重组DNA技术的基本工具（第2课时）课件 2023—2024学年高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

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1、利用两张纸，按P73页思考讨论“重组DNA”的要求完成操作：TATCGTACGATAGGTACTTAA ATAGCATGCTATCCATG AATTCGGCATAC GCCGTATGTCCTAGAGGATCTTAAGAGCCATACTTAAAATTCTCGGTATG AATTCCATAC GGTATGGAGCCATACTTAAAATTCTCGGTATG53535353思考探讨根据学生实际操作的情况进行指导。如果制作的黏性末端的碱基不能互补配对可能是剪切位点或连接位点选得不对，也可能是其他原因。不能，因为基因的长度一般在100个碱基对以上。剪刀代表限制酶；透明胶条代表DNA连接酶。剪刀和透明胶条

2、分别代表哪种“分子工具”？你制作的黏性末端的碱基能不能互补配对？如果不能，可能是什么原因造成的？你插入的DNA片段能称得上一个基因吗？思考探讨同种限制酶切目的基因和载体，重新连接会有哪些情况？拓展延伸限制酶的选择1.酶切位点要保证目的基因是完整的2.酶切位点要要位于启动子和终止子之间（启动子下游）拓展延伸 用限制酶EcoR单独切割某质粒，可产生1个14 kb(1 kb即1 000个碱 基对)的长链，而同时用限制酶EcoR、Mbo联合切割该质粒，可得到 三种长度的DNA片段，见下图(其中*表示EcoR 切割后的一个黏性末端)。若用Mbo单独切割该质粒，则产生的DNA片段的长度为 A.2.5 kb

3、和5.5 kb B.2.5 kb和6 kb C.5.5 kb和8 kb D.6 kb和8 kbD D课堂练习3.1重组DNA技术的基本工具（第2课时）本节聚焦 阅读“DNA的粗提取实验与鉴定”实验，回答以下问题：1、粗提取DNA的思路是什么？其原理是？鉴定DNA的原理是？2、你认为本实验选材对有何要求，能否选用哺乳动物成熟红细胞或大肠杆菌细胞？实验用到哪些试剂，分别有何作用？3、简要概括实验步骤，思考：能否用蒸馏水研磨材料？过滤能否用滤纸？为什么滤液要在冰箱放置？4、鉴定DNA需要在什么样的条件下进行？DNA的粗提取与鉴定实验思路材料用具方法步骤实验原理利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理

4、和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。Q1、粗提取DNA的思路是什么？其原理是？鉴定DNA的原理是？1.DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精。2.DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，能溶于2mol/L NaCl溶液。3.在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。DNA的粗提取与鉴定实验思路材料用具方法步骤实验原理Q2、你认为本实验对选材有何要求，是否可以选用哺乳动物成熟红细胞或大肠杆菌细胞，为什么？实验用到哪些试剂，分别有何作用？DNA含量相对较高的生物组织选材：注意：不选哺乳动物成熟的红细胞，因其没有 细胞核和众多细胞器，几乎不含DNA。不选大肠杆菌，因其细胞较小，DN

5、A含量少。试剂：试剂作用研磨液体积分数为95%的酒精2mol/L 的NaCl溶液二苯胺试剂析出DNA溶解DNA鉴定DNA，要现配现用溶解并提取DNADNA的粗提取与鉴定实验思路材料用具方法步骤实验原理3、简要概括实验步骤，思考：能否用蒸馏水研磨材料？过滤能否用滤纸？为什么滤液要在冰箱放置？研磨析出DNA溶解与鉴定过滤或离心过滤：漏斗中垫上纱布,过滤研磨液，4冰箱 中放置几分钟后,再取上清液。离心：1500r/min转速下离心5min,再取上清液。称取30g洋葱,切碎,放入研钵中,倒入10mL研磨液,充分研磨否则DNA不能从细胞核中释放，从而影响提取的DNA含量不能用蒸馏水，无法溶解、提取DNA

