动物细胞融合与单克隆抗体一轮复习 .ppt

《动物细胞融合与单克隆抗体一轮复习 .ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《动物细胞融合与单克隆抗体一轮复习 .ppt（21页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、（一）（一）概念概念A A细胞细胞B B细胞细胞人工诱导人工诱导杂交细胞杂交细胞 动物细胞融合（也称细胞杂交）：动物细胞融合（也称细胞杂交）：是指是指两个或多个细胞两个或多个细胞融合形成融合形成一个一个细胞细胞的过程。的过程。融合后的细胞称作融合后的细胞称作杂交细胞杂交细胞一、动物细胞融合一、动物细胞融合细胞膜的流动性细胞膜的流动性原理？原理？3 3、两两融合后细胞的类型？、两两融合后细胞的类型？4 4、ABAB杂交细胞遗传物质有什么特杂交细胞遗传物质有什么特点？点？三种三种AAAA、ABAB、BBBB、（、（A A、B B）融合后的细胞进行有丝分裂，融合后的细胞进行有丝分裂，形成完整的杂交细

2、胞形成完整的杂交细胞含两种生物的遗传物质含两种生物的遗传物质（二）动物细胞融合过程（二）动物细胞融合过程A细胞细胞B细胞细胞1 1、诱导、诱导融合方法：融合方法：物理方法：物理方法：化学方法：化学方法：生物方法：生物方法：电激等电激等PEGPEG灭活病毒灭活病毒2、为什么灭活的病毒能作诱导剂、为什么灭活的病毒能作诱导剂？灭活丧失感染能力灭活丧失感染能力保留融合活性保留融合活性（三）动物（三）动物细胞融合技术的意义和应用细胞融合技术的意义和应用1 1、突破有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。、突破有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。2 2、最主要用途：制备单克隆抗体。、最主要用途：制备单

3、克隆抗体。（四）比较动、植物细胞杂交技术（四）比较动、植物细胞杂交技术比较比较项目项目细胞融细胞融合原理合原理细胞融细胞融合过程合过程用途用途诱导手段诱导手段植物体植物体细胞杂细胞杂交交动物细动物细胞融合胞融合细胞膜的细胞膜的流动性流动性细胞膜的细胞膜的流动性流动性酶解法酶解法去除细去除细胞壁后诱导原胞壁后诱导原生质体融合生质体融合用用胰蛋白酶胰蛋白酶使使细胞分散后诱细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合离心、电刺离心、电刺激、振动、激、振动、聚乙二醇聚乙二醇克服远源杂克服远源杂交不亲和，交不亲和，获得获得杂种植杂种植株株除应用植物除应用植物细胞杂交手细胞杂交手段外，段外，还有还有灭活病毒灭活病毒获

4、得杂种获得杂种细胞、细胞、制制备单克隆备单克隆抗体抗体强调：强调：效应效应B淋巴细胞是淋巴细胞是能够产生抗体的能够产生抗体的B淋巴细淋巴细胞，下文将其简称为胞，下文将其简称为B淋淋巴细胞巴细胞抗体：能够与抗原发生特异抗体：能够与抗原发生特异性结合的性结合的免疫球蛋白免疫球蛋白。二、单克隆抗体二、单克隆抗体效应效应效应效应B B B B细胞细胞细胞细胞记忆记忆记忆记忆B B B B细胞细胞细胞细胞抗原抗原抗原抗原刺刺刺刺 激激激激抗体抗体抗体抗体产产产产 生生生生能产生抗体的细胞是能产生抗体的细胞是浆细胞浆细胞（即效应（即效应B细胞）。细胞）。B B B B淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞分裂、

5、分化分裂、分化分裂、分化分裂、分化抗体的传统生产方法抗体的传统生产方法抗原抗原 反复注射动物反复注射动物从动物的从动物的血清血清中分离抗体中分离抗体该法制备抗体的缺点：该法制备抗体的缺点：产量低、纯度低，且抗体产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。的特异性差、灵敏度低。单克隆抗体！单克隆抗体！（一）单克隆抗体的概念：（一）单克隆抗体的概念：单一的单一的B B细胞克隆产生的细胞克隆产生的化学性质单一、特异性强化学性质单一、特异性强的抗体的抗体（二）单克隆抗体的制备（二）单克隆抗体的制备能否对浆细胞进行动物细胞培养，获得大量的浆细能否对浆细胞进行动物细胞培养，获得大量的浆细胞，从而获得单克隆

