抗体生物制品 .ppt

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1、4.抗体生物制品抗体生物制品抗体的结构、分类与功能抗体的结构、分类与功能多克隆抗体多克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体基因工程抗体基因工程抗体Emil von Behring,1901,antitoxinsGeoreges Kohler and Cesar Milstein,1984,monoclonal antibodySusumu Tonegama,1987,structure of Ig geneGerald Edelman and Rodney Porter,1972,structure of antibodyPaul Ehrlich,1908,production of antibodyN

2、obelPrizewinners抗体药物销售趋势图抗体药物销售趋势图1.抗体的结构、分类与功能抗体的结构、分类与功能抗体是一种蛋白质抗体是一种蛋白质抗体由四条蛋白质长短链组成抗体由四条蛋白质长短链组成(两长两短两长两短)抗体分子上有两个抗原结合区抗体分子上有两个抗原结合区(二者相同二者相同)抗体与抗原结合是专一性的抗体与抗原结合是专一性的(lock&key)Epitope,Antigenic determinant抗原决定簇抗原决定簇v一个抗原分子上可能有数个抗原决定簇一个抗原分子上可能有数个抗原决定簇v每个抗原决定簇至少诱生一种专一性抗体每个抗原决定簇至少诱生一种专一性抗体v蛋白质性抗原决定

3、簇含有六个以上氨基酸蛋白质性抗原决定簇含有六个以上氨基酸整体水平抗体生成技术细胞工程抗体生成技术 基因工程抗体生成技术基因工程抗体生成技术多克隆抗体（抗血清）多克隆抗体（抗血清）单克隆抗体单克隆抗体嵌合抗体、改形抗体嵌合抗体、改形抗体“小型化抗体小型化抗体”（单链抗体）（单链抗体）组合抗体库技术组合抗体库技术 噬菌体抗体库技术噬菌体抗体库技术指由不同指由不同指由不同指由不同B B B B细胞克隆产生的针对抗原细胞克隆产生的针对抗原细胞克隆产生的针对抗原细胞克隆产生的针对抗原物质中多种抗原决定簇的多种抗体物质中多种抗原决定簇的多种抗体物质中多种抗原决定簇的多种抗体物质中多种抗原决定簇的多种抗体混

4、合物。混合物。混合物。混合物。多克隆抗体多克隆抗体（polyclonal antibodypolyclonal antibody）传统传统抗血清抗血清抗抗 原原免免 疫疫所有抗所有抗体体混合混合1 23412341 234脾脾脾脾 脏脏脏脏淋巴結淋巴結淋巴結淋巴結B B B B 細胞細胞細胞細胞 传统传统传统传统抗血清的交叉反抗血清的交叉反抗血清的交叉反抗血清的交叉反应应应应专一性反应专一性反应专一性反应专一性反应沒有反應沒有反應沒有反應沒有反應交叉反应交叉反应交叉反应交叉反应+-?1 2 3 Ag A x y z Ag B 1 2 0 Ag A123123123.单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗

5、体是将抗体产生细胞与骨髓瘤细胞单克隆抗体是将抗体产生细胞与骨髓瘤细胞融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而生产的。由于胞成为纯一的单克隆细胞系而生产的。由于这种抗体是针对一个抗原决定簇的抗体，又这种抗体是针对一个抗原决定簇的抗体，又是单一的是单一的B淋巴细胞克隆产生的，因此称为单淋巴细胞克隆产生的，因此称为单克隆抗体。它是结构和特异性完全相同的高克隆抗体。它是结构和特异性完全相同的高纯度抗体。纯度抗体。一个一个B细胞只能产生一种抗体细胞只能产生一种抗体,对付某一抗原决定簇对付某一抗原决定簇若有许多抗原决定簇若有许多抗原决定簇,则需

