疟原虫显微镜镜检技术 .ppt

《疟原虫显微镜镜检技术 .ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《疟原虫显微镜镜检技术 .ppt（75页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、疟原虫显微镜镜检技术疟原虫显微镜镜检技术东安县疾病预防控制中心 周永玲2011.07.10疟疾简介疟疾简介 疟疾是一种古老的传染病疟疾是一种古老的传染病,俗俗称称“冷热病冷热病”、“打摆子打摆子”、“发疟子发疟子”、“脾寒脾寒”、“瘴气瘴气”等，是由疟原虫寄生等，是由疟原虫寄生于人体引起的传染性寄生虫于人体引起的传染性寄生虫病。病。寄生人体的四种疟原虫寄生人体的四种疟原虫n n间日疟原虫间日疟原虫 Plasmodium vivaxPlasmodium vivax，P.vP.v n n三日疟原虫三日疟原虫 P PMalariae,P.mMalariae,P.m n n恶性疟原虫恶性疟原虫 P P

2、Falciparum,P.fFalciparum,P.f n n卵形疟原虫卵形疟原虫 P POvale,P.oOvale,P.o n n我我国国主主要要是是间间日日疟疟常常见见，恶恶性性疟疟次次之之，三日疟偶尔发现，卵形疟已无病例报告。三日疟偶尔发现，卵形疟已无病例报告。镜检疟原虫方法简述 19世纪后期，显微镜的出现使人们不断发现了传染病的病因。1880年法国军医拉韦朗第一次见到并描述了人红细胞内的疟原虫，至此才解开了困扰人们数千年的疟疾的病因之谜。镜检疟原虫方法简述 目前用于疟疾诊断的实验室检测包括病原学检查、免疫学检测和分子生物学检测三类。镜检疟原虫由于具有操作简便、敏感、价廉和可鉴别虫种

3、等优点，广泛用于疟疾的病原学诊断已愈近一个世纪，仍是目前最常用的方法，也是我国疟疾诊断标准确定的实验室检查方法（WS259-2006）。镜检目的与意义镜检目的与意义n n疟疾诊断标准中把疟疾病例分为疑似病例、临床病例、确诊病例和带虫者，前两者依据流行病学史和临床表现即可做出诊断，而后两者需通过发现病原体方能做出诊断。n n通过对发热病人血检达到确诊疟疾病例。及时发现传染源和明确感染的疟原虫种类，以能针对虫种选择正确的治疗方案。血片镜检 血片制作用于检查疟原虫的血涂片有两种：用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈薄膜状，称一种是将血液涂呈薄膜状，称薄血膜。一种是血液涂成圆盘，称一种是血液

4、涂成圆盘，称厚血膜。薄血膜上的血细胞要求平辅在玻片上薄血膜上的血细胞要求平辅在玻片上面。面。血膜的制作（取血时间）血膜的制作（取血时间）n n 取取取取血血血血时时时时机机机机 现现现现症症症症病病病病人人人人一一一一般般般般可可可可随随随随时时时时取取取取血血血血，疟疟疟疟疾疾疾疾普普普普查查查查 时可不考虑取血时机。时可不考虑取血时机。时可不考虑取血时机。时可不考虑取血时机。n n 在在在在诊诊诊诊断断断断或或或或需需需需要要要要某某某某期期期期疟疟疟疟原原原原虫虫虫虫作作作作标标标标本本本本时时时时，则则则则应应应应掌掌掌掌握握握握适适适适宜宜宜宜的的的的取取取取血血血血时时时时机机机机

5、。间间间间日日日日疟疟疟疟在在在在寒寒寒寒热热热热发发发发作作作作时时时时，外外外外周周周周血血血血液液液液中中中中主主主主要要要要可可可可见见见见环环环环状状状状体体体体期期期期；发发发发作作作作后后后后数数数数小小小小时时时时，环环环环状状状状体体体体发发发发育育育育到到到到滋滋滋滋养养养养体体体体期期期期，疟疟疟疟色色色色素素素素形形形形成成成成，形形形形态态态态较较较较易易易易辩辩辩辩认认认认，为为为为诊诊诊诊断断断断的的的的有有有有利利利利时时时时机机机机；36483648小小小小时时时时，可可可可检检检检出出出出裂裂裂裂殖殖殖殖体体体体；发发发发作作作作一一一一、二二二二次次次次后

6、后后后，配配配配子子子子体体体体出出出出现现现现较较较较多多多多。恶恶恶恶性性性性疟疟疟疟较较较较理理理理想想想想的的的的取取取取血血血血时时时时间间间间是是是是在在在在发发发发作作作作后后后后至至至至2020小小小小时时时时内取血，初发患者退热后常查不到原虫。内取血，初发患者退热后常查不到原虫。内取血，初发患者退热后常查不到原虫。内取血，初发患者退热后常查不到原虫。血膜的制作（取血操作）血膜的制作（取血操作）取血方法取血方法 采血部位一般人为耳垂，指头，采血部位一般人为耳垂，指头，通常在耳垂取血（现场取血建议用大头针通常在耳垂取血（现场取血建议用大头针采血，一人一针，避免血传疾病）。先用采血

7、，一人一针，避免血传疾病）。先用75%酒精棉球消毒取血部位（冬季用手捻酒精棉球消毒取血部位（冬季用手捻动耳垂使其充血后再行消毒），待酒精干动耳垂使其充血后再行消毒），待酒精干后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方，右后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方，右手持消毒针迅速刺入耳垂下端手持消毒针迅速刺入耳垂下端12毫米，毫米，不宜过深或过浅。然后用右手中指轻轻向不宜过深或过浅。然后用右手中指轻轻向挤压出血。挤压出血。血膜的制作（取血操作）血膜的制作（取血操作）取血量及涂片法（涂片操作）取血量及涂片法（涂片操作）薄薄薄薄血血血血膜膜膜膜 取取取取洁洁洁洁净净净净的的的的载载载载玻玻玻玻片片片片2 2张张张张，

