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1、江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313兽医微生物学讲议七邬向东预防兽医学教研组二O一五年三月一日江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313第六章第六章 病毒总论病毒总论第一节第一节 病毒的结构病毒的结构第二节第二节 病毒的抵抗力病毒的抵抗力第三节第三节 病毒的复制病毒的复制第四节第四节 病毒的分类与命名病毒的分类与命名江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313概述病

2、毒特征病毒特征只含一种核酸；严格的胞内寄生；没有核糖体和转移RNA；不会长大，不经分裂繁殖，而是进行复制；对抗生素和常规药物均不敏感 ；绝大多数不同程度上对干扰素敏感；有些病毒的核酸能整合到宿主细胞的DNA中。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313第一节第一节 病毒的形态与结构病毒的形态与结构一、病毒的大小与形态一、病毒的大小与形态1、病毒的大小、病毒的大小 测量病毒大小的单位是毫微米（nm），即1/1000微米。大型病毒（如牛痘苗病毒）约200300nm；中型病毒（如流感病毒）约100nm；小型病毒（如脊髓灰质炎

3、病毒）仅2030nm。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313一、病毒的大小与形态一、病毒的大小与形态2、病毒的形态：、病毒的形态：一个成熟有感染性的病毒颗粒称“病毒体”（Viron）。绝大多数动物病毒呈球形或近似球形；植物病毒多呈杆状或丝状；噬菌体则多呈蝌蚪形。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313一、病毒的大小与形态一、病毒的大小与形态不同病毒的形态江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 1770709

4、3313 17707093313一、病毒的大小与形态一、病毒的大小与形态在电镜下观察，大致可分五种形态：(1)球形或近似球形：大多数人类和动物病毒为球形，如冠状病毒、疱疹病毒及腺病毒等。(2)杆(丝)形：多见于植物病毒。(3)弹形：形似子弹头，如狂犬病病毒。(4)砖形：如痘病毒(天花病毒、牛痘苗病毒等)(5)蝌蚪形：如噬菌体。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313一、病毒的大小与形态一、病毒的大小与形态江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 177070933

5、13二、病毒的结构与功能二、病毒的结构与功能病毒的结构有二种，一是基本结构基本结构，为所有病毒所必备；一是辅助结构辅助结构，为某些病毒所特有。它们各有特殊的生物学功能。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313（一）病毒的基本结构（一）病毒的基本结构基本结构为不同病毒体所共有的一般结构，包括核心的核酸和外被的蛋白质衣壳。二者共同构成核衣壳核衣壳（nucleacapsid）。裸露病毒的核衣壳就是病毒体。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313（

6、一）病毒的基本结构（一）病毒的基本结构1病毒的核心病毒的核心（viral core）即核酸（Nucleic acid）：位于病毒体的中心，由一种类型的核酸构成，含DNA的称为DNA病毒。含RNA的称为RNA病毒。DNA病毒核酸多为双股，RNA病毒核酶酸多为单股。病毒核酸也称基因组（Genome），最大的痘病毒含有数百个基因，最小的细小病毒仅有3-4个基因。根据核酸构形及极性可分为环状、线状、分节段以及正链、负链等不同类型。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313病毒的核心主要功能病毒的核心主要功能（1）控制病毒复制（

7、2）决定病毒的特性（3）具有感染性 禽流感病毒禽流感病毒RNA聚合酶亚基聚合酶亚基PA氨基端结构与功能分析氨基端结构与功能分析 轮状病毒基因编码的产物及其定位轮状病毒基因编码的产物及其定位江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313（一）病毒的基本结构（一）病毒的基本结构2病毒的衣壳（viral capsid）在核酸的外面紧密包绕着一层蛋白质外衣，即病毒的“衣壳”。衣壳是由许多“壳微粒(Capsomere)”按一定几何构型集结而成，壳微米在电镜下可见，是病毒衣壳的形态学亚单位，它由一至数条结构多肽能成。江西农业大学动物科

8、学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 177070933132病毒的衣壳病毒的衣壳1）立体对称立体对称：形成20个等边三角形的面，12个顶和30条棱，具有五、三、二重轴旋转对称性，如腺病毒、脊髓灰质炎病毒等；2）螺旋对称螺旋对称：壳微粒沿螺旋形盘红色的核酸呈规则地重复排列，通过中心轴旋转对称，如正粘病毒，副粘病毒及弹状病毒等；3）复合对称复合对称：同时具有或不具有两种对称性的病毒，如痘病毒与噬菌体。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313病毒衣壳的对称方式病毒衣壳的对称方式江西