6、许多则需许多B细胞分别产生抗体细胞分别产生抗体1234mmmm12341234单单抗抗细细胞融合胞融合取出脾取出脾细胞细胞+癌癌细胞细胞各抗各抗体体分分开开单克隆抗体技术操作流程单克隆抗体技术操作流程.基因工程抗体基因工程抗体1 人一鼠嵌合抗体(Chimeric Antibodies)人一鼠嵌合抗体是将鼠源单抗的可变区与人抗体的恒定区融合而得到的抗体。构建嵌合抗体的大致过构建嵌合抗体的大致过程是，将鼠源单抗的程是，将鼠源单抗的可变区可变区基因基因克隆出来，连到包含有克隆出来，连到包含有人抗体恒定区基因人抗体恒定区基因及表达所及表达所需的其它元件需的其它元件(如启动子、如启动子、增强子、选择标记

7、等增强子、选择标记等)的表的表达载体上，在哺乳动物细胞达载体上，在哺乳动物细胞(如骨髓瘤细胞、如骨髓瘤细胞、CHOCHO细胞细胞)中表达。中表达。构建重组表达载体构建重组表达载体 克隆鼠单抗的可变区基因，可从克隆鼠单抗的可变区基因，可从基因组文基因组文库库中分离，也可用中分离，也可用PCRPCR技术技术分离。分离。人抗体恒定区可根据需要选择，不同的恒人抗体恒定区可根据需要选择，不同的恒定区会带给嵌合抗体不同功能。为避免人抗体定区会带给嵌合抗体不同功能。为避免人抗体的恒定区产生不需要的副作用，可通过点突变的恒定区产生不需要的副作用，可通过点突变来修饰调整其效应。来修饰调整其效应。人一鼠嵌合抗体与

8、鼠单抗相比，人一鼠嵌合抗体与鼠单抗相比，免疫原性免疫原性大大降低，利于在人体内应用大大降低，利于在人体内应用，所以目前已制，所以目前已制备出上百种抗各种抗原备出上百种抗各种抗原(包括肿瘤相关抗原包括肿瘤相关抗原)的的嵌合抗体。嵌合抗体。Pr 鼠鼠VH 人人 CH Pr 鼠鼠VL 人人 CL免疫球蛋白基因载体的构建H链嵌合载体链嵌合载体L 链嵌合载体链嵌合载体共转染细胞共转染细胞启动子启动子人人-鼠嵌合抗体基因工程改造策略鼠嵌合抗体基因工程改造策略鼠鼠VH鼠鼠VL人人CL人人CH抗体分泌细胞抗体分泌细胞2 鼠单抗可变区的人源化尽管嵌合抗体的免疫原性已降低很多，但尽管嵌合抗体的免疫原性已降低很多，

9、但有时它仍可能引发较强的免疫反应。为了进一有时它仍可能引发较强的免疫反应。为了进一步降低抗体的鼠源成分，发展出步降低抗体的鼠源成分，发展出CDRCDR移植技术。移植技术。CDRCDR移植即把鼠抗体的移植即把鼠抗体的CDRCDR序列移植到人抗序列移植到人抗体的可变区内，所得到的抗体称体的可变区内，所得到的抗体称CDRCDR移植抗体移植抗体或或改型抗体改型抗体，也就是，也就是人源化抗体。人源化抗体。经过经过CDRCDR移植，移植，抗体抗体的免疫原性极低，而其的免疫原性极低，而其抗原结合能力保持不变，抗原结合能力保持不变，结合半抗原及全抗原结合半抗原及全抗原(如如细胞表面受体、病毒等细胞表面受体、病

10、毒等)的改形抗体都已有报道，的改形抗体都已有报道，到现在已有数百种人源到现在已有数百种人源化抗体。（美国正式上化抗体。（美国正式上市的市的1111种治疗性单抗中种治疗性单抗中多数是改型抗体）多数是改型抗体）CDR序列序列CDR序列序列鼠单克隆抗体鼠单克隆抗体人抗体人抗体人源化抗体（改型抗体）人源化抗体（改型抗体）鼠单克隆鼠单克隆V区人源化（区人源化（CDR移植）移植）人源化抗体的构建可用人源化抗体的构建可用全合成法全合成法或或定点定点突变法突变法。全合成法全合成法是以人抗体序列为骨架，以鼠是以人抗体序列为骨架，以鼠抗体的抗体的CDRCDR置换人抗体的置换人抗体的CDRCDR，将整个可变，将整个