8、1 1张张张张平平平平置置置置在在在在桌桌桌桌上上上上，以以以以左左左左手手手手拇拇拇拇指指指指，食食食食指指指指夹夹夹夹持持持持载载载载玻玻玻玻片片片片两两两两端端端端（手手手手指指指指切切切切勿勿勿勿接接接接触触触触玻玻玻玻片片片片表表表表面面面面），用用用用另另另另一一一一张张张张边边边边缘缘缘缘平平平平滑滑滑滑（最最最最好好好好为为为为磨磨磨磨口口口口边边边边缘缘缘缘）的的的的载载载载玻玻玻玻片片片片做做做做推推推推片片片片，用用用用推推推推片片片片一一一一端端端端边边边边缘缘缘缘的的的的中中中中点点点点从从从从取取取取血血血血部部部部分分分分取取取取约约约约1 1微微微微升升升升的的

9、的的血血血血量量量量（相相相相当当当当于于于于1/41/4火火火火柴柴柴柴头头头头大大大大小小小小），使使使使血血血血滴滴滴滴与与与与平平平平置置置置的的的的载载载载玻玻玻玻片片片片接接接接触触触触，并并并并形形形形成成成成25302530度度度度夹夹夹夹角角角角，待待待待血血血血液液液液向向向向两两两两侧侧侧侧扩扩扩扩展展展展约约约约2 2厘厘厘厘米米米米长长长长度度度度时时时时，均均均均匀匀匀匀而而而而迅迅迅迅速速速速地地地地轻轻轻轻轻轻轻轻向向向向左左左左推推推推出出出出（约约约约2.52.5厘米长），整个血膜成舌形。厘米长），整个血膜成舌形。厘米长），整个血膜成舌形。厘米长），整个血膜

10、成舌形。正确的推片姿势正确的推片姿势取血量及涂片法（涂片操作）取血量及涂片法（涂片操作）厚血膜厚血膜厚血膜厚血膜 用推用推用推用推 片的一角，片的一角，片的一角，片的一角，从取血部位刮取约从取血部位刮取约从取血部位刮取约从取血部位刮取约4 4微升微升微升微升血量（相当于火柴头小）血量（相当于火柴头小）血量（相当于火柴头小）血量（相当于火柴头小），使血滴与平置的载玻，使血滴与平置的载玻，使血滴与平置的载玻，使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外一片接触，再由里向外一片接触，再由里向外一片接触，再由里向外一个方向旋转，转个方向旋转，转个方向旋转，转个方向旋转，转2424圈，圈，圈，圈，涂成直径涂成直

11、径涂成直径涂成直径0.810.81厘米大厘米大厘米大厘米大小圆形厚血膜，血膜厚小圆形厚血膜，血膜厚小圆形厚血膜，血膜厚小圆形厚血膜，血膜厚薄均匀，过厚易于脱落，薄均匀，过厚易于脱落，薄均匀，过厚易于脱落，薄均匀，过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要过薄达不到检出率的要过薄达不到检出率的要过薄达不到检出率的要求。求。求。求。涂制厚、薄血膜的位置涂制厚、薄血膜的位置涂制厚、薄血膜的位置涂制厚、薄血膜的位置 通通通通常常常常是是是是将将将将厚厚厚厚、薄薄薄薄血血血血膜膜膜膜涂涂涂涂在在在在一一一一张张张张载载载载片片片片上上上上。方方方方法法法法是是是是将将将将载载载载片片片片分分分分为为为为6 6等

12、等等等分分分分，第第第第1 1、2 2格格格格备备备备贴贴贴贴标标标标签签签签及及及及编编编编号号号号用用用用；厚厚厚厚血血血血膜膜膜膜涂涂涂涂在在在在第第第第3 3格格格格中中中中央央央央，薄薄薄薄血血血血膜膜膜膜涂涂涂涂在在在在第第第第4 4格格格格前前前前缘缘缘缘至至至至第第第第6 6格格格格中中中中部部部部。作作作作为为为为标标标标本本本本的的的的血血血血片片片片每每每每张张张张玻玻玻玻片片片片涂涂涂涂厚厚厚厚、薄薄薄薄血血血血膜膜膜膜各各各各1 1个个个个；门门门门诊诊诊诊和和和和发发发发热热热热病病病病人人人人血血血血片片片片每每每每片片片片1 1人人人人，涂涂涂涂2 2个个个个厚

13、厚厚厚血血血血膜膜膜膜1 1个个个个薄薄薄薄血血血血膜膜膜膜，以以以以防防防防血血血血膜膜膜膜脱脱脱脱落落落落而影响检查。而影响检查。而影响检查。而影响检查。标准的疟疾厚薄血膜片位置标准的疟疾厚薄血膜片位置血片的染色 一、吉氏染液母液一、吉氏染液母液配制配制 取吉氏粉取吉氏粉取吉氏粉取吉氏粉0.50.5克置于研钵中，加少量甘油充分研磨，克置于研钵中，加少量甘油充分研磨，克置于研钵中，加少量甘油充分研磨，克置于研钵中，加少量甘油充分研磨，边加边磨，至边加边磨，至边加边磨，至边加边磨，至2525毫升加完为止，倒入毫升加完为止，倒入毫升加完为止，倒入毫升加完为止，倒入6060或或或或100100毫毫