9、农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 1770709331320面立体对称的特点面立体对称的特点江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 1770709331320面立体对称的特点面立体对称的特点江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313病毒的螺旋对称方式病毒的螺旋对称方式江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313蛋白质衣壳的功能蛋白质衣

10、壳的功能（1）保护病毒保护病毒：致密稳定的衣壳赋予病毒固有的外状、保护内部核酸免遭破坏；（2）具有抗原性具有抗原性：衣壳蛋白质具有病毒特异的抗原性，可刺激机体产生抗原病毒免疫应答；（3）参与感染过程参与感染过程；具有辅助感染作用。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313（二）病毒的辅助结构（二）病毒的辅助结构1囊膜囊膜（Envelope）：某些病毒，如虫媒病毒、人类免疫缺陷病毒、疱疹病毒等，在核衣壳外包绕着一层含脂蛋白的外膜，称为“囊膜”。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 177

11、07093313 17707093313囊膜囊膜内含有双层脂质、多糖和蛋白质，其中蛋白质具有病毒特异性，常与多糖构成糖蛋白糖蛋白亚单位，嵌合在脂质层，表面呈棘状突起，称“剌突或囊微粒”。位于病毒体的表面，有高度的抗原性，并能与宿主细胞受体结合，促使病毒囊膜与宿主细胞膜融合，感染性核衣壳进入胞内而导致感染。有囊膜病毒对脂溶剂和其他有机溶剂敏感有囊膜病毒对脂溶剂和其他有机溶剂敏感，失去囊膜后便丧失了感染性。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313（二）病毒的辅助结构（二）病毒的辅助结构2触须样纤维(Fiber)：腺病毒是

12、唯一具有触须样纤维的病毒，腺病毒的触须样纤维是由线状聚合多肽和一球形末端蛋白所组成，位于衣壳的各个顶角。该纤维吸附到敏感细胞上，抑制宿主细胞蛋白质代谢，与致病作用有关。此外，还可凝集某些动物红细胞。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313（二）病毒的辅助结构（二）病毒的辅助结构3病毒携带的酶病毒携带的酶：某些病毒核心中带有催化病毒核酸合成的酶，如流感病毒带有RNA的RNA聚合酶，这些病毒在宿主细胞内要靠它们携带的酶合成感染性核酸。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093

13、313 17707093313第二节第二节 病毒的抵抗力病毒的抵抗力病毒受理化因素作用后，失去感染性的过程称为灭活(inactivation)。一、物理因素对病毒的影响一、物理因素对病毒的影响 1、干燥与使用方法和病毒种类都有关。水泡液中的口蹄疫病毒(FMDV)置于37C快速干燥，FMDV将迅速灭活。而室温缓慢干燥FMDV可生存36个月，痂皮上的痘病毒(poxvirus)可生存很长时间，有囊膜病毒对干燥的抵抗力甚弱。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313一、物理因素对病毒的影响一、物理因素对病毒的影响2、低温、低温

14、病毒对抵抗低温很强，温度越低生存越长。抵抗力较强的病毒在25C就可以长期生存，但多数病毒最好贮存在70C以下。在液氮（196C）中病毒可长期存活。反复冻融对多数有囊膜病毒可很快灭活，冻干是保存病毒的好办法。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313一、物理因素对病毒的影响一、物理因素对病毒的影响3、高温多数病毒耐冷不耐热，在55C30min即可被灭活。有囊膜病毒对热很敏感，37C的半衰期1h；而无囊膜病毒常在6h以上。4、射线所有病毒均以电磁辐射敏感，尤其是、射线和紫外线。灭活机制为是：线、射线可引起核苷酸链发生致死性

15、断裂；紫外线可引起病毒的多核苷酸上形成双聚体，抑制病毒DNA或RNA复制，从而导致病毒失活。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313二、化学因素对病毒的影响二、化学因素对病毒的影响1、甘油、甘油多数病毒对其有较强抵抗力，50甘油缓冲生理盐水可作为保存病料的溶液。液氮中保存病毒时的保护剂。2、脂溶剂、脂溶剂可破坏病毒的囊膜而使其失活。如：乙醚或氯仿。3、pH所有病毒在pH7时都较稳定(pH=59)。病毒对酸碱抵抗力则差异甚大。肠道病毒对酸抵抗力很强，而鼻病毒和FMDV则很弱。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物

