血型鉴定与交叉配血 .ppt

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1、血型鉴定与交叉配血血型鉴定与交叉配血医学检验系医学检验系 陈丽华陈丽华一、ABO血型鉴定l盐水凝集法l玻片法l试管法l凝胶微柱法l检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判断血型。l常规的方法包括正向定型与反向定型正向定型：已知抗体特异性的血清检查红细胞抗原反向定型：已知血型红细胞检查血清抗体血型鉴定原理血型鉴定原理正定型结果分析正定型结果分析抗抗A血清血清抗抗B血清血清抗抗A、B血清血清被被检检红红细细胞胞A型型正定型结果分析正定型结果分析抗抗A血清血清抗抗B血清血清抗抗A、B血清血清被被检检红红细细胞胞B型型正定型结果分析正定型结果分析O型型抗抗A血清血

2、清抗抗B血清血清抗抗A、B血清血清被被检检红红细细胞胞注意：正定型时抗注意：正定型时抗A（）抗（）抗B（）抗（）抗A、B管（）管（）,应考虑到是否为亚型。应追踪。应考虑到是否为亚型。应追踪。正定型结果分析正定型结果分析抗抗A血清血清抗抗B血清血清抗抗A、B血清血清被被检检红红细细胞胞AB型型反定型结果分析反定型结果分析（被检血清和标准红细胞）（被检血清和标准红细胞）A型型RBCB型型RBC+O型型RBC血型血型A型型B型型O型型AB型型注意注意:被检血清被检血清O型型RBC凝集，应考虑含有不凝集，应考虑含有不规则抗体或其他血型抗体。应追踪。规则抗体或其他血型抗体。应追踪。被被 检检 血血 清清

3、表示凝集，表示无凝集表示凝集，表示无凝集对抗血清的要求l高度特异，只能与相应的红细胞抗原发生凝集，无非特异性凝集，l高效价，抗A血清效价在1:128以上，抗B血清效价在1:64以上。l高亲和力，15秒内出现凝集，其强度为3分钟时凝块1mm2。l无冷凝集素。l无菌。分离血清后56，30min灭活。ABO 血血 型型 鉴鉴 定定1生理盐水凝集法l ABO血型抗体一般是IgM，属于完全抗体lIgM抗体分子链较长，能克服红细胞表面排斥力，同时分子量较大，它能与相应抗原特异性结合，在生理盐水中发生肉眼可见的凝集现象。ABO 血血 型型 鉴鉴 定定原理原理IgM抗体凝集红细胞示意图IgM在盐水介质中产生凝

4、集在盐水介质中产生凝集 玻片法：操作简单，不需要离心，适于大规模血型普查。反应时间长，易忽略较弱的凝集而导致定型错误。不适于反定型。ABO 血血 型型 鉴鉴 定定镜检证实镜检证实ABO 血血 型型 鉴鉴 定定（玻片法）（玻片法）抗A血清1滴抗B血清1滴加5红细胞悬液1滴，混匀连续转动玻片15min凝集无凝集抗A+B血清1滴试管法：需时间短，适用于急诊定型。可正反定型。可发现亚型或较弱抗原抗体反应，结果判断可靠，为常规检查方法。ABO 血血 型型 鉴鉴 定定正反定型结果不一致的解决办法首先重复试验，如果仍然不符继续下列试验。重新采集新鲜血液标本，以纠正因污染或样本错误造成的不符合。多次洗涤被测红

5、细胞和标准红细胞，除去可能会影响试验结果的血浆中或红细胞保存试剂中的化学成分。用抗A1、抗A+B检测红细胞。ABO血血型型鉴鉴定定（盐盐水水法法）注注意意事事项项如怀疑血清中有抗A1，可用数份A2红细胞标本进行检验。如果试验结果未见凝集，应将反应管至少在室温和40分别放置30min，用显微镜检查。若怀疑是由于抗原减弱造成的正反定型不符，可进一步做木瓜酶试验、直接抗球蛋白试验、吸收放散试验等加以鉴别。正反定型结果不一致的解决办法ABO血血型型鉴鉴定定（盐盐水水法法）注注意意事事项项2凝胶微柱法l凝胶具有分子筛效应和亲合效应l亲合效应：红细胞抗原与相应抗体结合l分子筛效应：低速离心后，凝集红细胞悬