11、可变区序列的两条链分解成若干片段，并使相区序列的两条链分解成若干片段，并使相邻的片段具有彼此互补的粘性末端。合成邻的片段具有彼此互补的粘性末端。合成所有所有DNADNA片段，每组片段分别退火，然后逐片段，每组片段分别退火，然后逐组连接成完整的可变区基因，插入质粒中，组连接成完整的可变区基因，插入质粒中，进一步即可用于构建和表达改形抗体。进一步即可用于构建和表达改形抗体。定点突变法定点突变法是将人的可变区基因克隆，是将人的可变区基因克隆，根据鼠抗体的根据鼠抗体的CDR CDR 序列合成几种突变引物，序列合成几种突变引物，用定点突变的方法将人的可变区基因的用定点突变的方法将人的可变区基因的CDRC

12、DR序列变为鼠抗体的序列变为鼠抗体的CDRCDR序列，然后表达出改序列，然后表达出改型抗体。型抗体。研究表明，在构建改形抗体时，简单地研究表明，在构建改形抗体时，简单地进行进行CDRCDR替换并不能保证抗体具有好的亲和替换并不能保证抗体具有好的亲和力，因此在构建时还必需包括力，因此在构建时还必需包括对影响抗原对影响抗原结合位点的空间结构的框架序列结合位点的空间结构的框架序列进行操作。进行操作。小分子抗体包括小分子抗体包括FabFab、FvFv或或ScFvScFv、单域抗、单域抗体及最小识别单位体及最小识别单位等几种。等几种。小分子抗体有很多优点小分子抗体有很多优点:可以用细菌发酵生产，成本低可

13、以用细菌发酵生产，成本低;分子小，穿透力强分子小，穿透力强;不含不含FcFc，没有，没有FcFc带来的效应带来的效应;在体内循环的半衰期短，易清除，利于解毒在体内循环的半衰期短，易清除，利于解毒排出排出;易于与毒素或酶基因连接，便于直接获得免易于与毒素或酶基因连接，便于直接获得免疫毒素或酶标抗体等。疫毒素或酶标抗体等。3 3 小分子抗体小分子抗体FvFvScFvScFv单区抗体单区抗体最小识别单位最小识别单位FabFab 由完整的由完整的轻链和轻链和FdFd组成，大小为完整分子组成，大小为完整分子的的1/31/3。把把FabFab与细菌的前导肽相连，在前导肽的与细菌的前导肽相连，在前导肽的作用

14、下作用下FabFab进入质周腔，装配折叠后，它具有进入质周腔，装配折叠后，它具有结合抗原的活性。结合抗原的活性。(1)Fab免疫球蛋白免疫球蛋白基因载体的构建基因载体的构建H链表达载体链表达载体L链表达载体链表达载体共转染细胞共转染细胞Pr VH CH1 Pr VL CLFab 抗体分子的制备抗体分子的制备抗体分泌细胞抗体分泌细胞VHVLCL-S-S-CH1Fv、ScFv的大小约为全分子的1/6。(2)Fv 或 ScFvFvScFv连接肽连接肽连接肽连接肽 FvFv由由VHVH与与VLVL构成，由于其结合是非共价构成，由于其结合是非共价结合，故结合，故FvFv不稳定。不稳定。在在VHVH与与V

15、LVL之间加上一段连接肽，把之间加上一段连接肽，把VHVH与与VLVL连成一条单链，得到连成一条单链，得到ScFvScFv，即单链抗体，即单链抗体。连接肽连接肽的长度在的长度在10-1510-15个氨基酸左右，不个氨基酸左右，不宜太长或太短，它应具有柔软性，侧链少，宜太长或太短，它应具有柔软性，侧链少，抗原性弱等特点。常用的连接肽是抗原性弱等特点。常用的连接肽是(GGGGS)(GGGGS)3 3。单链抗体单链抗体的构建在已知亲本的构建在已知亲本DNADNA序列时可用序列时可用完全完全人工合成法人工合成法;在具备亲本单抗可变区的在具备亲本单抗可变区的cDNAcDNA克隆时，可用克隆时，可用定点突