16、科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313二、化学因素对病毒的影响二、化学因素对病毒的影响4、消毒剂、消毒剂次亚氯酸盐、过氧乙酸、戊二醛、甲醛、氧化剂、卤素及其化合物等均能使大多数病毒灭活，与细菌相比，病毒对消毒剂抵抗力强，特别是无囊膜的小型病毒。5、其它、其它现有抗生素对病毒无作用，中药板兰根、大青叶、大黄、贯仲和七叶一枝花等对某些病毒有一定抑制作用。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313第三节第三节 病毒的复制病毒的复制病毒进入细胞后，在起初一段时间内，感染性病毒颗粒消失，称为隐

17、蔽期(eclipse period)。继之进入增殖期，病毒量增多。病毒增殖方式不是分裂，而是自我复制。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313主要概念主要概念细胞病变细胞病变：病毒在宿主细胞中大量复制导致细胞死亡，出现细胞病理变化称致细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)左：未感染病毒的HeLa细胞；中：被柯萨奇病毒B3感染后，细胞变圆、皱缩，细胞折光性减弱；右：被腺病毒感染后，细胞肿胀，折光性增强，呈葡萄状排列。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 177070

18、93313 17707093313空斑空斑(plaque)把病毒体稀释后与单层细胞接触，再在细胞表面盖一层琼脂，防止病毒从细胞释放培养液扩散，使其在细胞间传播，这样最初由一个病毒感染细胞只可形成一个坏死灶，常称为空斑空斑。空斑形成单位空斑形成单位：一个空斑即能代表最初的一个活性病毒粒子，称一个空斑形成单位(plaque formation unit,PFU)，常以PFU/ml来表示病毒的含量。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313一、病毒的复制周期一、病毒的复制周期复制一般可分为吸附、穿入、脱壳、生物合吸附、穿入、

19、脱壳、生物合成及装配与释放成及装配与释放五个阶段，称为复制周期。病毒感染的结局取决于宿主细胞与病毒之间相互作用的结果，有些病毒进入细胞中不产生新病毒，其基因整合到细胞染色体上；有些则在细胞内大量增殖，使细胞溶解，病毒释放。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313（一）吸附（一）吸附(adsorption)第一步是静电吸引：是非特异的和可逆的。第二步是宿主细胞表面受体与病毒衣壳蛋白的特异性结合。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313（一）吸

20、附（一）吸附(adsorption)一般细胞表面有104105个特异受体，受体通常是糖蛋白，分布在细胞膜表面，而病毒表面有接触蛋白。例如，微RNA病毒衣壳蛋白与细胞表面的脂蛋白受体结合，腺病毒衣壳上纤维刺突与细胞表面特异蛋白质结合；流感染病毒血凝素糖蛋白与细胞表面唾液酸寡糖支链结合，发生吸附。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313（二）穿入（二）穿入(penetration)病毒吸附在细胞表面上，可以通过不同方式进入到细胞内，这一过程称之为穿入穿入。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬

21、向东 17707093313 17707093313（二）穿入（二）穿入(penetration)1、吞饮、吞饮(endocytosis)：即病毒与细胞表面结合后内凹入细胞，细胞膜内陷形成类似吞噬泡，病毒原封不动地进入胞浆内。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313（二）穿入（二）穿入(penetration)2、融合、融合：指病毒包膜与细胞膜融合，而将病毒的核衣壳释放至细胞浆内。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313（二）穿入（二）穿入

22、(penetration)3、转位、转位：即无囊膜病毒吸附时某些蛋白质衣壳的多肽成分已发生改变，从而可直接穿过细胞膜，但这种方式较为少见。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313（三）脱壳（三）脱壳(uncoating)病毒进入细胞后，必须脱去蛋白质衣壳后，核心才能发挥指令作用。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313（三）脱壳（三）脱壳(uncoating)多数病毒穿入后，随即由细胞溶酶体酶的作用，使衣壳蛋白水解，露出病毒核酸。江西农业大

23、学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313（三）脱壳（三）脱壳(uncoating)痘病毒特殊，分为两步脱壳。先为溶酶体酶作用脱去外层衣壳蛋白，病毒核心（含内层衣壳和核酸）释放于细胞浆中，然后再经病毒编码产生一种脱壳酶，脱去层衣壳释放出核酸。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313（四）生物合成（四）生物合成(biosynthesis)先经不同时间的隐蔽期，开始从病毒核酸转录特异的mRNA和复制核酸。病毒蛋白质均在胞浆中合成，而核酸复制则因病毒核酸类型