6、抗体？胞，从而获得单克隆抗体？如何让浆细胞无限增殖？如何让浆细胞无限增殖？效应效应B B细胞细胞瘤细胞瘤细胞融合融合杂交瘤杂交瘤细胞细胞单克隆单克隆抗体抗体动物细胞培养动物细胞培养产生产生既能无限增殖，既能无限增殖，又能产生特异性抗体。又能产生特异性抗体。为什么给小鼠注射特定的为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？抗原蛋白？会有几种融合方式？会有几种融合方式？杂交瘤细胞是如何筛选杂交瘤细胞是如何筛选出来的？有何特点？出来的？有何特点？是否所有的杂交瘤细胞是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗体？都能产生专一性抗体？如何获得大量的单克隆如何获得大量的单克隆抗体？抗体？（一选）（一选）选择选择培养基培养基

7、：只有：只有杂交瘤细胞杂交瘤细胞才才能存活能存活BBBB 、B B瘤瘤 、瘤瘤瘤瘤 （B B、瘤）、瘤）获得产生相应获得产生相应抗体的抗体的B B细胞细胞（二选）：选能（二选）：选能产生产生专一抗体的专一抗体的杂交瘤细胞杂交瘤细胞体外培养体外培养体外培养体外培养小鼠腹腔内培养小鼠腹腔内培养小鼠腹腔内培养小鼠腹腔内培养杂交瘤细胞特点：杂交瘤细胞特点：杂交瘤细胞特点：杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗既能产生特异性抗既能产生特异性抗既能产生特异性抗体，又能大量增殖。体，又能大量增殖。体，又能大量增殖。体，又能大量增殖。克隆化培养克隆化培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞抗原抗原B淋巴淋巴细胞细胞浆细胞浆细胞体外

8、培养体外培养体内培养体内培养单克隆抗体单克隆抗体杂交瘤细胞杂交瘤细胞融合融合 筛选筛选产生特定产生特定抗体抗体的杂交瘤细胞的杂交瘤细胞克隆化培养克隆化培养 抗体检测抗体检测 多次筛选多次筛选刺激刺激刺激刺激增殖增殖增殖增殖分化分化分化分化单抗制备过程分哪几步？单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？序是？（三）（三）单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用1、诊断试剂、诊断试剂最广泛应用最广泛应用准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速单克隆抗体最主要的优点：单克

9、隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，特异性强，灵敏度高，可大量制备。可大量制备。“生物导弹生物导弹”单克隆抗体药物单克隆抗体药物 单抗导向，药物为弹头单抗导向，药物为弹头2、治疗疾病和运载药物、治疗疾病和运载药物主要用于治疗主要用于治疗癌症治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成癌药物，形成“生物导弹生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。准确杀伤癌变细胞。【例例4 4】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（克隆抗体，与骨髓

10、瘤细胞融合的是（）A.A.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴淋巴细胞细胞B.B.不经过免疫的不经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D.D.不经过免疫的不经过免疫的B B淋淋巴细胞巴细胞【例例5 5】单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 （）A.A.B B淋巴细胞淋巴细胞 B BT T淋巴细胞淋巴细胞 C C骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 D D杂交瘤细胞杂交瘤细胞AD【例例6】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中列实验步骤中错误错误的是（的是（）A A将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗

11、体的将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B B淋巴淋巴细胞细胞B B用纤维素酶处理用纤维素酶处理B B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞C C用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B B淋巴淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合D D筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体细胞群，培养后提取单克隆抗体B两个过程两个过程动物细胞培养过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三个三个“一一”一个诱导细胞融合的新方法一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒灭活病毒

12、一个新细胞杂交瘤细胞一个新细胞杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势强、灵敏度高的优势(1)(1)若若A A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B B细胞是取自小鼠细胞是取自小鼠体内的体内的 细胞，细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射前，应给小鼠注射_类物质。类物质。（2）d过程过程是一个是一个_过程，该过程的进过程，该过程的进行常用行常用_或或_的诱导。的诱导。(3)(3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成 种种类型的类型的C C细胞，因此需用细胞，因此需用_培养基

