如何看抗体检测结果及检测应用 .ppt

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1、以人为本以人为本 以正兴以正兴邦邦如何看抗体检测结果及抗体检测应用如何看抗体检测结果及抗体检测应用隋海亮隋海亮2014年年7月月5日日文档密级：内部公开文档密级：内部公开以人为本以人为本 以正兴以正兴邦邦1一、猪瘟一、猪瘟ELISAELISA原理原理 阻断（竞争）阻断（竞争）ELISAELISA抗体抗原加入样品洗涤+酶标记物洗涤+底物蓝色淡蓝色终止读数阻断（竞争）ELISA原理例如：CSFV-Ab、PRV-gI、PRV-gB以人为本以人为本 以正兴以正兴邦邦2猪瘟疫苗的免疫评估猪瘟疫苗的免疫评估关注两点关注两点p阳性率：阳性率：猪瘟抗体（阻断率（猪瘟抗体（阻断率（Blocking）40%，判，

2、判为阳性阳性结果；果；30%Blocking40%，判，判为可疑可疑结果；果；Blocking30%，判，判为阴性阴性结果）；果）；免疫合格率：阻断率（免疫合格率：阻断率（Blocking）50%的，即的，即为免疫合格。免疫免疫合格。免疫合格的比例即合格的比例即为免疫合格率。免疫合格率。以人为本以人为本 以正兴以正兴邦邦3p变异系数：异系数：Coefficient of Variation(CV)变异系数异系数计算的是平均个体的算的是平均个体的变化，以平均滴度的背离的百分数来表化，以平均滴度的背离的百分数来表示示公式如下公式如下标准偏差（准偏差（STDEV）CV=X 100%平均阻断率平均阻断

3、率CV40%,显示了群内猪只有一个均衡的、相似反示了群内猪只有一个均衡的、相似反应CV60%,显示了群内猪只滴度反示了群内猪只滴度反应变化高于正常估化高于正常估计值以人为本以人为本 以正兴以正兴邦邦4猪瘟检测的应用猪瘟检测的应用p免疫免疫评估：估：商品猪：猪瘟商品猪：猪瘟二免后后4-6周周，要求：阳性率，要求：阳性率 80%,CV40%种猪群（公猪和母猪）：猪瘟免疫后种猪群（公猪和母猪）：猪瘟免疫后4-6周，要求周，要求：免：免疫合格率疫合格率80%（严格一点，要格一点，要90%）,CV40%后后备猪（全群猪（全群检测）：）：进入隔离舍后入隔离舍后1-2周、周、进入配种入配种舍前舍前1个月（个

4、月（6-6.5月月龄），要求：），要求：Blocking 40%，阴性猪阴性猪补打疫苗，打疫苗，3周后复周后复检，不合格淘汰。，不合格淘汰。以人为本以人为本 以正兴以正兴邦邦5猪瘟检测的应用猪瘟检测的应用p仔猪首免日仔猪首免日龄的确定：的确定：选30-60头仔猪，日仔猪，日龄和体重相近，每和体重相近，每窝1-2头，确，确认没有野毒感染的没有野毒感染的风险，不接种猪瘟疫苗，不接种猪瘟疫苗连续采血：出生后采血：出生后7天、天、14天、天、21天、天、28天、天、35天、天、42天天检测抗体水平抗体水平 要求：要求：CSFAb Block30%仔猪占仔猪占20%-40%时为首免首免日日龄(依据感染依

5、据感染压力和平均阻断率而定力和平均阻断率而定)。以人为本以人为本 以正兴以正兴邦邦6二、蓝耳二、蓝耳ELISAELISA原理原理 间接间接ELISAELISA抗体抗原加入样品洗涤+酶标记物洗涤+底物蓝色无色终止读数间接ELISA原理以人为本以人为本 以正兴以正兴邦邦7结果判断结果判断p结果判定：果判定：蓝耳抗体（耳抗体（S/P0.4，判，判为阳性阳性结果；果；S/P0.4，判，判为阴性阴性结果）果）免疫猪群免疫猪群 0.40.4S/PS/P2.52.5；对于于过高抗体种猪，隔离高抗体种猪，隔离饲养养，2 2周后周后采血采血检测，若抗体，若抗体处于上升于上升趋势的种猪的种猪则淘汰淘汰非免疫猪群非

6、免疫猪群 S/PS/P值0.4 0.4 淘汰或隔离淘汰或隔离饲养养以人为本以人为本 以正兴以正兴邦邦8应用应用p公猪公猪 季度性季度性监测全部公猪全部公猪，一年，一年4次次要求：要求：S/P2.5公猪公猪暂停使用停使用(1-2个月个月)或或PCR确确认感染状感染状态 p母猪母猪 季度性季度性监测母猪母猪 要求：要求：S/P应主要在主要在2.5 S/P 0.4(90%母猪抗体在免疫后母猪抗体在免疫后转阳阳)p后后备母猪和后母猪和后备公猪公猪 在在引引进种群前种群前1个月，全群个月，全群监测 要求：要求：S/P2.5和和S/P0.4暂停引入繁殖群停引入繁殖群以人为本以人为本 以正兴以正兴邦邦9应用

