生物现代生物科技 第一讲 基因工程（选修3）.ppt

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1、形成形成单单链链DNA新的新的DNA分子分子形成重形成重组组DNA分子分子黏性末端黏性末端或平末端或平末端形成形成产产物物碱基碱基对对间间的的氢键氢键磷酸二磷酸二酯键酯键磷酸磷酸二二酯键酯键磷酸磷酸二二酯键酯键作用作用部位部位DNA分子分子脱氧核脱氧核苷酸苷酸DNA分分子片段子片段DNA分子分子作用作用底物底物解旋解旋酶酶DNA聚合聚合酶酶DNA连连接接酶酶限制限制酶酶比比较较项项目目为使目的基因与载体形成的相同为使目的基因与载体形成的相同DNA片段末端能够片段末端能够连接，通常使用同一种限制酶将二者切割，但如果连接，通常使用同一种限制酶将二者切割，但如果不同的限制酶切割不同的限制酶切割DNA

2、分子所产生的末端也存在互分子所产生的末端也存在互补关系时，则两末端也可连接补关系时，则两末端也可连接对象对象要求要求选择限制酶切割目的基因时，被选择的限制酶在目选择限制酶切割目的基因时，被选择的限制酶在目的基因的两侧都要有识别序列，这样才能切割出完的基因的两侧都要有识别序列，这样才能切割出完整的目的基因整的目的基因数量数量要求要求限制酶切割位点所处的位置必须在标记基因外，只限制酶切割位点所处的位置必须在标记基因外，只有这样才能保证标记基因的完整性有这样才能保证标记基因的完整性位置位置要求要求过程过程逆转逆转录法录法化学化学合成法合成法从部分基因文库，从部分基因文库，如如cDNA文库中获取文库中获取从基因组文库从基因组文库中获取中获取人工合成人工合成从基因文库中获取从基因文库中获取方法方法当温度上升到当温度上升到90 以上时，双链以上时，双链DNA解聚为单链解聚为单链变性变性图解图解说明说明过程过程72 左右时，左右时，TaqDNA聚合聚合酶有最大活性，可使酶有最大活性，可使DNA新新链由链由5端向端向3端延伸端延伸延延伸伸温度下降到温度下降到50 左右，两种左右，两种引物通过碱基互补配对与两引物通过碱基互补配对与两条单链条单链DNA结合结合复复性性图解图解说明说明过过程程限制限制酶酶BamHBclSau3AHind识别识别序序列及切列及切割位点割位点