6、可能含有DNA、RNA以及蛋白质、脂质、糖类等。不可用滤纸，DNA会吸附，造成损失使酶活性降低，防止DNA降解DNA的粗提取与鉴定实验思路材料用具方法步骤实验原理3、简要概括实验步骤，思考：能否用蒸馏水研磨？过滤能否用滤纸？为什么滤液要在冰箱放置？研磨析出DNA溶解与鉴定过滤或离心抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂。低温抑制DNA分子运动，使DNA易形成沉淀析出避免破坏DNA或者将溶液倒入塑料离心管,在10000r/min转速下离心5min,弃上清液,将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干。在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%),静置

7、23 min,溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌,卷起丝状物,并用滤纸吸去上面的水分;这一步的目的是蛋白质溶解在酒精中，DNA不溶于酒精而析出。实验组对照组水浴加热组别试剂处理结果对照组实验组DNA的粗提取与鉴定实验思路材料用具方法步骤实验原理3、简要概括实验步骤，思考：能否用蒸馏水研磨材料？过滤能否用滤纸？为什么滤液要在冰箱放置？研磨析出DNA溶解与鉴定过滤或离心将丝状物或沉淀物溶于 溶液中，加入 试剂，混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。二苯胺2mol/L的NaClNaCl溶液5mLNaCl溶液5mL二苯胺试剂4mL二苯胺试剂4mL丝状物或沉淀物对照组溶

8、液不变蓝，实验组变蓝，溶液蓝色深浅与溶液中DNA的含量的多少有关。1.如果选用鸡血细胞进行实验，如何快速破碎细胞？2.有时会在DNA滤液中添加嫩肉粉（木瓜蛋白酶），这样有什么好处？3.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些杂质吗？将鸡血细胞置于蒸馏水中，待细胞涨破后，收集滤液。利用蛋白酶分解杂质蛋白，不分解DNA，有利于DNA与蛋白质分开。粗提取的DNA可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质。思考探讨5.鉴定DNA的试剂是什么?使用时要注意什么?二苯胺试剂。使用时要现配现用,且鉴定DNA需要沸水中加热。思考探讨4.有时还会反复利用不同浓度的NaCl溶液来溶解、析出DNA，试猜想该操作的目的？进一步纯化

9、DNA用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐溶液中不能溶解的杂质；用低盐溶液使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。DNA的粗提取与鉴定课堂习题(1)DNA不溶于酒精，但一些蛋白质溶于酒精，可利用这一原理初步分离DNA与蛋白质。()(2)研磨之后，通过过滤或离心，DNA会保留在沉淀物中。()解析：研磨之后，通过过滤或离心，DNA会保留在上清液中。(3)DNA能与二苯胺试剂在常温下反应生成蓝色沉淀。()解析：DNA能与二苯胺试剂在沸水浴下反应，使溶液呈现蓝色，而非蓝色沉淀。2.下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述

10、,错误的是()A.酵母菌和菜花均可作为提取DNA的材料B.DNA能溶于物质的量浓度为2 mol/L的NaCl溶液C.向洋葱研磨液中加蒸馏水搅拌,可见玻璃棒上有白色丝状物D.向DNA溶液中加入二苯胺试剂,沸水浴加热,冷却后变蓝C课堂习题3.(2023广东卷)“DNA粗提取与鉴定”实验的基本过程是:裂解分离沉淀鉴定。下列叙述错误的是()A.裂解:使细胞破裂释放出DNA等物质B.分离:可去除混合物中的多糖、蛋白质等C.沉淀:可反复多次以提高DNA的纯度D.鉴定:加入二苯胺试剂后即呈现蓝色D4.DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异,可以利用这些差异,选择适当的物理或化学方法对它们进行提取。在利用洋葱进行“DNA的粗提取与鉴定”实验中,下列有关叙述正确的是()A.DNA在NaCl溶液中的溶解度随着溶液浓度的升高而升高B.常温下洋葱匀浆中有些酶类会影响DNA的提取C.DNA溶于95%的冷酒精,所以可用95%的冷酒精进一步提纯D.用同样方法从等体积牛血和鸡血中提取的DNA量相近B