14、毫毫升带有玻塞的有色玻瓶中。在研钵中加少量无水升带有玻塞的有色玻瓶中。在研钵中加少量无水升带有玻塞的有色玻瓶中。在研钵中加少量无水升带有玻塞的有色玻瓶中。在研钵中加少量无水甲醇，洗去甘油浓液混入瓶内，至甲醇，洗去甘油浓液混入瓶内，至甲醇，洗去甘油浓液混入瓶内，至甲醇，洗去甘油浓液混入瓶内，至2525毫升甲醇洗毫升甲醇洗毫升甲醇洗毫升甲醇洗净钵中甘油染液为止，塞紧瓶塞，充分摇匀，置净钵中甘油染液为止，塞紧瓶塞，充分摇匀，置净钵中甘油染液为止，塞紧瓶塞，充分摇匀，置净钵中甘油染液为止，塞紧瓶塞，充分摇匀，置于于于于55605560水浴中水浴中水浴中水浴中2 2小时，或室温内小时，或室温内小时，或室

15、温内小时，或室温内3535天，每天，每天，每天，每天用力摇动天用力摇动天用力摇动天用力摇动5 5分钟，即成原液。吉氏染液是目前较分钟，即成原液。吉氏染液是目前较分钟，即成原液。吉氏染液是目前较分钟，即成原液。吉氏染液是目前较优良的血膜染剂，即使在炎热天气中，亦可经久优良的血膜染剂，即使在炎热天气中，亦可经久优良的血膜染剂，即使在炎热天气中，亦可经久优良的血膜染剂，即使在炎热天气中，亦可经久不变。不变。不变。不变。血片的染色二、二、瑞式染液的配制瑞式染液的配制n n将将将将瑞瑞瑞瑞氏氏氏氏染染染染剂剂剂剂粉粉粉粉1g1g置置置置于于于于研研研研钵钵钵钵内内内内，加加加加入入入入15ml15ml甘

16、甘甘甘油油油油充充充充分分分分研研研研磨磨磨磨后后后后，倒倒倒倒入入入入有有有有塞塞塞塞玻玻玻玻璃璃璃璃瓶瓶瓶瓶中中中中，再再再再用用用用500ml500ml甲甲甲甲醇醇醇醇洗洗洗洗出出出出研研研研钵钵钵钵中中中中的的的的甘甘甘甘油油油油溶溶溶溶液液液液，倒倒倒倒入入入入瓶瓶瓶瓶中中中中，摇摇摇摇匀匀匀匀后后后后，置置置置室温下，每天摇动室温下，每天摇动室温下，每天摇动室温下，每天摇动5 5分钟，分钟，分钟，分钟，3 3天后即可使用。天后即可使用。天后即可使用。天后即可使用。n n此此此此方方方方法法法法染染染染色色色色的的的的时时时时间间间间短短短短，但但但但染染染染色色色色效效效效果果果果

17、不不不不如如如如吉吉吉吉氏氏氏氏染染染染液液液液效效效效果果果果稳稳稳稳定定定定，又又又又不不不不能能能能大大大大量量量量血血血血片片片片染染染染色色色色，可可可可用用用用于于于于门门门门诊诊诊诊应应应应急血片用。急血片用。急血片用。急血片用。血片的染色血片的染色 吉氏染液血片染色方法吉氏染液血片染色方法吉氏染液血片染色方法吉氏染液血片染色方法 （推荐使用此方法）（推荐使用此方法）（推荐使用此方法）（推荐使用此方法）n n先用甲醇或无水酒精固定薄血膜，待干后进行染色。在先用甲醇或无水酒精固定薄血膜，待干后进行染色。在先用甲醇或无水酒精固定薄血膜，待干后进行染色。在先用甲醇或无水酒精固定薄血膜，

18、待干后进行染色。在固定薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红蛋白可用滴管滴固定薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红蛋白可用滴管滴固定薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红蛋白可用滴管滴固定薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红蛋白可用滴管滴水于厚血膜上，待血膜呈灰白色时，将水倾去，晾干后水于厚血膜上，待血膜呈灰白色时，将水倾去，晾干后水于厚血膜上，待血膜呈灰白色时，将水倾去，晾干后水于厚血膜上，待血膜呈灰白色时，将水倾去，晾干后进行染色。进行染色。进行染色。进行染色。n n 成批血片染色：将已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒成批血片染色：将已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒成批血片染色：将已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒成批血

19、片染色：将已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入入入入2%2%吉氏染液稀释液（吉氏染液稀释液（吉氏染液稀释液（吉氏染液稀释液（2 2毫升原液加中性蒸馏水毫升原液加中性蒸馏水毫升原液加中性蒸馏水毫升原液加中性蒸馏水9898毫毫毫毫升稀释均匀即成），同时对厚薄血膜染色升稀释均匀即成），同时对厚薄血膜染色升稀释均匀即成），同时对厚薄血膜染色升稀释均匀即成），同时对厚薄血膜染色3030分钟（如染分钟（如染分钟（如染分钟（如染液不合标准时，得酌情增减染色时间），然后用清水轻液不合标准时，得酌情增减染色时间），然后用清水轻液不合标准时，得酌情增减染色时间），然后用清水轻液不合标准时，得酌情增减染色时间），然后

