动物细胞与组织培养 .ppt

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1、 动物细胞与组织培养动物细胞与组织培养 动物细胞融合动物细胞融合 单克隆抗体制备单克隆抗体制备 细胞核移植技术和动物体克隆动物细胞核移植技术和动物体克隆动物动物细胞工程动物细胞工程(1)动物细胞与组织培养动物细胞与组织培养1、定义、定义:2、选材：、选材：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 动物细胞培养指在动物细胞培养指在体外体外模拟动物模拟动物体体内环内环境境，将动物细胞或组织在，将动物细胞或组织在无菌无菌，温度适宜温度适宜和和营养充分营养充分的条件下，使其继续生长，增殖并的条件下，使其继续生长，增殖并维持维持原有结构和功能原有结构和功能的技术。的技术。原因原因:细

2、胞生命旺盛，分裂能力强细胞生命旺盛，分裂能力强.肿瘤组织或细胞肿瘤组织或细胞 正常组织或细胞正常组织或细胞 动物组织或细胞培养的难易程度动物组织或细胞培养的难易程度分化程度低的组织或细胞分化程度低的组织或细胞 分化程度高的组织或细胞分化程度高的组织或细胞幼体组织或细胞幼体组织或细胞 老龄组织或细胞老龄组织或细胞3、动物细胞培养条件：、动物细胞培养条件：(1)、无菌、无毒的环境（添加一定量的无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素抗生素 定期更换培养液定期更换培养液 ）防止培养过程中污染防止培养过程中污染 防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害(2)(2)、培养

3、基、培养基成分：成分：种类：种类：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清动物血清等等?(3)(3)、温度和温度和PHPH 37 37 左右左右,7.2-7.4,7.2-7.4(4)(4)、气体环境、气体环境 O O2 2和和COCO2 2（95%95%空气和空气和5%CO5%CO2 2 ）和植物组织培养基相比有何独特之处？和植物组织培养基相比有何独特之处？液体培养基液体培养基、成分中有成分中有动物血清动物血清（补充合成培养基所缺乏的物质补充合成培养基所缺乏的物质）等）等4.动物细胞生长特性动物细胞生长特性：细胞贴壁：细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附悬液中分

4、散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞的接触抑制：细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。种现象称为细胞的接触抑制。5.5.过程：过程：原代培养：原代培养：一般细胞繁殖一般细胞繁殖1-10代，就发生接触代，就发生接触抑制不在分裂，这种培养就要原代培养。抑制不在分裂，这种培养就要原代培养。传代培养：传代培养：贴满瓶壁贴满瓶壁的细胞由于接触抑制不再分的细胞由于接触抑制不再分裂，需重新用胰蛋白酶处理，再分瓶培养让细胞裂，需重新用胰蛋白酶处理，再分瓶

5、培养让细胞继续增殖继续增殖。细胞株：细胞株：原代细胞一般传至原代细胞一般传至10代左右生长停止，代左右生长停止，大部分细胞衰老死亡，少数存活到大部分细胞衰老死亡，少数存活到4050代，代，这种传代细胞为细胞株，这种传代细胞为细胞株，细胞系：细胞系：细胞株传代至细胞株传代至50代后又出现细胞生长代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，可以可以无限制传代无限制传代，这种传代细胞为细胞系。，这种传代细胞为细胞系。动物胚胎或幼龄动物的组织、器官动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液细胞悬浮液胰蛋白酶胰蛋白酶1010代细胞代细胞原代培养原代

6、培养5050代细胞代细胞传代培养传代培养细胞株细胞株无限传代无限传代细胞系细胞系单个细胞单个细胞加培养液加培养液遗传物质遗传物质未改变未改变遗传物质遗传物质已改变已改变5.5.过程：过程：动物组织块动物组织块动物组织块动物组织块细胞悬液细胞悬液细胞悬液细胞悬液原代培养原代培养原代培养原代培养传代培养传代培养传代培养传代培养胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理幼龄动物的器官组织；动物胚胎幼龄动物的器官组织；动物胚胎幼龄动物的器官组织；动物胚胎幼龄动物的器官组织；动物胚胎动动物物细细胞胞培培养养细胞贴壁细胞贴壁细胞贴壁细胞贴壁接触抑制接触抑制接触抑制接触抑制原代培养原代培养原代培养原代

