体内PHPH基本一致基本一致，防止蛋白质，防止蛋白质失去活性。失去活性。3 3、意义：、意义：1 1、概念：、概念：带电粒子带电粒

22、子在在电场电场作用下发生作用下发生迁移迁移的过程的过程（三）电泳（三）电泳（二）缓冲溶液（二）缓冲溶液2 2、原理、原理电泳利用待分离样品中各种分子电泳利用待分离样品中各种分子带电性质的差异带电性质的差异以及以及 分子大小分子大小、形状不同形状不同，使带电分子，使带电分子产生不同的迁移速产生不同的迁移速 度度，从而实现样品中各种分子的分离。，从而实现样品中各种分子的分离。3 3、常用方法：、常用方法：聚丙烯酰胺凝胶电泳；琼脂糖凝胶电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳；琼脂糖凝胶电泳。许多生物大分子，如许多生物大分子，如多肽、核酸多肽、核酸等有可解离的基团，等有可解离的基团，在在一定的一定的PHPH下，这些

23、基团会下，这些基团会带上正电或负电带上正电或负电。在在电场电场的作用下，这些带电分子会向着的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷与其所带电荷 相反相反的电极移动。的电极移动。红细胞：红细胞：血小板血小板血浆：血浆：水分、水分、血浆蛋白、无机盐、磷脂、葡萄糖血浆蛋白、无机盐、磷脂、葡萄糖白细胞白细胞血红蛋白（血红蛋白（9090）血细胞血细胞2 2、血液、血液1 1、用猪、牛、羊的红细胞提取血红蛋白的原因？、用猪、牛、羊的红细胞提取血红蛋白的原因？哺乳动物成熟红细胞无核无器，血红蛋白含量丰富哺乳动物成熟红细胞无核无器，血红蛋白含量丰富二、实验操作二、实验操作四个亚铁血红素基团四个亚铁血红素基团特

24、点：特点：每个肽链环绕一个每个肽链环绕一个亚铁血红素基团亚铁血红素基团，此基团可携带一分子氧或一分子二氧此基团可携带一分子氧或一分子二氧化碳，血红蛋白有化碳，血红蛋白有血红素血红素呈红色。呈红色。两条两条肽链、肽链、两条两条一肽链一肽链组成：组成：3 3、血红蛋白由哪些成分组成？有什么特点？、血红蛋白由哪些成分组成？有什么特点？样品处理样品处理粗分离粗分离纯化纯化纯度鉴定纯度鉴定5 5、蛋白质的提取和分离包括哪几步？、蛋白质的提取和分离包括哪几步？4 4、与其他真核细胞相比，红细胞有什么特点？、与其他真核细胞相比，红细胞有什么特点？这一特点对你进行蛋白质得分离有什么意义？这一特点对你进行蛋白质

25、得分离有什么意义？红细胞中的红细胞中的血红蛋白是血红蛋白是有色蛋白有色蛋白，分离时可观察，分离时可观察颜色判断什么时候收集洗脱液。使分离过程非常颜色判断什么时候收集洗脱液。使分离过程非常直观，简化了实验操作。直观，简化了实验操作。（一）样品处理及粗分离（一）样品处理及粗分离红细胞红细胞的洗涤的洗涤目的：目的：去除杂蛋白去除杂蛋白过程：过程：结果：结果：上清液中无黄色，表明洗涤干净上清液中无黄色，表明洗涤干净血红蛋白的释放：血红蛋白的释放：加蒸馏水、甲苯加蒸馏水、甲苯 ，磁力搅拌器搅拌，磁力搅拌器搅拌血样离心、血样离心、生理盐水洗涤红细胞、生理盐水洗涤红细胞、离心、离心、重复洗涤三次重复洗涤三次

26、思考思考分离血红蛋白溶液：分离血红蛋白溶液：离心管内离心管内离心离心透析透析过程：过程：原理：原理：血红蛋白溶液装入血红蛋白溶液装入透析袋透析袋，透析袋放入，透析袋放入磷酸缓冲液透析磷酸缓冲液透析目的：目的：除去样品中分子小的杂质除去样品中分子小的杂质透析袋能使小分子自由进出，而大分子透析袋能使小分子自由进出，而大分子保留在袋内。保留在袋内。（粗分离）（粗分离）吸出吸出血浆、血浆、思考思考（二）凝胶色谱操作（纯化）：（二）凝胶色谱操作（纯化）：2 2、凝胶色谱柱的装填、凝胶色谱柱的装填装填完毕，立即装填完毕，立即连接连接缓冲液洗脱瓶缓冲液洗脱瓶，在，在50cm50cm高的高的操作压操作压下，用