13、筛选出培养基筛选出D D细胞细胞用于培养，用于培养，D D细胞的名称是细胞的名称是 ，其特点是，其特点是_。效应效应B 抗原抗原 细胞融合细胞融合 聚乙二醇聚乙二醇 灭活的病毒灭活的病毒 选择性选择性 3既能无限增殖又能产生特异性抗体既能无限增殖又能产生特异性抗体 杂交瘤细胞杂交瘤细胞(4)(4)在培养时通过在培养时通过_分裂方式大量繁殖。分裂方式大量繁殖。D D细细胞体外培养需要注意的条件是（要求答胞体外培养需要注意的条件是（要求答5 5项）项）_。（5 5）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，与常规抗体相比，其特点是与常规抗体相比，其特点是_。

14、特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高 有丝有丝有丝有丝无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和pHpH；适宜的气体环境适宜的气体环境 1515、（1）单克隆抗体是指）单克隆抗体是指 。（2 2）制备单克隆抗体的步骤：）制备单克隆抗体的步骤：将将_注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细胞，其中至少胞，其中至少1 1个淋巴细胞带有抗该抗原的抗体。个淋巴细胞带有抗该抗原的抗体。将步骤将步骤获得的获得的B B淋巴细胞与步骤淋巴细胞与步骤培养的骨髓瘤细胞培养的骨髓瘤细胞在在_的诱导下融合。的诱导下融合。将诱导后产生的多种细胞，

15、放在将诱导后产生的多种细胞，放在_培养基的多孔培养基的多孔培养板上培养，筛选。培养板上培养，筛选。这样获得的杂交瘤细胞既具有这样获得的杂交瘤细胞既具有B B淋巴细胞淋巴细胞_的能力，又具有的能力，又具有_的本领。的本领。检测和分离带有抗检测和分离带有抗X X抗体的阳性细胞，培养板中每孔放抗体的阳性细胞，培养板中每孔放一个细胞进行培养。一个细胞进行培养。将阳性细胞进行增殖，从而制备出大量抗该抗原的单克将阳性细胞进行增殖，从而制备出大量抗该抗原的单克隆抗体。隆抗体。化学性质单一，特异性强的抗体化学性质单一，特异性强的抗体 抗原抗原 聚乙二醇聚乙二醇选择性选择性 无限增殖无限增殖 产生专一抗体产生专

16、一抗体（3）大量制备单克隆抗体的方法主要有两种：）大量制备单克隆抗体的方法主要有两种：体外培养法，可获得体外培养法，可获得10 g/mL的抗体；的抗体；动物体内动物体内诱生法可获得诱生法可获得520mmg/mL的抗体。你选择的方法及原的抗体。你选择的方法及原因是因是 。（4 4）用本法制备出的单克隆抗体仍具有局限性，因）用本法制备出的单克隆抗体仍具有局限性，因为它是用小鼠的为它是用小鼠的_细胞制备的，其化学本质是细胞制备的，其化学本质是_，应用于人体，会作为，应用于人体，会作为 产生产生 ，解决这个问题的方法是，解决这个问题的方法是_。大量生产选大量生产选，小规模生产选，小规模生产选效应效应B

17、蛋白质蛋白质异物异物免疫反应免疫反应采用人的效应采用人的效应B细胞制备细胞制备15、右图为某同学根据杂交瘤技术、右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：体的实验方案。据图回答：（1）该方案能达到预期效果吗）该方案能达到预期效果吗？。原因是。原因是_。（2）图中）图中为为 过程，过程，常用常用 作为诱导剂。该细作为诱导剂。该细胞继承了胞继承了_ ，因此不仅能分泌，因此不仅能分泌_，还有，还有 本领。本领。不能不能 没有将抗原注入小鼠体内，无法获得没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生专一抗体的产生专一抗体的B淋巴细胞淋巴细胞 细胞融合细胞融合 灭活病毒灭活病毒 双亲细胞的遗传物质双亲细胞的遗传物质 特异性抗体特异性抗体 大量增殖大量增殖制备单克隆抗体制备单克隆抗体（3）该方案的目的是）该方案的目的是_。