6、浮在凝胶中，而未被抗体结合的红细胞则沉于凝胶底部（管底尖部）。l结果观察：肉眼/血型分析仪ABO 血血 型型 鉴鉴 定定l操作标准化，结果特异、准确可靠，重复性好、灵敏度高。l可手工、半自动及全自动操作l不足之处：需要特殊试剂和离心机成本较高。ABO 血血型型鉴鉴定定（凝凝胶胶微微柱柱法法）全自动血全自动血型仪型仪数字血数字血型仪型仪【原理】凝胶具有分子筛效应和亲合效应，在微株凝胶介质中红细胞抗原与相应抗体结合，经低速离心，凝集的红细胞悬浮在凝胶上层，而未和抗体结合的红细胞则沉于凝胶底部（管底尖部）。【器材】微量吸样枪，一次性吸头，微柱凝胶卡专用水平离心机。【试剂】特异性凝胶微柱卡ABO 血血

7、型型鉴鉴定定（凝凝胶胶微微柱柱法法）【操作】（1）将被检者红细胞（不用洗涤）配成23生理盐水悬液，向已标记好的特异性凝胶微柱卡的微管反应腔内加50L.（2）立即水平离心1000r/min,10min.（3）观察及判断血型结果阳性：对照管细胞沉淀在管底，检测管凝集块在胶上或胶中。阴性：对照管和检测管细胞沉淀均在管底。试验失败：对照管细胞在胶上或 胶中，应重新做试验。（4）报告方式：同生理盐水法。ABO 血血型型鉴鉴定定（凝凝胶胶微微柱柱法法）注意事项1.离心机选择：一般使用微柱凝胶卡专用水平离心机。使凝集复合物不偏向一侧，特别是阴性结果不偏向管底之一侧，以免造成弱阳性假象。2.操作：每种微柱凝胶

8、卡分为反应腔和凝胶分离柱两部分。向反应腔内要先加红细胞，后加血清或抗体。3.离心：为了应用不同离心半径和不同离心机进行凝胶试验，应通过试验设定每台离心机的最佳时间和速度。ABO 血血型型鉴鉴定定（凝凝胶胶微微柱柱法法）lABO血型鉴定错误可以引起严重的后果。l鉴定结果错误因素主要有技术问题及ABO血型本身的问题。二、交叉配血 本演示文稿可能包含观众讨论和即本演示文稿可能包含观众讨论和即席反应。使用席反应。使用 PowerPoint 可以可以跟踪演示时的即席反应，跟踪演示时的即席反应，在幻灯片放映中，右键单击鼠标在幻灯片放映中，右键单击鼠标请选择请选择“会议记录会议记录”选择选择“即席反应即席反

9、应”选项卡选项卡必要时输入即席反应必要时输入即席反应单击单击“确定确定”撤消此框撤消此框此动作将自动在演示文稿末尾创建此动作将自动在演示文稿末尾创建一张即席反应幻灯片，包括您的一张即席反应幻灯片，包括您的观点。观点。l交叉配血是在输血前必须做的试验。l交叉配血中最重要的是ABO血型配合，必需ABO血型相同，且交叉配血无凝集才能输血。（一）交叉配血的重要性（二）交叉配血一些基本概念 l 概念：是检查供血者与受血者是否含有不相合的抗原合抗体成分的试验，主要是检查受血者血清中有无破坏献血者RBC的抗体。l供血者红细胞与受血者血清反应（主侧交叉配血）l受血者红细胞与供血者血清反应（次侧交叉配血）本演示

10、文稿可能包含观众讨论和即本演示文稿可能包含观众讨论和即席反应。使用席反应。使用 PowerPoint 可以可以跟踪演示时的即席反应，跟踪演示时的即席反应，在幻灯片放映中，右键单击鼠标在幻灯片放映中，右键单击鼠标请选择请选择“会议记录会议记录”选择选择“即席反应即席反应”选项卡选项卡必要时输入即席反应必要时输入即席反应单击单击“确定确定”撤消此框撤消此框此动作将自动在演示文稿末尾创建此动作将自动在演示文稿末尾创建一张即席反应幻灯片，包括您的一张即席反应幻灯片，包括您的观点。观点。献血者献血者 受血者受血者红细胞红细胞 红细胞红细胞血清血清 血清血清交叉配血目的交叉配血目的发现发现ABO血型鉴定的

11、错误。血型鉴定的错误。发现不规则凝集素。如冷凝集素。发现不规则凝集素。如冷凝集素。发现其他血型抗体和一些不规则抗体。发现其他血型抗体和一些不规则抗体。（三）交叉配血方法 l1、室温盐水配血法（只能检出IgM型血型抗体）l2、聚凝胺法l3、抗人球蛋白法l4、蛋白酶法l5、微柱凝胶法方法选择原则方法选择原则无输血及妊娠史者，只需作盐水配血。无输血及妊娠史者，只需作盐水配血。有输血史，妇女有原因不明的流产史及新生有输血史，妇女有原因不明的流产史及新生儿溶血病者，应用木瓜酶或抗人球蛋白、聚凝儿溶血病者，应用木瓜酶或抗人球蛋白、聚凝胺介质法。胺介质法。有多发性骨髓瘤，进行性结核，肝损伤，输有多发性骨髓瘤