24、不同而异。DNA病毒除痘病毒外均在胞浆中复制，RNA病毒除正粘病毒和逆转录病毒在核内复制外，均在胞浆中复制。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 177070933131、mRNA的转录与蛋白质的合成的转录与蛋白质的合成以病毒核酸为模板转录mRNA的过程，DNA病毒与RNA病毒相异。一般由于宿主细胞没有依赖RNA的多聚酶和依赖DNA的多聚酶，因此RNA病毒必须有由病毒基因编码的这些酶，各种病毒的核酸转录为mRNA的形式不同。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 177070933

25、131、mRNA的转录与蛋白质的合成的转录与蛋白质的合成mRNA的转录的转录（1）双链DNA，即DNA，天花病毒：双链DNA直接转录+mRNA；（2）单链DNA，所有单链DNA病毒的核酸均为DNA，细小病毒：先以+DNA为模板复制-DNA，形成双链 DNA，再转录形成+mRNA；（3）双链RNA，即RNA，呼肠孤病毒：由双链RNA中-RNA转录形成+mRNA。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313mRNA的转录的转录（4）单链-RNA，麻疹病毒：由单链-RNA转录形成+mRNA。（5）单链+RNA，脊髓质炎病毒：以

26、+RNA为模板合成-RNA，再以-RNA为模板转录形成+mRNA。反转录病毒：以+RNA为模板，反转录形成-DNA，再以-DNA为模板合成+DNA，再形成双链DNA，然后转录形成mRNA。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 177070933131、mRNA的转录与蛋白质的合成的转录与蛋白质的合成在生物合成早期，以亲代病毒DNA或RNA为模板转录的mRNA，再转译合成的蛋白质称之为早期蛋白质。早期蛋白质。早期蛋白的功能早期蛋白的功能：构成一些酶类：DNA与RNA多聚酶；抑制宿主细胞DNA、RNA与蛋白质合成，使宿主细胞受病毒核酸控制。

27、在生物合成晚期，主要由子代核酸转录mRNA，再转译合成的蛋白质，称为晚期蛋白质晚期蛋白质。晚期蛋白质：晚期蛋白质：主要为子代病毒衣壳蛋白，酶类及在病毒形成阶段起作用的非结构蛋白等。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 177070933132、核酸的复制、核酸的复制（1）双链核酸）双链核酸先在解链酶作用下将螺旋形的双链自一端解开，成为两条单链。然后以此为模板，按照核苷酸碱基配对规律，由DNA多聚酶或RNA多聚酶把各个核苷酸配对排列组成对应的核酸新链，又成为双链。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17

28、707093313 177070933132、核酸的复制、核酸的复制江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 177070933132、核酸的复制、核酸的复制（2）单链核酸单链核酸有正链与负链之分。复制时先以单逻核酸正链或负链作为模板，按照核苷酸碱基配对规律，由多聚酶将各个核苷酸对排列组成相对应的核酸新链（负链或正链），形成复制型(replicative,RF)。其中一条新链为互补链，恰与亲代核酸相反。然后将这个RF双链解开，用相反的互补链作模板，再按上法复制双链，再解开后就获得一条与亲代核酸链（正或负链）完全相同的新链，如此反复复制，制成

29、无数条与亲代同样的子代新链。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313RNA病毒中病毒中RNA的自我复制的自我复制江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313（五）成熟与释放（maturation and relase）成熟与释放(或装配与释放)病毒核酸与蛋白质合成之后，在胞浆内或核内装配（assemboy）为成熟的病毒颗粒。DNA病毒除痘病毒外，均在核内装配；RNA病毒与痘病毒则在胞浆内装配。HIV病毒以出芽方式释放病毒以出芽方式释放江西农业大

30、学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313成熟与释放成熟与释放成熟的病毒体从细胞向外释放有下列两种方式：1、破胞释放：裸露的DNA病毒、RNA病毒都以这种方式释放。即病毒的装配完成后，宿主细胞破裂而把病毒全部释放到周围环境中。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313成熟与释放成熟与释放2、芽生：、芽生：有囊膜DNA、RNA病毒，在装配完成后，以出芽方式释放到细胞外，通常细胞不死亡，仍能分裂增殖。HIV病毒以出芽方式释放病毒以出芽方式释放江西农业大学动物