20、用清水轻轻将染液冲去，再用清水轻轻冲洗一次，干净后将血片轻将染液冲去，再用清水轻轻冲洗一次，干净后将血片轻将染液冲去，再用清水轻轻冲洗一次，干净后将血片轻将染液冲去，再用清水轻轻冲洗一次，干净后将血片标本（血膜面朝下）插于晾干板上，待干镜检。标本（血膜面朝下）插于晾干板上，待干镜检。标本（血膜面朝下）插于晾干板上，待干镜检。标本（血膜面朝下）插于晾干板上，待干镜检。血片的染色 单张血片染色：薄血膜经固定干燥后，用单张血片染色：薄血膜经固定干燥后，用2%2%吉氏染液稀释液吉氏染液稀释液1212毫升，滴入血片标本毫升，滴入血片标本上染色上染色3030分钟左右；或用中性蒸馏水分钟左右；或用中性蒸馏水

21、1 1毫升，毫升，加吉氏母液加吉氏母液1212滴，混合均匀后滴入血片标滴，混合均匀后滴入血片标本上，染色本上，染色10201020分钟，然后用清水轻轻将分钟，然后用清水轻轻将片上的染液冲洗干净，（切勿先倒掉染液片上的染液冲洗干净，（切勿先倒掉染液再用水冲洗）晾干镜检。再用水冲洗）晾干镜检。瑞氏染液的染色方法：瑞氏染液的染色方法：先先用用蜡蜡笔笔在在厚厚、薄薄血血膜膜间间划划一一界界限限，滴滴几几滴滴蒸蒸馏馏水水在在厚厚血血膜膜上上溶溶血血。溶溶血血后后倾倾去去水水滴滴。在在薄薄血血膜膜上上加加瑞瑞氏氏染染液液5 58 8滴滴，染染色色1 12 2分分钟钟。然然后后再再加加5 58 8滴滴蒸蒸馏

22、馏水水于于薄薄血血膜膜上上，用用吸吸管管将将染染液液与与蒸蒸馏馏水水混混合合均均匀匀后后，把把染染液液引引到到厚厚血血膜膜上上，使使厚厚血血膜膜再再染染色色1010分钟。用清水轻轻冲去染液，晾干。分钟。用清水轻轻冲去染液，晾干。血片的镜检血片的镜检n n在学习镜检疟原虫之前，必须先对正常厚薄血膜在学习镜检疟原虫之前，必须先对正常厚薄血膜在学习镜检疟原虫之前，必须先对正常厚薄血膜在学习镜检疟原虫之前，必须先对正常厚薄血膜中各种血细胞的形态、内部结构和染色性质加以中各种血细胞的形态、内部结构和染色性质加以中各种血细胞的形态、内部结构和染色性质加以中各种血细胞的形态、内部结构和染色性质加以识别。识别

23、。识别。识别。n n学习镜检疟原虫，首先要学看薄血膜，在基本上学习镜检疟原虫，首先要学看薄血膜，在基本上学习镜检疟原虫，首先要学看薄血膜，在基本上学习镜检疟原虫，首先要学看薄血膜，在基本上掌握薄血膜中疟原虫形态后，才学习镜检厚血膜。掌握薄血膜中疟原虫形态后，才学习镜检厚血膜。掌握薄血膜中疟原虫形态后，才学习镜检厚血膜。掌握薄血膜中疟原虫形态后，才学习镜检厚血膜。n n镜检疟原虫一般只查厚血膜，薄血膜仅作为原虫镜检疟原虫一般只查厚血膜，薄血膜仅作为原虫镜检疟原虫一般只查厚血膜，薄血膜仅作为原虫镜检疟原虫一般只查厚血膜，薄血膜仅作为原虫分类时参考和血片编号之用。分类时参考和血片编号之用。分类时参考

24、和血片编号之用。分类时参考和血片编号之用。n n镜检疟原虫必须用油镜头配合镜检疟原虫必须用油镜头配合镜检疟原虫必须用油镜头配合镜检疟原虫必须用油镜头配合5X5X低倍目镜镜检，低倍目镜镜检，低倍目镜镜检，低倍目镜镜检，当发现疑难问题时可调换当发现疑难问题时可调换当发现疑难问题时可调换当发现疑难问题时可调换10X10X目镜进行观察。目镜进行观察。目镜进行观察。目镜进行观察。n n检查时应从厚血膜的上缘开始，使血膜从上而下，检查时应从厚血膜的上缘开始，使血膜从上而下，检查时应从厚血膜的上缘开始，使血膜从上而下，检查时应从厚血膜的上缘开始，使血膜从上而下，自左至右，由右至左，一行接一行，一个视野稍自左

25、至右，由右至左，一行接一行，一个视野稍自左至右，由右至左，一行接一行，一个视野稍自左至右，由右至左，一行接一行，一个视野稍叠一个视野顺序地查完整个血膜。叠一个视野顺序地查完整个血膜。叠一个视野顺序地查完整个血膜。叠一个视野顺序地查完整个血膜。疟原虫血片检查结果确定疟原虫血片检查结果确定n检查全部厚血膜未查见疟原虫者判为检查全部厚血膜未查见疟原虫者判为阴性。阴性。n显微镜下查见疟原虫，根据疟原虫形显微镜下查见疟原虫，根据疟原虫形态确定恶性疟、间日疟、三日疟、卵态确定恶性疟、间日疟、三日疟、卵形疟或混合感染。形疟或混合感染。制作制作血膜血膜的注意事项的注意事项n n1.玻片清洗时，避免玻片碰撞、磨