12、，进行性结核，肝损伤，输过右旋糖酐的病人，为避免假阳性，作抗人球过右旋糖酐的病人，为避免假阳性，作抗人球蛋白配血。蛋白配血。1、室温盐水配血法【原理】天然IgM类血型抗体与对应红细胞在室温下的盐水介质中出现凝集反应。通过离心，观察受血者血清与供血者红细胞（主侧）以及受血者红细胞与供血者血清（次侧）之间有无凝集的现象，判断受血者与供血者之间有无ABO血型不合的现象。交交 叉叉 配配 血血判断配血是否相合ABO同型配血，主、次侧均无溶血及凝集，血型相合，可以输血；主、次侧任何一管发生溶血或凝集，不可输血，应查找原因。异型配血时，主侧无凝集无溶血，次侧有凝集无溶血，可以输少量血；如主侧、次侧均不凝集

13、或主侧凝集，不能输血，需查找原因交交 叉叉 配配 血血（盐盐水水凝凝集集法法）报告方式（1）受血者xxx（X型）血清供血者xxx（X型）红细胞 凝集与否及强弱程度（2）供血者xxx（X型）血清受血者xxx（X型）红细胞 凝集与否及强弱程度（3）受血者xxx与供血者xxx配血是否相合交交 叉叉 配配 血血（盐盐水水凝凝集集法法）主侧配血管次侧配血管DC1滴PS1滴PC1滴DS1滴1000r/min离心1min观察上层液有无溶血轻摇试管肉眼观察有无凝集有凝集无凝集镜检证实镜检证实交叉配血盐水介质法操作示意图交叉配血盐水介质法操作示意图【注意事项】1.如果对患者的输血史或妊辰史不明，必须使用48h内

14、的标本。2.不能使用溶血标本。3.配血后，受血者/供血者的全部标本须于26冰箱保存7d以备复查。交交 叉叉 配配 血血（盐盐水水凝凝集集法法）【方法学评价】本法简易、经济、快速，缺点是仅用于检查ABO血型系统的IgM血型抗体是否相配，不能检出不相配的IgG血型抗体。交交 叉叉 配配 血血（盐盐水水凝凝集集法法）2、聚凝胺介质配血法（MPT）【原理】：聚凝胺是带有高价阳离子的多聚季氨盐，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，减少细胞间排斥力，缩小了其间之距离，出现非特异性凝集。低离子强度溶液降低红细胞的Zeta电位，可进一步增加抗原抗体见的吸引力。枸橼酸盐解聚液可消除聚凝胺的正电荷

15、，使非特异性凝集消散，但IgM或IgG类血型抗体与红细胞产生的特异性凝集不会散开。交交 叉叉 配配 血血交交 叉叉 配配 血血（MPT）主侧配血管次侧配血管DC1滴PS1滴PC1滴DS1滴1000r/min离心1min主侧、次侧配血管凝集凝集不凝集：试剂无效不凝集：试剂无效交叉配血凝聚胺介质法操作示意图交叉配血凝聚胺介质法操作示意图LISS液0.6ml混匀混匀加凝聚胺加凝聚胺2滴，滴，混匀混匀15s弃去上清弃去上清1000r/min离心1min加解聚液2滴离离心心判断配血是否相合1分分钟钟【方法学评价】聚凝胺介质法可加快凝集反应速度，使原来在盐水介质中不能凝集红细胞的抗体发生凝集，提高反应灵敏

16、度，能检测IgM、IgG等引起溶血反应的几乎所有规则与不规则抗体，适用于各类输血患者的配血。故该法具有快速、灵敏、结果可靠、能捡出完全抗体及不完全抗体等优点。交交 叉叉 配配 血血（MPT）【方法学评价】本法是确定不完全抗体最可靠的方法，但操作较繁琐，需多次洗涤，需要时间常，试剂较贵，故始终未能成为临床常规的配血方法。交叉配血交叉配血（抗人球蛋白法）（抗人球蛋白法）交叉配血试验的临床意义交叉配血试验的临床意义l 1 1进一步验证受血者和供血者血型鉴进一步验证受血者和供血者血型鉴定是否正确，发现定是否正确，发现ABOABO系统的不规则抗体，系统的不规则抗体，以避免血型鉴定错误而导致的输血后的严以