16、变法定点突变法在其两端造成适当的内切酶位点，与在其两端造成适当的内切酶位点，与人工合成的连接肽编码序列连接，组装到表达载人工合成的连接肽编码序列连接，组装到表达载体中体中;如果从杂交瘤细胞系构建单链抗体，可用如果从杂交瘤细胞系构建单链抗体，可用PCRPCR方法方法扩增可变区基因，再组装到适当的表达载体扩增可变区基因，再组装到适当的表达载体上。上。单链抗体单链抗体最常用的最常用的表达体系是表达体系是大肠杆菌，大肠杆菌，有有2 2种方式种方式:一是表达为一是表达为包涵或非包涵体的不溶蛋白包涵或非包涵体的不溶蛋白。产。产量高，可达细菌蛋白总量的量高，可达细菌蛋白总量的5%-20%5%-20%，但需进

17、行变，但需进行变性复性，使其形成正确的立体结构，恢复抗体活性复性，使其形成正确的立体结构，恢复抗体活性性;二是二是分泌型表达分泌型表达，将细菌的信号肽序列与单，将细菌的信号肽序列与单链抗体的氨基端相连，单链抗体分子就可分泌到链抗体的氨基端相连，单链抗体分子就可分泌到质周腔和细菌体外，进行折叠后成为有活性的分质周腔和细菌体外，进行折叠后成为有活性的分子。但产量不及前者，一般实验室培养条件下每子。但产量不及前者，一般实验室培养条件下每升细菌的产量仅在数毫克左右。升细菌的产量仅在数毫克左右。分别构建载体分别构建载体L链表达载体链表达载体H链表达载体链表达载体共转染细胞共转染细胞Pr VH Pr VL

18、 Fv 二硫键稳定的二硫键稳定的Fv(disulfide-stabilized Fv,ds-Fv)小分子抗体的制备小分子抗体的制备抗体分泌细胞抗体分泌细胞VHVL-S-S-disulfide-stabilized Fv,ds-FvVH VL接头接头DNA (Gly4Ser)3 VH引物引物PCR VH 接头接头DNA酶切、克隆酶切、克隆 ScFv(single chain Fv,scFv)的构建的构建 变性、复性变性、复性VL引物引物VL 即为即为VHVH，约为完整分子的，约为完整分子的1/121/12。它只由一个。它只由一个结构域构成，故称结构域构成，故称单域抗体。单域抗体。单域抗体尽管亲单

19、域抗体尽管亲和力有所降低，但仍保持着原单抗的特异性。和力有所降低，但仍保持着原单抗的特异性。(3)单域抗体VH 约为完整分子的约为完整分子的1/80-1/701/80-1/70大小，一般大小，一般由一个由一个CDRCDR构成，它也保持着抗体的特异性。构成，它也保持着抗体的特异性。(4)最小识别单位CDR4 4 双特异抗体和多价抗体双特异抗体和多价抗体双链抗体双链抗体 （DiabodyDiabody）一词最早由）一词最早由HollingerHollinger等于等于19931993年创造。乃是一种小分年创造。乃是一种小分子的双价双特异性抗体片段。子的双价双特异性抗体片段。双特异性抗体双特异性抗体

20、(bispecific(bispecific antibody,BSAb)antibody,BSAb)是指能同时识别是指能同时识别2 2种抗原的抗种抗原的抗体。体。1 1种为对应肿瘤相关抗原。另种为对应肿瘤相关抗原。另1 1种为对应种为对应效应成分。效应成分。即能即能结合靶肿瘤细胞结合靶肿瘤细胞又能又能结合高细胞毒结合高细胞毒性的效应细胞性的效应细胞,将效应细胞富集在肿瘤周围将效应细胞富集在肿瘤周围,而且可以模拟天然配体的作用而且可以模拟天然配体的作用,与细胞表面引与细胞表面引发分子结合发分子结合,激活效应细胞激活效应细胞,实现对肿瘤细胞实现对肿瘤细胞的杀伤和裂解。的杀伤和裂解。Holling

21、erHollinger等巧妙地将抗原抗体的轻等巧妙地将抗原抗体的轻链可变区基因链可变区基因(VLA)(VLA)与抗抗原抗体的重链与抗抗原抗体的重链可变区可变区(VHB)(VHB)通过短肽连接子连接通过短肽连接子连接;同样地同样地,将将VHAVHA与与VLBVLB连接连接,将两组将两组嵌合基因嵌合基因置于双顺置于双顺反子的表达质粒中反子的表达质粒中,构建成双链抗体的表达构建成双链抗体的表达质粒质粒,目前报道的表达质粒均为双顺反子。目前报道的表达质粒均为双顺反子。表达后表达后,VLA VHB,VLA VHB与与VHA VLBVHA VLB交叉连结交叉连结,形成形成双特异性抗体。双特异性抗体。所以双