7、培养传代培养传代培养传代培养传代培养细胞株细胞株细胞株细胞株细胞系细胞系细胞系细胞系1.胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？间的物质是什么成份？2.细胞膜的主要成份是什么？胰蛋白酶能将细细胞膜的主要成份是什么？胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？胞消化掉吗？3.既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？能够织分散成单个细胞要注意什么问题呢？能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？胰蛋白酶水解蛋白质胰蛋白酶水解蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质和磷脂蛋白质和

8、磷脂能能注意时间的控制注意时间的控制 不能，因为两者的最适不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近较接近问题与思考问题与思考5、动物细胞培养能否像绿色植物组织培、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？养那样最终培养成新个体？成块组织不利培养，分散了做成细胞悬成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养，使每个细胞与培养液接触浮液利于培养，使每个细胞与培养液接触 不能，动物细胞培养只能使细胞数目不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，因为动物细胞的全能性会随着动增多，因为动物细胞的全能性会随着

9、动物细胞分化程度的提高而逐渐受到抑制物细胞分化程度的提高而逐渐受到抑制4、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？胞？6、培养瓶中的细胞培养到什么时候就、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？不再分裂、增殖？7、如此时细胞数量并未达到人们的需求，、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？应该怎样办？当贴壁细胞分裂生长到表面相互接当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞分裂就会停止分裂增殖，触时，细胞分裂就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。这种现象叫接触抑制。将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理，将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后继续增殖。然

10、后继续增殖。这样的过程叫做传代培养这样的过程叫做传代培养8、如何理解原代培养和传代培养？、如何理解原代培养和传代培养？9、传代培养的细胞能一直传代下去吗？、传代培养的细胞能一直传代下去吗？10、有些为何能一直传下去？、有些为何能一直传下去？在第一培养瓶中培养就是原代培在第一培养瓶中培养就是原代培养，之后转移到其它培养瓶中培养就养，之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养是传代培养不能不能遗传物质发生改变，向癌细胞方遗传物质发生改变，向癌细胞方向发展。向发展。细胞的全能性细胞的全能性细胞株、细胞系细胞株、细胞系植物体植物体培养结果培养结果获得细胞获得细胞或细或细胞产物胞产物快速繁殖、培育快速繁殖、

11、培育无病毒植株等无病毒植株等培养目的培养目的葡萄糖、动物血清葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目植物组织和动物细胞培养的比较植物组织和动物细胞培养的比较6、动物细胞培养应用、动物细胞培养应用大规模培养生产生物制品大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）干扰素、单克隆抗体）作为基因工程中的受体细胞作为基因工程中的受体细胞培养的动物细胞可以用于检测有毒物培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判

12、断某种物质的毒性质，判断某种物质的毒性为治疗和预防癌症及其他疾病提供理为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据论依据1、下列属于动物细胞工程中的工具是（、下列属于动物细胞工程中的工具是（）A限制性内切酶限制性内切酶 BDNA连接酶连接酶 C胰蛋白酶胰蛋白酶 D果胶酶果胶酶C2、在动物细胞培养的有关叙述中，正确的是（、在动物细胞培养的有关叙述中，正确的是（）A动物细胞培养的目的就是为了获得大量的细动物细胞培养的目的就是为了获得大量的细胞分泌蛋白胞分泌蛋白B动物细胞培养前要用胰蛋白酶处理使细胞分动物细胞培养前要用胰蛋白酶处理使细胞分散散C细胞遗传物质的改变发生于原代培养过程中细胞遗传物质的改变发生于