17、避免血型鉴定错误而导致的输血后的严重溶血反应。重溶血反应。l 2 2发现其他的血型抗体发现其他的血型抗体 受、供血者如果受、供血者如果ABOABO血型相同，但其他血型不同时，在交叉配血型相同，但其他血型不同时，在交叉配血时也可出现凝集，为避免异型血输入后的血时也可出现凝集，为避免异型血输入后的溶血反应，在目前许多实验室都不能进行稀溶血反应，在目前许多实验室都不能进行稀有血型鉴定的情况下，全靠交叉配血发现这有血型鉴定的情况下，全靠交叉配血发现这些血型的不同及免疫抗体的存在。些血型的不同及免疫抗体的存在。l 3.当受血者一次输血超过16002000m1，或在48小时内输入5L或更多血时,称为大量输

18、血,这时就需要多个供血者的血液,在配血时不但受血者和供血者之间要交叉配血,多个供血者之间也应互相交叉配血,为保证受血者的安全，要求主侧、次侧及献血员之间交叉配血均不凝集时，方可输血。l 4.在急诊配血时,对急需情况可采用试管法配血，在15min内发血。对特急情况应立即发给O型浓缩红细胞或低凝集价的O型全血。然后尽快复查血型和配血，如表现有配血禁忌，应立即通知负责医师及时处理。交叉配血试验的注意事项l1用于交叉配血的病人（受血者）血液标用于交叉配血的病人（受血者）血液标本应该是抽取的新鲜血，供血者的标本是本应该是抽取的新鲜血，供血者的标本是刚从血袋剪下来的原已加热封闭两端小管刚从血袋剪下来的原已

19、加热封闭两端小管的血液。的血液。l 2采用试管法作交叉配血试验，最好采用试管法作交叉配血试验，最好不用玻片法。不用玻片法。l3 3用生理盐水洗涤红细胞去除血浆，预防用生理盐水洗涤红细胞去除血浆，预防纤维凝块的形成。纤维凝块的形成。l4 4配血管中发生溶血现象，表明有抗原抗配血管中发生溶血现象，表明有抗原抗体反应同时还有补体参与，是配血不合的体反应同时还有补体参与，是配血不合的严重情况，应十分重视。严重情况，应十分重视。l5 5盐水配血试验阴性，但有反复输血史或盐水配血试验阴性，但有反复输血史或妊娠史的受血者，应加酶法、抗人球蛋白妊娠史的受血者，应加酶法、抗人球蛋白法等配血。法等配血。l 6 6

20、为确保输血的安全，应输同型血。为确保输血的安全，应输同型血。三、血型鉴定与交叉配血的异常及其克服三、血型鉴定与交叉配血的异常及其克服办法办法l（一）责任性错误（一）责任性错误l 血型鉴定和交叉配血的技术并不复杂，血型鉴定和交叉配血的技术并不复杂，因配血错误而导致输入不合血液的事故中，因配血错误而导致输入不合血液的事故中，大多数是因为不严格执行操作规程或操作大多数是因为不严格执行操作规程或操作过程中精神不集中所致，因此为杜绝责任过程中精神不集中所致，因此为杜绝责任性错误首先应该熟悉操作规程并严格执行。性错误首先应该熟悉操作规程并严格执行。l（二）假（二）假 阴阴 性性l1.1.标准血清不符合要求

21、标准血清不符合要求l2.2.被检红细胞抗原性减弱被检红细胞抗原性减弱l3.3.红细胞悬液浓度配置不当红细胞悬液浓度配置不当l4.4.将溶血反应误认为不凝集将溶血反应误认为不凝集l5.5.血型物质的中和作用血型物质的中和作用 l（三）假（三）假 阳阳 性性l 1.1.红细胞呈缗钱状排列红细胞呈缗钱状排列l 2.2.冷凝集冷凝集l 3.3.全凝集与多凝集全凝集与多凝集l 4.4.类类B B抗原抗原l 5.5.自身免疫性温性抗体自身免疫性温性抗体冷凝集l冷凝集素是指冷反应型抗红细胞抗体，这些冷凝集素是指冷反应型抗红细胞抗体，这些自身抗体只能在低温时与红细胞膜相关抗原自身抗体只能在低温时与红细胞膜相关