22、特异性抗体与既往肿瘤免疫所以双特异性抗体与既往肿瘤免疫治疗相比治疗相比,除了能除了能特异性识别肿瘤细胞特异性识别肿瘤细胞外外,还能还能将循环血液中的免疫效应细胞再导将循环血液中的免疫效应细胞再导向至肿瘤细胞处向至肿瘤细胞处,从而使效应细胞的抗肿从而使效应细胞的抗肿瘤活性增强瘤活性增强,发挥免疫导向作用发挥免疫导向作用,这是肿这是肿瘤治疗的新突破。瘤治疗的新突破。抗体库技术是用基因工程方法把人或其他抗体库技术是用基因工程方法把人或其他动物的动物的全部抗体的轻、重链可变区基因全部抗体的轻、重链可变区基因克隆出克隆出来，在原核载体上表达，然后筛选出所需的特来，在原核载体上表达，然后筛选出所需的特异基

23、因和抗体。异基因和抗体。主要有以下两种技术：主要有以下两种技术：免疫球蛋白免疫球蛋白FabFab片段在大肠杆菌中的成功表达片段在大肠杆菌中的成功表达 噬菌体表面展示文库技术噬菌体表面展示文库技术5 5 抗体库技术抗体库技术初期的抗体库技术是从淋巴细胞中提取总初期的抗体库技术是从淋巴细胞中提取总RNARNA，反转录成，反转录成cDNAcDNA或直接用总或直接用总DNADNA为模板，用为模板，用PCRPCR技术建立轻、重链文库，在大肠杆菌中表技术建立轻、重链文库，在大肠杆菌中表达后筛选。达后筛选。它是在它是在PCRPCR技术和技术和Phage DisplayPhage Display的基础上实的基

24、础上实现的。其过程是把用现的。其过程是把用PCRPCR法得到的抗体基因插法得到的抗体基因插入丝状噬菌体的入丝状噬菌体的DNADNA，与噬菌体外壳蛋白的基，与噬菌体外壳蛋白的基因相连，在辅助噬菌体的帮助下，噬菌粒包装因相连，在辅助噬菌体的帮助下，噬菌粒包装成丝状噬菌体，抗体分子通过与成丝状噬菌体，抗体分子通过与P P 或或PP相相连，在噬菌体表面的一端或分散分布，然后可连，在噬菌体表面的一端或分散分布，然后可直接对噬菌体表面的抗体分子进行筛选。直接对噬菌体表面的抗体分子进行筛选。噬菌体抗体库技术噬菌体表面展示系统(phage surface display systemphage surface

25、 display system)融合蛋白融合蛋白PIII基因型基因型表达型表达型LeadHvLinkLvEPIII噬菌体展示技术是将各种多肽或蛋白质以融合噬菌体展示技术是将各种多肽或蛋白质以融合蛋白的形式表达并展示在噬菌体表面，同时将蛋白的形式表达并展示在噬菌体表面，同时将其遗传密码包含于噬菌体内部，这使得蛋白质其遗传密码包含于噬菌体内部，这使得蛋白质的功能与其基因密码有机的连结在一起。的功能与其基因密码有机的连结在一起。非展示系统 展示系统噬菌体抗体库的构建VHVLCLCH1CH2CH3Hinge(Fab)2FabFcMembraneExtensionVHVLCLCH1CH2CH3VHVLC

26、LCH1CH2CH3FvFvVHVLscFvVHVLSingle Chain Fragment variable 单克隆抗体单克隆抗体 噬菌体抗体噬菌体抗体 杂交瘤技术杂交瘤技术 展示技术展示技术宿主细胞宿主细胞:杂交瘤杂交瘤 细菌细菌筛选范围筛选范围:103 107 109时间时间:几个月几个月 几周几周操作操作:繁杂繁杂 相对简单相对简单免疫免疫:必须必须 可避免可避免人源抗体人源抗体:+费用费用:高高 低低生产量生产量:有限有限 无限无限基因获取基因获取:再克隆再克隆 直接直接应用前景应用前景:有限有限 不可估不可估 噬菌体抗体库的选择过程噬菌体抗体库的选择过程 BBBBBBvvImmu