31、科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313异常增殖类型异常增殖类型1、缺陷病毒、缺陷病毒(defective virus)指病毒基因组不完全或者基因位点改变不能进行正常增殖的病毒。但当与另一种病毒共同培养时，若后者能为前者提供所缺乏的物质则能使之完成正常的增殖，这种有辅助作用的病毒被称为辅助病毒辅助病毒。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313异常增殖类型异常增殖类型2、顿挫感染、顿挫感染(abortive infection)：病毒进入宿主细胞后，如细胞不

32、能为病毒增殖提供所需要的酶，能量及必要的成分，则病毒在其中不能合成本身的成分；或者虽合成部分或全部的病毒成分，但不能装配和释放，称为顿挫感染。例如：人腺病毒感染人胚肾细胞能正常增殖；若感染猴肾细胞则发生顿挫感染。3、干扰现象、干扰现象：两种病毒共同感染同一细胞时，可发生一种病毒抑制一种病毒增殖的现象，称为病毒的干扰现象。而能起这种作用的物质，是一种糖蛋白，称为干扰素（IFN）。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313二、病毒的人工培养病毒的人工培养病毒缺乏完整的酶系统，又无核糖体等细胞器，所以不能在无生命的培养基上生

33、长，必须在活细胞内增殖。因此，实验动物、禽胚以及体外培养的组织和细胞就成为人工培养病毒的场所。而病毒的人工培养，是病毒实验研究以及制备疫苗和特异性诊断制剂的基本条件。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313（一）、动物接种（一）、动物接种病毒经注射、口服等途径进入易感动物体后可大量增殖，并使动物产生特定反应。分类分类：本动物接种和实验动物接种。实验动物要求实验动物要求：健康、血清中无相应病毒抗体，并符合其他要求。理想的动物理想的动物：无菌动物或SPF动物。实验动物实验动物：小鼠、家兔、豚鼠、鸡等。应用应用：病原学检查

34、，传染病的诊断，疫苗生产及疫苗效力检验等。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313常用实验动物江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313（二）、禽胚培养（二）、禽胚培养 禽胚是正在孵育的禽胚胎。禽胚胎组织分化程度低，病毒易于在其中增殖。优点：优点：感染的胚胎组织中病毒含量高，培养后易于采集和处理；禽胚来源充足，操作简单。缺点：缺点：禽胚中可能带有垂直传播的病毒、卵黄抗体干扰等。最好的选择最好的选择：SPF胚。江西农业大学动物科学技术学院江西农

35、业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313禽胚病变一是一是禽胚死亡，胚胎不活动，照蛋时血管变细或消失；二是二是禽胚充血、出血或出现坏死灶，常见在胚体的头、颈、躯干、腿等处或通体出血；三是三是禽胚畸形；四是四是禽胚绒毛尿囊膜上出现痘斑。许多病毒缺乏特异性的病毒感染指征，必须许多病毒缺乏特异性的病毒感染指征，必须应用血清学或病毒学相应的检测方法来确定病毒的应用血清学或病毒学相应的检测方法来确定病毒的存在和增殖情况。存在和增殖情况。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 177070933131、绒毛尿

36、囊膜接种、绒毛尿囊膜接种主要用于痘病毒和疱疹病毒的分离和增殖，用1013日龄鸡胚。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 177070933132、尿囊腔接种、尿囊腔接种用于正粘病毒和副粘病毒的分离和增殖，用912日龄鸡胚。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 177070933133、卵黄囊接种、卵黄囊接种用于虫媒披膜病毒及鹦鹉热衣原体和立克次氏体等的增殖，用68日龄鸡胚。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 177070

37、933134、羊膜腔接种羊膜腔接种用于正粘病毒和副粘病毒的分离和增殖，选用1011日龄鸡胚。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313适于鸡胚接种的病毒 江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313（三）、组织细胞培养（三）、组织细胞培养 组织细胞培养组织细胞培养：用体外培养的组织块或单层细胞分离增殖病毒。组织培养组织培养：将器官或组织小块于体外细胞培养液中培养存活后，接种病毒，观察组织功能的变化，如气管黏膜纤毛上皮的摆动等。细胞培养细胞培养：用

38、细胞分散剂将动物组织细胞消化成单个细胞的悬液，适当洗涤后加入营养液，使细胞贴壁生长成单层细胞。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313细胞培养细胞培养病毒感染细胞后，大多数能引起CPE，借助倒置显微镜即可观察到。有的细胞不发生病变，但培养物出现红细胞吸附及血凝现象。有时还可用免疫荧光技术等血清学试验检查细胞中的病毒。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313细胞培养细胞培养兽医上通常用的细胞有CEF（鸡胚成纤维细胞）、PK-15株（猪肾上皮细