13、原代培养过程中D培养至培养至50代后继续传代的细胞是细胞株代后继续传代的细胞是细胞株B 3.3.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于（于（）A.A.培养基不同；培养基不同；B.B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；C.C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；D.D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培 养为胚状体。养为胚状体。A4 4、下、下图图是是动动物物细细胞培养的基本胞培养的基本过过程示意程示意图图。请请据此据此图图回答回答(1)

14、(1)容器容器A A中放置的是中放置的是动动物器官或物器官或组织组织。它一般取自它一般取自_。(2)(2)容器容器A A中的中的动动物器官或物器官或组织组织首先要首先要进进行的行的处处理是理是_，然后用，然后用 酶酶处处理，理，这这是是为为了使了使细细胞分散开来。胞分散开来。这这样样做的目的是做的目的是_._.(3)(3)培养首先在培养首先在B B瓶中瓶中进进行。瓶中的培养行。瓶中的培养基成分有基成分有_ _等。在等。在此瓶中培养一段此瓶中培养一段时间时间后，一般后，一般传传到第到第 代，有代，有许许多多细细胞衰老死亡，到胞衰老死亡，到这时这时的培的培养称养称为为_._.幼龄动物的器官幼龄动物

15、的器官、组织或动物胚胎组织或动物胚胎 原代培养原代培养10葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清物血清 使每个细胞能与培养液接触使每个细胞能与培养液接触 胰蛋白胰蛋白 剪碎剪碎(4)为了把为了把B瓶中的细胞分装到瓶中的细胞分装到C瓶中，用瓶中，用_处理，然后配置成处理，然后配置成_，再分装。，再分装。(5)在在C瓶中正常培养了一段时间后，发现细瓶中正常培养了一段时间后，发现细胞全部死亡。原因是胞全部死亡。原因是_。细胞没有发生癌变细胞没有发生癌变胰蛋白酶胰蛋白酶 细胞悬浮液细胞悬浮液5某研究小组进行药物试验时，以动物肝某研究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为

16、材料，测定药物对体外培养细胞的细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种，甲细毒性。供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题：请回答下列有关动物细胞培养的问题：（1）将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置）将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其它培养条件于培养瓶中培养，培养液及其它培养条件均相同。一段时间后，观察到甲细胞数量均相同。一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细胞数量比乙细胞数量_。（2）在动物细胞培养时，通常在合成培养）在动物细胞培养时，通常在合成培养基中加

17、入适量血清，其原因是基中加入适量血清，其原因是_。细胞培养应在含细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进的恒温培养箱中进行，行，CO2的作用的作用_。多多补充合成培养基缺乏的物质补充合成培养基缺乏的物质维持溶液的维持溶液的PH（3）在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺）在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长满瓶壁时，其生长_。药物试。药物试验需要大量细胞，两种细胞频繁传代，甲验需要大量细胞，两种细胞频繁传代，甲细胞比乙细胞可以传代的次数更细胞比乙细胞可以传代的次数更_。若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需用需用_消化处理。消化处理。（4）为了防止细胞

18、培养过程中细菌的污染，）为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的可向培养液中加入适量的_。停止停止多多胰蛋白酶胰蛋白酶抗生素抗生素（5）已知癌细胞）已知癌细胞X过量表达与肝肿瘤的发过量表达与肝肿瘤的发生密切相关，要试验一种抗肿瘤药物生密切相关，要试验一种抗肿瘤药物Y对对甲细胞生长的影响，可将甲细胞分为甲细胞生长的影响，可将甲细胞分为AB两组，两组，A组细胞培养液中加入组细胞培养液中加入_，B组细胞培养液中加入无组细胞培养液中加入无菌生理盐水，经培养后，从菌生理盐水，经培养后，从AB两组收两组收集等量细胞，通过分别检测集等量细胞，通过分别检测X基因在基因在AB两组细胞中的两组细胞中的_ _或或_ _合合成分子水平的差异，确定成分子水平的差异，确定Y的药效。的药效。YmRNA蛋白质蛋白质