27、notubecoated withantigencoated withsteptavidin and biotinylated antigenBbiotin antigenSolution phase selection with biotinylated antigen Bind to Streptavidincoated microtitre wellsWash to remove unbound phage particles.Elute bound phageAmplify eluted phageRepeat selectionAnalyzea)ELISAb)Specificityc

28、)Sequencingd)Affinitye)ActivityE.coli感染感染和扩增和扩增噬菌体展示技术最关键的优势有三：噬菌体展示技术最关键的优势有三：v淘淘选选的的高高效效率率使使得得在在极极低低的的存存在在 水水平平下下，挑挑选选到到高高亲亲和和力力噬噬菌菌体体成成为为可能；可能；v所所挑挑选选到到的的噬噬菌菌体体可可在在微微量量存存在在的的情情况下，通过感染细菌得到富集；况下，通过感染细菌得到富集；v展展示示的的多多肽肽或或蛋蛋白白质质与与其其包包含含在在噬噬菌菌体体内内部部的的基基因因密密码码的的连连接接，使使得得结结合合肽或蛋白质的序列分析既快速又简便。肽或蛋白质的序列分析既快

29、速又简便。噬菌体（噬菌体（M13,T7,T4,)病毒（反转录病毒，杆状病毒）病毒（反转录病毒，杆状病毒）表面展示系统表面展示系统 细菌（葡萄球菌，细菌（葡萄球菌，E.Coli)酵母酵母 体外共价连接（蛋白体外共价连接（蛋白DNA,蛋白蛋白RNA)噬菌体展示技术的应用现状噬菌体展示技术的应用现状 1.抗体抗体：抗狂犬病毒的单链抗体，抗狂犬病毒的单链抗体，抗抗HIV-1囊膜糖蛋白的单链抗体，此囊膜糖蛋白的单链抗体，此抗体可专一性杀死被抗体可专一性杀死被HIV-1感染并感染并表达有表达有gp120的淋巴细胞的淋巴细胞,中和响中和响尾蛇毒素的单链抗，尾蛇毒素的单链抗，等等等等。2.2.疫苗：疫苗：展示

30、在噬菌体表面的展示在噬菌体表面的HIV-1 HIV-1 的的gp120-V3gp120-V3环可环可 象天然抗原一样引起显著的免疫应答象天然抗原一样引起显著的免疫应答3.3.酶：酶：例：碱性磷酸酶，蛋白水解酶类，例：碱性磷酸酶，蛋白水解酶类，4.4.底物与抑制剂：底物与抑制剂：主要是蛋白酶的底物和其抑制剂。主要是蛋白酶的底物和其抑制剂。5.多肽类药物：多肽类药物：如一些激动剂或拮抗剂从多肽库中分离鉴定如一些激动剂或拮抗剂从多肽库中分离鉴定出来；已获得一出来；已获得一13 肽，它能中和蛇毒肽，它能中和蛇毒；从；从CX7C 多肽库中掏选到一个多肽能与多肽库中掏选到一个多肽能与 Hantavirus

31、 结合，并使该病毒不能结合或感结合，并使该病毒不能结合或感染细胞。人血管促生素是一种能促进肿瘤血染细胞。人血管促生素是一种能促进肿瘤血管生长的蛋白，用这个蛋白去淘选一个噬菌管生长的蛋白，用这个蛋白去淘选一个噬菌体展示多肽库，所获得的一个环状体展示多肽库，所获得的一个环状8肽能与肽能与血管促生素结合，并能阻遏血管促生素的活血管促生素结合，并能阻遏血管促生素的活性性6.肿瘤药物导航载体：肿瘤药物导航载体：用肿瘤细胞特殊的受体蛋白从展示文库中淘用肿瘤细胞特殊的受体蛋白从展示文库中淘选到的多肽或单链抗体，可以作为抗癌药物选到的多肽或单链抗体，可以作为抗癌药物的定向输送工具的定向输送工具。一个成功的实例