26、损。制作血膜的载玻片必须完全清洁而毫无油渍或污垢。制片时，手指只能持载片的边缘，不能接触玻片表面，以免油污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落。作为推片的玻片边缘一定要平滑，才能使推出的血膜均匀一致。制作制作血膜血膜的注意事项的注意事项n n2.刚涂制的血膜要平放在标本盒内，厚血刚涂制的血膜要平放在标本盒内，厚血膜未干前勿使标本盒倾斜，以免血膜倾向膜未干前勿使标本盒倾斜，以免血膜倾向一侧，造成血膜厚薄不均，厚处不溶血和一侧，造成血膜厚薄不均，厚处不溶血和着色而影响检查结果；晾干血膜时应注意着色而影响检查结果；晾干血膜时应注意防尘、防止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸血膜，防尘、防止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸血膜，干

27、后应及时装入标本盒并盖严，新的木制干后应及时装入标本盒并盖严，新的木制标本盒需敞开放置一段时间，让木醇挥发标本盒需敞开放置一段时间，让木醇挥发后才能使用，以免厚血膜红蛋白被其固定，后才能使用，以免厚血膜红蛋白被其固定，不能溶血或染色效果不佳。不能溶血或染色效果不佳。制作制作血膜血膜的注意事项的注意事项n n3.血膜让其自然干燥，切忌用太阳晒或火血膜让其自然干燥，切忌用太阳晒或火烤，干透后才能用甲醇固定薄血膜。夏天烤，干透后才能用甲醇固定薄血膜。夏天标本尽可能标本尽可能2448小时内固定染色；冬天小时内固定染色；冬天也不能超过也不能超过72小时。放置时间越久，厚血小时。放置时间越久，厚血膜越不易

28、脱血，染色效果也差。若不能及膜越不易脱血，染色效果也差。若不能及时染色，薄血膜宜先用甲醇固定（时染色，薄血膜宜先用甲醇固定（13分分钟）然后用过滤清水对厚血膜溶血，晾干钟）然后用过滤清水对厚血膜溶血，晾干固定后装入盒内盖严，待以后染色。固定后装入盒内盖严，待以后染色。影响染色效果的因素影响染色效果的因素n n血血片片染染色色好好坏坏除除了了与与玻玻片片是是否否清清洁洁，血血片片制制作作质质量量好好坏坏等等有有关关外外，还还受受到到以以下下几几个个因素的影响：因素的影响：n n（1）染染料料溶溶剂剂的的质质量量 染染料料、甲甲醇醇和和甘甘油油如如果果不不纯纯，常常使使配配制制的的染染液液偏偏酸酸

29、或或偏偏碱碱而而影影响响染染色色效效果果。因因此此必必须须用用分分析析纯纯的的甲甲醇醇和和中中性性甘甘油油，而而且且在在配配制制时时所所用用的的器器具具必必须干净而无水份。须干净而无水份。影响染色效果的因素影响染色效果的因素n n（2）染液的新旧）染液的新旧 新配制的染液因色素尚新配制的染液因色素尚未充分溶解，染色力较弱且常呈现偏碱性。未充分溶解，染色力较弱且常呈现偏碱性。染液存放时间越久，染色力越强。通常在染液存放时间越久，染色力越强。通常在染液配制染液配制12周后才使用，盛装染液的瓶周后才使用，盛装染液的瓶子应加塞盖密。以防吸潮而影响染液质量。子应加塞盖密。以防吸潮而影响染液质量。影响染色

30、效果的因素影响染色效果的因素n n（3）染液稀释后使用时间）染液稀释后使用时间 吉氏和瑞氏染吉氏和瑞氏染液的主要成份是美蓝、伊红和由美蓝氧化液的主要成份是美蓝、伊红和由美蓝氧化产生的天青，三者能在酒精溶液中溶解，产生的天青，三者能在酒精溶液中溶解，但在水溶液中伊红遇到美蓝和天青即产生但在水溶液中伊红遇到美蓝和天青即产生沉淀。因此，必须在稀释染液当时使用，沉淀。因此，必须在稀释染液当时使用，一般在半小时内一般在半小时内染色力最强。染色力最强。影响染色效果的因素影响染色效果的因素n n（4）染液的稀释浓度）染液的稀释浓度 染液的浓度高其着染液的浓度高其着色就快而深，从而疟原虫寄生红细胞的薛色就快而

31、深，从而疟原虫寄生红细胞的薛氏点粗大显著，但颜色常偏碱；染液浓度氏点粗大显著，但颜色常偏碱；染液浓度过低则染色时间久，颜色偏酸，薛氏点不过低则染色时间久，颜色偏酸，薛氏点不明显或消失。明显或消失。n n（5）染色时间）染色时间 染色时间长染色效果好，染色时间长染色效果好，反之较差。室温高则着色快，染色时间可反之较差。室温高则着色快，染色时间可略缩短，气温低可适当延长。因此染色时略缩短，气温低可适当延长。因此染色时间应根据染液的质量、新旧、稀释浓度和间应根据染液的质量、新旧、稀释浓度和气温而适当增减。气温而适当增减。影响染色效果的因素影响染色效果的因素n n（6）染色用水）染色用水 染液的稀释用

32、水和染色后染液的稀释用水和染色后冲洗用水应选择冲洗用水应选择Ph7.07.2清洁水，通常清洁水，通常使用的新鲜的蒸馏水或过滤的冷开水，以使用的新鲜的蒸馏水或过滤的冷开水，以及自来水、井水、河水、泉水和雨水等。及自来水、井水、河水、泉水和雨水等。如果偏酸或偏碱，可用缓冲蒸馏水调整。如果偏酸或偏碱，可用缓冲蒸馏水调整。染色后发现血膜颜色偏蓝（偏碱）或偏红染色后发现血膜颜色偏蓝（偏碱）或偏红（偏酸）时，可用与之相反的酸、碱度水（偏酸）时，可用与之相反的酸、碱度水冲洗血片予以纠正。冲洗血片予以纠正。影响染色效果的因素影响染色效果的因素n n（7）染色后不要直接将染液倒掉，应沿玻）染色后不要直接将染液倒