27、下，用磷酸缓冲液磷酸缓冲液充分充分洗涤平衡洗涤平衡1212小时。小时。使凝胶装填使凝胶装填紧密紧密。1 1、凝胶色谱柱的、凝胶色谱柱的制作制作：取凝胶浸泡于取凝胶浸泡于蒸馏水蒸馏水或或缓冲液缓冲液中充分中充分溶胀溶胀后，后，配成配成凝胶悬浮液凝胶悬浮液。填入色谱柱内填入色谱柱内3 3、样品加入与洗脱、样品加入与洗脱待待红色的蛋白质红色的蛋白质接近色谱接近色谱柱底端时，用试管收集流柱底端时，用试管收集流出液，每出液，每5ml5ml收集一试管，收集一试管，连续收集连续收集收集：收集：洗脱洗脱：调节缓冲液面调节缓冲液面与凝胶面平齐与凝胶面平齐滴加透析样品滴加透析样品样品渗入凝胶床样品渗入凝胶床加加磷

28、酸缓冲液磷酸缓冲液到适当高度，到适当高度，连接连接缓冲液洗脱瓶缓冲液洗脱瓶，洗脱。，洗脱。2 2、如何检测血红蛋白的分离是否成功、如何检测血红蛋白的分离是否成功？红色区带均匀、狭窄、平整，随洗脱液缓慢流出红色区带均匀、狭窄、平整，随洗脱液缓慢流出血红蛋白处在稳定的血红蛋白处在稳定的pHpH内，维持结构和功能。内，维持结构和功能。1 1、在整个过程中不断用磷酸缓冲液处理的目的是？、在整个过程中不断用磷酸缓冲液处理的目的是？思考：思考：3 3、你能描绘血红蛋白分离的完整过程吗？、你能描绘血红蛋白分离的完整过程吗？（1 1）样品处理：）样品处理：（4 4）纯度鉴定：）纯度鉴定：（3 3）纯化：）纯化

29、：（2 2）粗分离：）粗分离：聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。凝胶色谱法除去分子量较大的杂质蛋白凝胶色谱法除去分子量较大的杂质蛋白透析除去分子量较小的杂质。透析除去分子量较小的杂质。包括洗涤红细胞；血红蛋白的释放；包括洗涤红细胞；血红蛋白的释放；离心；透析离心；透析如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。蛋白的原因。3 3、血液样品离心后如果分层不明显，可能的原因是什么血液样品离心后如果分层不明显，可能的原因是什么？1 1、加入什么可以防止血液凝固？、加入什么可以防止血液凝固？加入柠檬酸钠加入柠檬酸钠思考：思考：4

30、 4、如果离心速度过高和时间过长，会有什么影响？、如果离心速度过高和时间过长，会有什么影响？如果离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细如果离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。蛋白的提取纯度。2 2、可以用蒸馏水代替生理盐水吗？、可以用蒸馏水代替生理盐水吗？不可以。用蒸馏水使细胞提前吸水涨破，使血红蛋不可以。用蒸馏水使细胞提前吸水涨破，使血红蛋白和杂质血浆蛋白混在一起，加大了分离的难度。白和杂质血浆蛋白混在一起，加大了分离的难度。1 1、加甲苯的目的是什么？、加甲苯的目的是什么？

31、思考：思考：细胞膜的磷脂细胞膜的磷脂易溶于甲苯，甲苯能易溶于甲苯，甲苯能加速红细胞加速红细胞破裂并释放出血红蛋白破裂并释放出血红蛋白。无色透明无色透明有机溶剂（甲苯层）有机溶剂（甲苯层）暗红色暗红色红细胞破碎物沉淀红细胞破碎物沉淀红色透明液体红色透明液体血红蛋白的水溶液层血红蛋白的水溶液层白色薄层固体白色薄层固体脂溶性物质的沉淀层脂溶性物质的沉淀层用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。透析过程动画演示透析过程动画演示柱底部的制作：柱底部的制作：尼龙网尼龙网100100目尼龙纱目尼龙纱1 1、从凝胶色谱的分离原理分析为什么凝胶、从凝胶色谱的分离原理分析为什么凝胶 的装填要紧密、均匀？的装填要紧密、均匀？在色谱柱内形成无效的空隙，使本该进在色谱柱内形成无效的空隙，使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过，搅乱洗脱液的流动次序，影响分离过，搅乱洗脱液的流动次序，影响分离的效果。的效果。2 2、装填凝胶柱时为什么不得有气泡存在？、装填凝胶柱时为什么不得有气泡存在？5 50 0c cm m搅乱洗脱次序，降低分离效果。搅乱洗脱次序，降低分离效果。