32、是：将噬。一个成功的实例是：将噬菌体多肽展示库注射入具有肿瘤的小鼠体菌体多肽展示库注射入具有肿瘤的小鼠体内，然后杀死小鼠，取出肿瘤，再将结合其内，然后杀死小鼠，取出肿瘤，再将结合其上的噬菌体洗脱下来。展示在其上的多肽具上的噬菌体洗脱下来。展示在其上的多肽具有与该肿瘤的特异性亲和力。将此多肽与细有与该肿瘤的特异性亲和力。将此多肽与细胞毒素胞毒素 doxorubicin 偶联。结果显示，此偶偶联。结果显示，此偶联物具有更强的抑制肿瘤的效果联物具有更强的抑制肿瘤的效果.7.信息信息传递传递研究研究:利用噬菌体展示多利用噬菌体展示多肽库肽库，发现发现了一些受体，了一些受体，如凝血致活如凝血致活酶酶、黑

33、皮黑皮质质素受体、素受体、CD80 和一个和一个 Hantaviral 受体；受体的配体，受体；受体的配体，如血管促生如血管促生素、素、-bungarotoxin，和一些大蛋白分子中和一些大蛋白分子中的折叠区域，如的折叠区域，如SH2、SH3 和和 WW 区域。区域。从多从多肽库肽库中可分离到与天然激素相似的、与中可分离到与天然激素相似的、与受体受体结结合的高合的高亲亲和力的多和力的多肽肽,因此用完整因此用完整细细胞胞可以从多可以从多肽库肽库中找到受体的高中找到受体的高选择选择性配体。性配体。在不知道任何有关的受体和配体信息的情况在不知道任何有关的受体和配体信息的情况下，用完整下，用完整细细胞

34、和胞和组织组织或或动动物，可物，可筛选筛选到特到特异与靶异与靶组织结组织结合的多合的多肽肽和蛋白和蛋白。8.DNA8.DNA结合蛋白：结合蛋白：锌指蛋白是一类锌指蛋白是一类 DNA DNA 结合小肽结构物，这些结合小肽结构物，这些结构含有锌，能用于构建一个大的蛋白区域，结构含有锌，能用于构建一个大的蛋白区域，去识别和结合特殊的去识别和结合特殊的 DNA DNA 序列。噬菌体展示序列。噬菌体展示技术也可以用于创造一个大的、具有识别不技术也可以用于创造一个大的、具有识别不同同 DNA DNA 序列的序列的 锌指的多肽库。利用这个多锌指的多肽库。利用这个多肽库，可以研究有关氨基酸序列与肽库，可以研究

35、有关氨基酸序列与 DNA DNA 结合结合位点之间的识别规则，可以通过设计位点之间的识别规则，可以通过设计 锌指多锌指多肽去控制基因的表达，比如抑制小鼠细胞系肽去控制基因的表达，比如抑制小鼠细胞系中的癌基因，也可以启动表达质粒的基因，中的癌基因，也可以启动表达质粒的基因，或干扰病毒感染生活周期。或干扰病毒感染生活周期。9.9.蛋白质组学：蛋白质组学：噬菌体展示技术作为一个多肽和蛋白质合噬菌体展示技术作为一个多肽和蛋白质合成的工具箱，使得任何蛋白均能找到与其成的工具箱，使得任何蛋白均能找到与其有特异结合力的多肽和蛋白质，其构建的有特异结合力的多肽和蛋白质，其构建的文库的滴度可达文库的滴度可达10101212。蛋白质组学的基本点。蛋白质组学的基本点就是利用蛋白质就是利用蛋白质-蛋白质的相互作用，对成蛋白质的相互作用，对成千上万种蛋白质同时进行分析。而噬菌体千上万种蛋白质同时进行分析。而噬菌体展示技术正好能符合这种要求。例：将噬展示技术正好能符合这种要求。例：将噬菌体展示菌体展示cDNA cDNA 文库制成蛋白点阵，成功的文库制成蛋白点阵，成功的应用于寻找与过敏症有关的蛋白质。应用于寻找与过敏症有关的蛋白质。