33、掉，应沿玻片或染色缸边缘加水使染液表面一层溢出，片或染色缸边缘加水使染液表面一层溢出，并轻轻冲洗，以免染液色素颗粒沾污血膜。并轻轻冲洗，以免染液色素颗粒沾污血膜。疟原虫形态特征和鉴别要点疟原虫形态特征和鉴别要点n n在在RBCRBC内发现疟原虫是确诊疟疾和鉴别虫种内发现疟原虫是确诊疟疾和鉴别虫种的重要依据的重要依据n n疟原虫基本构造相同疟原虫基本构造相同-细胞膜、质、核细胞膜、质、核n n瑞氏或姬氏染色：核染成紫红色，胞质呈瑞氏或姬氏染色：核染成紫红色，胞质呈兰色，疟原虫消化血红蛋白产物兰色，疟原虫消化血红蛋白产物-疟色素呈疟色素呈棕黄色棕黄色n n疟原虫在疟原虫在RBCRBC内各期形态各不

34、相同内各期形态各不相同疟原虫在RBC内的形态（三期六种形态）n n滋养体期：大、小滋养体滋养体期：大、小滋养体n n裂殖体期：成熟、未成熟裂殖体裂殖体期：成熟、未成熟裂殖体n n配子体期：雌、雄配子体配子体期：雌、雄配子体 人体疟原虫的基本结构 疟原虫基本构造为疟原虫基本构造为 细胞质（胞浆）、核和细胞质（胞浆）、核和疟色素。疟色素。1.1.细胞浆细胞浆 被染成蔚蓝色或深蓝色，随着虫体发育长大，被染成蔚蓝色或深蓝色，随着虫体发育长大，细胞浆逐渐增多。间日疟原虫发育到大滋养细胞浆逐渐增多。间日疟原虫发育到大滋养体阶段，胞浆呈阿米巴样活动，胞浆内有空体阶段，胞浆呈阿米巴样活动，胞浆内有空泡。泡。2

35、.2.2.2.核核核核 即细胞核或染色质粒。在正常情况下核呈鲜红即细胞核或染色质粒。在正常情况下核呈鲜红即细胞核或染色质粒。在正常情况下核呈鲜红即细胞核或染色质粒。在正常情况下核呈鲜红色，呈圆形或不规则的颗粒状。核的结构致密，只色，呈圆形或不规则的颗粒状。核的结构致密，只色，呈圆形或不规则的颗粒状。核的结构致密，只色，呈圆形或不规则的颗粒状。核的结构致密，只有在个别发育阶段较为疏松，例如间日疟原虫雄配有在个别发育阶段较为疏松，例如间日疟原虫雄配有在个别发育阶段较为疏松，例如间日疟原虫雄配有在个别发育阶段较为疏松，例如间日疟原虫雄配子体的核。有时因胞浆厚密或染色深蓝，使核呈暗子体的核。有时因胞浆

36、厚密或染色深蓝，使核呈暗子体的核。有时因胞浆厚密或染色深蓝，使核呈暗子体的核。有时因胞浆厚密或染色深蓝，使核呈暗红或紫红色。红或紫红色。红或紫红色。红或紫红色。3.3.3.3.疟色素疟色素疟色素疟色素 不着色，颜色和颗粒的形状，因疟原虫种类而不着色，颜色和颗粒的形状，因疟原虫种类而不着色，颜色和颗粒的形状，因疟原虫种类而不着色，颜色和颗粒的形状，因疟原虫种类而异。间日疟原虫的色素颗粒呈短棒状，黄褐色；恶异。间日疟原虫的色素颗粒呈短棒状，黄褐色；恶异。间日疟原虫的色素颗粒呈短棒状，黄褐色；恶异。间日疟原虫的色素颗粒呈短棒状，黄褐色；恶性疟原虫的色素颗粒呈细砂状，黑褐色；三日疟原性疟原虫的色素颗粒

37、呈细砂状，黑褐色；三日疟原性疟原虫的色素颗粒呈细砂状，黑褐色；三日疟原性疟原虫的色素颗粒呈细砂状，黑褐色；三日疟原虫的色素呈砂粒状，深褐色；卵形疟原虫的色素与虫的色素呈砂粒状，深褐色；卵形疟原虫的色素与虫的色素呈砂粒状，深褐色；卵形疟原虫的色素与虫的色素呈砂粒状，深褐色；卵形疟原虫的色素与间日疟原虫相似。疟色素在虫体内散在分布或聚集间日疟原虫相似。疟色素在虫体内散在分布或聚集间日疟原虫相似。疟色素在虫体内散在分布或聚集间日疟原虫相似。疟色素在虫体内散在分布或聚集成团块。成团块。成团块。成团块。4.4.4.4.被寄生的红细胞被寄生的红细胞被寄生的红细胞被寄生的红细胞 被被被被间间间间日日日日疟疟

38、疟疟原原原原虫虫虫虫寄寄寄寄生生生生的的的的红红红红细细细细胞胞胞胞胀胀胀胀大大大大、颜颜颜颜色色色色变变变变淡淡淡淡。疟原虫发育至阿米巴样体，红细胞出现薛氏点。疟原虫发育至阿米巴样体，红细胞出现薛氏点。疟原虫发育至阿米巴样体，红细胞出现薛氏点。疟原虫发育至阿米巴样体，红细胞出现薛氏点。被被被被恶恶恶恶性性性性疟疟疟疟原原原原虫虫虫虫寄寄寄寄生生生生的的的的红红红红细细细细胞胞胞胞大大大大小小小小正正正正常常常常或或或或稍稍稍稍微微微微缩小，红细胞上有时见到茂氏点。缩小，红细胞上有时见到茂氏点。缩小，红细胞上有时见到茂氏点。缩小，红细胞上有时见到茂氏点。被被被被三三三三日日日日疟疟疟疟原原原原