7、应用p动态检测4周周龄、10周周龄猪群，每次猪群，每次20-30样本本 主要是：分析主要是：分析蓝耳感染状耳感染状态，判断猪群是否，判断猪群是否稳定，定，(对于不于不稳定群体定群体,延延迟转群或免疫等群或免疫等)，如果，如果S/P2.5的比例超的比例超过5%，则判断判断该场蓝耳不耳不稳定，定，有感染；没有有感染；没有则稳定。定。以人为本以人为本 以正兴以正兴邦邦10三、伪狂犬三、伪狂犬p伪狂犬狂犬gEgE：结果成立条件：阴性果成立条件：阴性对照平均照平均值-阳性阳性对照平照平均均值必必须大于或等于大于或等于0.30.3；否；否则试验无效。无效。p判定判定结果：如果果：如果S/NS/N值低于或等

8、于低于或等于0.600.60，样品品应判定判定为阳阳性；如果性；如果S/NS/N值大于大于0.700.70，样品品应判判为阴性；阴性；处于于0.60.70.60.7的的样品判定品判定为可疑，可疑，间隔两周隔两周时间可重新可重新检测。伪狂犬病毒伪狂犬病毒gE片段片段gB片段片段疫苗病毒片段疫苗病毒片段以人为本以人为本 以正兴以正兴邦邦11猪群猪群PRV感染状况的普查感染状况的普查p采样要求采样要求公猪群：全部采样公猪群：全部采样生产母猪群：随机采样生产母猪群：随机采样30个样本个样本15周龄后的生长猪（母源抗体消失）：随机采样周龄后的生长猪（母源抗体消失）：随机采样20-30个样本个样本p检测方

9、法检测方法IDEXX PRV gI ELISA S/N0.6 阳性，阳性，S/N0.7阴性阴性0.6S/N0.7 隔离隔离2周后重复检测周后重复检测p普查结果分析：普查结果分析：低感染群：种猪阳性率低感染群：种猪阳性率10%以下，可做净化以下，可做净化 高感染群：种猪阳性率高感染群：种猪阳性率10%以上，低于以上，低于30%，可做净化；高于，可做净化；高于30%，通过疫苗控制，来稳定猪群，通过疫苗控制，来稳定猪群以人为本以人为本 以正兴以正兴邦邦12伪狂犬疫苗的免疫评估伪狂犬疫苗的免疫评估针对阴性场针对阴性场p商品猪群商品猪群免疫疫苗后免疫疫苗后4-6周，随机采周，随机采样20-30份份要求：

10、要求：gE抗体抗体检测全部全部为阴性；阴性；gB抗体抗体检测阳性率阳性率95%以人为本以人为本 以正兴以正兴邦邦13p伪狂犬的狂犬的评级标准：准：伪狂犬狂犬gE抗体全阴性，抗体全阴性，则为阴性阴性场伪狂犬狂犬gE抗体阳性，但抗体阳性，但检测15周周龄猪，猪，gE抗体抗体转阴，阴，则为阳性阳性稳定定场伪狂犬狂犬gE抗体阳性，但抗体阳性，但检测15周周龄猪，猪，gE抗体阳性率达到抗体阳性率达到20%以以上，上，则为阳性不阳性不稳定定稳定定场 以人为本以人为本 以正兴以正兴邦邦14应用应用净化净化p母猪群母猪群,公猪群公猪群(全部全部)过去去6-12个月没有使用个月没有使用全病毒全病毒灭活苗或非活苗

11、或非gE基因缺失弱毒疫苗基因缺失弱毒疫苗 若若S/N0.6 则淘汰（淘汰（对于于怀孕母猪孕母猪:可以先隔离可以先隔离,产后后2周淘汰）周淘汰）;若若0.6S/N0.7 淘汰或隔离淘汰或隔离2周后重复周后重复检测,阳性者淘汰阳性者淘汰;间隔隔6,126,12个月重复个月重复检测全群全群,若前后若前后两次两次检测全部全部为阴性阴性，则后后续检测不需要全群采不需要全群采样,可以按季度可以按季度检测:每群随机采每群随机采样15-2015-20份份;若季度若季度检测时出出现阳性阳性猪只猪只,其其所在猪舍所在猪舍则需要全部需要全部检测,阳性淘阳性淘汰汰以人为本以人为本 以正兴以正兴邦邦15p商品群商品群随机抽随机抽样检测（如（如5周、周、15周周龄猪）或猪）或设立非免疫的哨兵立非免疫的哨兵猪（非免疫猪）猪（非免疫猪）:20-30头/批作批作为哨兵猪（哨兵猪（监测PRVgE和和PRVgB抗体抗体,评估但不涉及淘汰）估但不涉及淘汰）以人为本 以正兴邦