39、胞）、K-L株（中国仓鼠肺）、D-K株（中国仓鼠肾）等。细胞培养多用于病毒的分离、培养和检测中和抗体。因此，细胞培养对病毒的诊断和研究发挥很大的作用。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313细胞分类细胞分类原代细胞（原代细胞（primary cell）：由新鲜组织经过剪碎、胰酶消化制备的细胞。细胞株（细胞株（cell strain）：自传代培养的二倍体细胞中选育出的具有特殊生物学性质和标记的细胞。细胞系（细胞系（cell line）：又称非二倍体细胞系，能在体外无限传代培养的细胞。江西农业大学动物科学技术学院江西农业

40、大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313细胞培养技术细胞培养技术（1）静置培养（2）转瓶培养（3）悬浮培养（4）微载体培养江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313（四）、分离病毒的鉴定（四）、分离病毒的鉴定 病毒在细胞内增殖的指征：1、细胞致病作用、细胞致病作用(CPE)：病毒在细胞内增殖引起细胞退形性变化，表现为细胞皱缩、变圆、出现空泡、死亡和脱落。某些病毒产生特征性CPE，普通光学倒置显微镜下可观察上述细胞病变，结合临床表现可做出预测性诊断。江西农业大学动物科学技术学院江

41、西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313（四）、分离病毒的鉴定（四）、分离病毒的鉴定2、红细胞吸附现象、红细胞吸附现象：流感病毒和某些副粘病毒感染细胞后24-48小时，以细胞膜上出现病毒的血凝素，能吸附豚鼠、鸡等动物及人的红细胞，发生红细胞吸附现象。若加入相应的抗血清，可中和病毒血凝素、抑制红细胞吸附现象的发生，称为红细胞吸附抑制试验。这一现象不仅可作为这类病毒增殖的指征，还可作为初步鉴定。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313（四）、分离病毒的鉴定（四）、分离病毒的

42、鉴定3、干扰现象：、干扰现象：一种病毒感染细胞后可以干扰另一种病毒在该细胞中的增殖，这种现象叫干扰现象。前者为不产生CPE的病毒（如风疹病毒）但能干扰以后进入的病毒（如ECHO病毒）增殖，使后者进入宿主细胞不再生产CPE。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313第四节第四节 病毒的分类与命名病毒的分类与命名各种生物体均可有病毒寄生。已知有动物病毒、植物病毒、放线菌病毒及细菌病毒。医学上重要的病毒有500种左右，其中有不少对人类和动物有致病力。有些病毒也能在节肢动物中增殖。目前通过的分类法是将动物病毒分为DNA病毒与R

43、NA病毒 两大类。再按病毒的理化性状分为若干科。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313一、分类的机构及标准一、分类的机构及标准1966年建立了国际病毒命名委员会（ICNV），1973年更名为国际病毒分类委员会（ICTV），作为国际公认的病毒分类与命名的权威机构。病毒分类根据形态与结构、核酸与多肽、复制以及对理化因素的稳定性等诸多方面。到1998年4月，已经完成包括76种人类病毒在内的572株病毒的基因组全序列测定，病毒基因组的特征对分类愈来愈显得重要。例如动脉炎病毒属原为披膜病毒科的一个属，现已独立为动脉炎病毒科（

44、Arteriviridae）。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313二、分类的现状二、分类的现状根据ICTV的分类报告，目前可把所有已知的病毒分为233个属。其中204个属归于64个科，脊椎动物病毒为主的有27科，无脊动物为主的有5科，其余分别为植物病毒、细菌病毒、真菌病毒，藻类和支原体病毒。科下设属，有的还分亚科，科和属是病毒分类的最主要单位。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313二、分类的现状二、分类的现状从第6次分类报告开始，把病毒分为3大类：DNA病毒、DNA反转录与RNA反转录病毒类、RNA病毒类。第7次分类报告在部分科之上建立了3个目。病毒的种是一个不确定的分类单位。1990年ICTV将其定义为具有一定世代关系并占据着一定生境的病毒群。亚病毒是比病毒结构更为简单的微生物，其分类及有关介绍一般均附于病毒学之内。江西农业大学动物科学技术学院江西农业大学动物科学技术学院 邬向东邬向东 17707093313 17707093313本章节结束！