39、虫虫虫虫寄寄寄寄生生生生的的的的红红红红细细细细胞胞胞胞大大大大小小小小正正正正常常常常，红红红红细细细细胞上可见到齐氏点。胞上可见到齐氏点。胞上可见到齐氏点。胞上可见到齐氏点。被被被被卵卵卵卵形形形形疟疟疟疟原原原原虫虫虫虫寄寄寄寄生生生生的的的的红红红红细细细细胞胞胞胞稍稍稍稍胀胀胀胀大大大大或或或或不不不不胀胀胀胀大大大大，呈呈呈呈卵卵卵卵形形形形或或或或一一一一端端端端呈呈呈呈伞伞伞伞矢矢矢矢状状状状，薛薛薛薛氏氏氏氏点点点点出出出出现现现现较较较较早早早早，于于于于环状体阶段便可查见。环状体阶段便可查见。环状体阶段便可查见。环状体阶段便可查见。疟原虫薄血膜形态鉴别疟原虫薄血膜形态鉴别

40、（吉氏染色）（吉氏染色）间日疟小滋养体间日疟小滋养体-环状体环状体 较大，较大，约占寄生红细胞的约占寄生红细胞的1/31/3，胞浆较薄，一个核，胞浆较薄，一个核，很少见到一个红细胞寄生很少见到一个红细胞寄生2 2个环状体和一个环状体有个环状体和一个环状体有2 2个核。个核。间日疟滋养体间日疟滋养体-大滋养体大滋养体n n经经经经8 8 8 810101010小时，虫体增大，胞质增多，伸出伪足，阿米巴样，小时，虫体增大，胞质增多，伸出伪足，阿米巴样，小时，虫体增大，胞质增多，伸出伪足，阿米巴样，小时，虫体增大，胞质增多，伸出伪足，阿米巴样，常含空泡。常含空泡。常含空泡。常含空泡。n n出现黄褐色

41、的疟色素，细小、杆状，散在分布。出现黄褐色的疟色素，细小、杆状，散在分布。出现黄褐色的疟色素，细小、杆状，散在分布。出现黄褐色的疟色素，细小、杆状，散在分布。n n红细胞胀大，变形，颜色变淡，并出现数量较多，淡红色的红细胞胀大，变形，颜色变淡，并出现数量较多，淡红色的红细胞胀大，变形，颜色变淡，并出现数量较多，淡红色的红细胞胀大，变形，颜色变淡，并出现数量较多，淡红色的小点，称薛氏小点小点，称薛氏小点小点，称薛氏小点小点，称薛氏小点间日疟间日疟-裂殖体裂殖体未成熟裂殖体未成熟裂殖体n n经经经经40404040小时晚期滋养体小时晚期滋养体小时晚期滋养体小时晚期滋养体发育成熟，虫体变圆，发育成熟

42、，虫体变圆，发育成熟，虫体变圆，发育成熟，虫体变圆，空泡消失，核分成空泡消失，核分成空泡消失，核分成空泡消失，核分成2 2 2 2个以上。个以上。个以上。个以上。n n核开始分裂又称裂殖核开始分裂又称裂殖核开始分裂又称裂殖核开始分裂又称裂殖体前期体前期体前期体前期n n色素聚集成团块色素聚集成团块色素聚集成团块色素聚集成团块 间日疟间日疟成熟裂殖体成熟裂殖体n n成熟裂殖子约有成熟裂殖子约有12122424个，通常个，通常1616个，排个，排列不规则。列不规则。n n受染受染RBC RBC 胀大、颜色胀大、颜色苍白、虫体几乎充满苍白、虫体几乎充满红细胞红细胞n n疟色素集中成堆，常疟色素集中成

43、堆，常聚集一侧。聚集一侧。配子体配子体 疟原虫经过几次红细胞内裂体增殖，部分疟原虫经过几次红细胞内裂体增殖，部分裂殖子在红细胞内不再进行裂体增殖，而裂殖子在红细胞内不再进行裂体增殖，而发育为雌性配子体或雄性配子体，间日疟发育为雌性配子体或雄性配子体，间日疟原虫配子体呈圆形或椭圆形，疟色素均匀原虫配子体呈圆形或椭圆形，疟色素均匀分布于虫体内，核分布于虫体内，核1 1个。个。间日疟原虫雌配子体间日疟原虫雌配子体间日疟原虫雌配子体间日疟原虫雌配子体n n虫体较大，占满胀大的红细胞虫体较大，占满胀大的红细胞虫体较大，占满胀大的红细胞虫体较大，占满胀大的红细胞n n胞质致密，色深蓝胞质致密，色深蓝胞质致

44、密，色深蓝胞质致密，色深蓝n n核小致密，深红色，多位于虫核小致密，深红色，多位于虫核小致密，深红色，多位于虫核小致密，深红色，多位于虫体一侧体一侧体一侧体一侧n n疟色素黄褐色，均匀散在疟色素黄褐色，均匀散在疟色素黄褐色，均匀散在疟色素黄褐色，均匀散在间日疟原虫雄配子体间日疟原虫雄配子体n n虫体较小，圆形，占满胀大的红虫体较小，圆形，占满胀大的红虫体较小，圆形，占满胀大的红虫体较小，圆形，占满胀大的红细胞细胞细胞细胞n n胞质浅蓝胞质浅蓝胞质浅蓝胞质浅蓝n n核大疏松，淡红色，多位于虫体核大疏松，淡红色，多位于虫体核大疏松，淡红色，多位于虫体核大疏松，淡红色，多位于虫体的中央。的中央。的中