22、抗原结合。疑为存在冷凝集时，正定型采用经结合。疑为存在冷凝集时，正定型采用经37度生理盐水洗涤的红细胞度生理盐水洗涤的红细胞3次，反定型采用患次，反定型采用患者经者经4度放置度放置1hr后分离的血清，将反应管放后分离的血清，将反应管放37度水浴度水浴5min后观察结果。交叉配血存在冷后观察结果。交叉配血存在冷凝集现象时，仍然认为交叉配血是相合的，凝集现象时，仍然认为交叉配血是相合的，可以输血。但需提醒临床保温输血。可以输血。但需提醒临床保温输血。红细胞呈缗钱状排列l某些疾病如肝病、肾炎因患者血清中白蛋某些疾病如肝病、肾炎因患者血清中白蛋白含量低而致球蛋白含量相对或绝对性增白含量低而致球蛋白含量

23、相对或绝对性增高，使红细胞成钱串状排列，外观类似凝高，使红细胞成钱串状排列，外观类似凝集，真与假的区别是在镜下观察时，假凝集，真与假的区别是在镜下观察时，假凝集红稀薄啊成钱串状排列，形状基本完整，集红稀薄啊成钱串状排列，形状基本完整，加一滴等渗盐水于玻片上并混匀后钱串状加一滴等渗盐水于玻片上并混匀后钱串状排列消失，而真凝集加等渗盐水红细胞不排列消失，而真凝集加等渗盐水红细胞不会散开。会散开。全凝集或多凝集现象l正常人红细胞上有正常人红细胞上有T抗原，血清中有抗抗原，血清中有抗T，但因红，但因红细胞表面存在的唾液酸使细胞表面存在的唾液酸使T抗原无活性，如果红细抗原无活性，如果红细胞被细菌污染，细

24、菌酶消化了红细胞表面的唾液胞被细菌污染，细菌酶消化了红细胞表面的唾液酸，暴露出酸，暴露出T抗原而被激活，可与多数人血清凝集抗原而被激活，可与多数人血清凝集称为多凝集，如与所有人血清都凝集称为全凝集。称为多凝集，如与所有人血清都凝集称为全凝集。出现这两种现象时可用多份出现这两种现象时可用多份AB型血清加以证实，型血清加以证实，因此种现象与因此种现象与AB型血清也发生凝集，应重新抽血。型血清也发生凝集，应重新抽血。血型鉴定与交叉配血的异常及其克服血型鉴定与交叉配血的异常及其克服办法办法RBCT抗原抗原 （无活性）（无活性）RBCT抗原抗原 （有活性）（有活性）血清血清抗抗T抗体抗体 （任何人）（任

25、何人）凝集凝集 +细菌细菌 酶酶 激活激活 T T凝集现象凝集现象 凝集特点：凝集特点：44室温室温3737。血型鉴定与交叉配血的异常及其克服血型鉴定与交叉配血的异常及其克服办法办法l类B抗原OORBCRBCA ARBCRBC 凝集 ORBC类类B抗原抗原ARBC类类B抗原抗原 抗B 细菌大肠细菌大肠细菌大肠细菌大肠杆菌杆菌杆菌杆菌OOOO86868686感染感染故常把故常把O型误定型误定B型，型，A型误定为型误定为AB型，呈假型，呈假阳性。病情好转时类阳性。病情好转时类B消失。消失。交叉配血试验中的不配合问题交叉配血试验中的不配合问题首先应考虑受血者和供血者的血型鉴定是否有首先应考虑受血者和

26、供血者的血型鉴定是否有错。必须重新鉴定血型，必要时进行错。必须重新鉴定血型，必要时进行Rh血型鉴血型鉴定及抗体筛选。定及抗体筛选。其次，应注意有无特异性同种抗体、特异性未其次，应注意有无特异性同种抗体、特异性未知的同种抗体存在。知的同种抗体存在。交叉配血试验中不配合的处理交叉配血试验中不配合的处理2、与多个献血者配血不合，如为盐水介质配血法，、与多个献血者配血不合，如为盐水介质配血法，应考虑应考虑 ABO血型鉴定是否有错。必须重新鉴定血型鉴定是否有错。必须重新鉴定血型血型 ABO亚型不合，做亚型及不规则抗体的鉴亚型不合，做亚型及不规则抗体的鉴定。定。非特异性凝集。如冷凝集。非特异性凝集。如冷凝集。如为抗人球蛋白配血不合，应考虑如为抗人球蛋白配血不合，应考虑Rh或其他系统或其他系统免疫性抗体的存在，应做免疫性抗体的存在，应做Rh血型鉴定并用系列标血型鉴定并用系列标准准RBC检测病人血清，确定抗体性质。检测病人血清，确定抗体性质。1、与个别同型献血者不能配合，可另选同型献血、与个别同型献血者不能配合，可另选同型献血者进行配血。者进行配血。