45、央。的中央。n n疟色素黄褐色，均匀散在疟色素黄褐色，均匀散在疟色素黄褐色，均匀散在疟色素黄褐色，均匀散在 恶性疟原虫恶性疟原虫-环状体环状体n n环纤细环纤细环纤细环纤细,约为约为约为约为RBCRBCRBCRBC直径的直径的直径的直径的1/61/61/61/6，RBCRBCRBCRBC不胀大，颜色不胀大，颜色不胀大，颜色不胀大，颜色稍紫或正常稍紫或正常稍紫或正常稍紫或正常n n核核核核1 1 1 1个或个或个或个或2 2 2 2个，红细胞常含个，红细胞常含个，红细胞常含个，红细胞常含2 2 2 2个以上原虫个以上原虫个以上原虫个以上原虫n n虫体常位于红细胞的边缘虫体常位于红细胞的边缘虫体常

46、位于红细胞的边缘虫体常位于红细胞的边缘 ，呈，呈，呈，呈“鸟飞状鸟飞状鸟飞状鸟飞状”n n不带色素不带色素不带色素不带色素恶性疟原虫恶性疟原虫大滋养体大滋养体 n n一般不出现在外周血一般不出现在外周血一般不出现在外周血一般不出现在外周血n n虫体小结实，圆形，虫体小结实，圆形，虫体小结实，圆形，虫体小结实，圆形，空泡不显著，不活动空泡不显著，不活动空泡不显著，不活动空泡不显著，不活动n n疟色素集中一团，黑疟色素集中一团，黑疟色素集中一团，黑疟色素集中一团，黑褐色褐色褐色褐色n n原虫此时开始集中在原虫此时开始集中在原虫此时开始集中在原虫此时开始集中在内脏毛细血管内脏毛细血管内脏毛细血管内脏

47、毛细血管恶性疟成熟裂殖体恶性疟成熟裂殖体 n n裂殖子裂殖子裂殖子裂殖子8 8 8 826262626个，通常个，通常个，通常个，通常8 8 8 818181818个，排列不规则个，排列不规则个，排列不规则个，排列不规则n n疟色素集中成一团，黑疟色素集中成一团，黑疟色素集中成一团，黑疟色素集中成一团，黑褐色褐色褐色褐色n n虫体占红细胞体积的虫体占红细胞体积的虫体占红细胞体积的虫体占红细胞体积的2/32/32/32/3至至至至3/4 3/4 3/4 3/4 恶性疟原虫雌配子体恶性疟原虫雌配子体n n新月形，两端较尖新月形，两端较尖n n核核1个，较小，致密，个，较小，致密，深红色，常位于中深

48、红色，常位于中央央n n胞浆深蓝色胞浆深蓝色n n疟色素黑褐色，紧疟色素黑褐色，紧密分布于核周围密分布于核周围恶性疟原虫雄配子体恶性疟原虫雄配子体n n腊肠形，两端钝圆腊肠形，两端钝圆n n胞浆浅蓝或谈红色胞浆浅蓝或谈红色n n核核1 1个，较大，疏松，个，较大，疏松，淡红色，位于中央淡红色，位于中央n n疟色素黑褐色，小杆状，疟色素黑褐色，小杆状，在核周围松散分布在核周围松散分布 恶恶恶恶性性性性疟疟疟疟原原原原虫虫虫虫由由由由于于于于在在在在发发发发作作作作间间间间歇歇歇歇期期期期，绝绝绝绝大大大大部部部部分分分分疟疟疟疟原原原原虫虫虫虫要要要要进进进进入入入入内内内内脏脏脏脏毛毛毛毛细细

49、细细血血血血管管管管发发发发育育育育，周周周周围围围围血血血血液液液液内内内内仅仅仅仅能能能能发发发发现现现现环环环环状状状状体体体体和和和和配配配配子子子子体体体体。因因因因此此此此，恶恶恶恶性性性性疟疟疟疟在在在在发发发发作作作作期期期期为最适宜的查血时间。为最适宜的查血时间。为最适宜的查血时间。为最适宜的查血时间。如如如如在在在在血血血血膜膜膜膜上上上上查查查查见见见见许许许许多多多多这这这这样样样样的的的的小小小小滋滋滋滋养养养养体体体体而而而而无无无无大大大大滋滋滋滋养养养养体体体体，可可可可判判判判定定定定为为为为恶恶恶恶性性性性疟疟疟疟原原原原虫虫虫虫。恶恶恶恶性性性性疟疟疟疟原

50、原原原虫虫虫虫粗粗粗粗大大大大环环环环状状状状体体体体与与与与间间间间日日日日疟疟疟疟原原原原虫虫虫虫的的的的环环环环状状状状体体体体相相相相似似似似，较较较较难难难难区区区区别别别别。此此此此时时时时应应应应依依依依据据据据血血血血膜膜膜膜上上上上有有有有无无无无其其其其他他他他发发发发育育育育阶阶阶阶段段段段的的的的疟疟疟疟原原原原虫虫虫虫来确定。来确定。来确定。来确定。如如如如果果果果血血血血膜膜膜膜上上上上只只只只有有有有少少少少数数数数环环环环状状状状体体体体，其其其其形形形形态态态态又又又又不不不不太太太太典典典典型，则应另外取血检查，不应轻易下结论。型，则应另外取血检查，不应轻易