临床病原体检查 .ppt
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1、临床病原体检查目的临床病原体检查目的明确感染是否发生以及病原体的类型。明确感染是否发生以及病原体的类型。提供体外抗微生物药物敏感实验的结果。提供体外抗微生物药物敏感实验的结果。密切监视烈性传染病与新的传染病的发密切监视烈性传染病与新的传染病的发生,及时向行政主管部门报告。生,及时向行政主管部门报告。配合相关机构进行流行病学调查。配合相关机构进行流行病学调查。感染性疾病的现状感染性疾病的现状感染性疾病的病原体:细菌、病毒、支感染性疾病的病原体:细菌、病毒、支原体、衣原体、立克次体原体、衣原体、立克次体 以及寄生虫等。以及寄生虫等。自从抗生素的发现和预防接种的实施,自从抗生素的发现和预防接种的实施
2、,许多曾严重危害人体健康的病原体已消许多曾严重危害人体健康的病原体已消灭或基本消灭。灭或基本消灭。新的传染病陆续被发现,曾绝迹的老传新的传染病陆续被发现,曾绝迹的老传染病部分死灰复燃。染病部分死灰复燃。条件致病菌感染比例增加。条件致病菌感染比例增加。多重耐药菌株不断出现。多重耐药菌株不断出现。临床病原体检查的基本程序临床病原体检查的基本程序医生、护士、病人、检验师:正确采集医生、护士、病人、检验师:正确采集运送标本。运送标本。检验科:直接镜检、免疫学和分子生物检验科:直接镜检、免疫学和分子生物检测、病原体分离培养鉴定、药敏实验检测、病原体分离培养鉴定、药敏实验报告结果。报告结果。医生:明确诊断
3、、合理用药。医生:明确诊断、合理用药。标本采集的基本原则标本采集的基本原则根据病史与临床表现确定标本采集的类根据病史与临床表现确定标本采集的类型与部位,尽量采集病变明显部位标本。型与部位,尽量采集病变明显部位标本。在发病的早期或急性期采集标本,最好在发病的早期或急性期采集标本,最好在抗生素使用前(如使用过抗生素应在在抗生素使用前(如使用过抗生素应在申请单上注明)。申请单上注明)。采集标本防止污染,并置于无菌容器,采集标本防止污染,并置于无菌容器,加盖密封、立即送检。加盖密封、立即送检。标本必须贴上标签,与检验申请单同时标本必须贴上标签,与检验申请单同时送检。送检。检验申请单的基本内容检验申请单
4、的基本内容The patient,s name and hospital number.Age and sex.Collection date and time.Diagnosis.Exact nature and source of the specimen.Ordering physician.Immunization history and antimicrobial therapy.Objective.标本送检标本送检标本要求在标本要求在30min内送检,否则影响阳性内送检,否则影响阳性率。率。烈性传染病标本需专人护送。烈性传染病标本需专人护送。检验科可拒收部分标本检验科可拒收部分标本
5、The information on the label does not match the information on the requisition.The specimen has been transported at the improper temperature or in improper medium.The quantity of specimen is insufficient for testing.The specimen is leaking.检验科可拒收部分标本检验科可拒收部分标本The specimen transport time exceeds 2 ho
6、urs postcollection and the specimen is not preserved.The specimen was received in a fixative which kill any microorganism present.The specimen is dried.The specimen has been received for anaerobic culture from a site known to have anaerobes as part of normal flora.血液标本的采集血液标本的采集适应症:疑似菌血症、败血症或脓毒血适应症:
7、疑似菌血症、败血症或脓毒血症的病人。症的病人。一般在抗生素使用前,于发热初期或高一般在抗生素使用前,于发热初期或高峰期采血。峰期采血。24小时内采血小时内采血23次可提高阳性率。次可提高阳性率。血液与培养基的比例为血液与培养基的比例为1:10,一般成人,一般成人血量血量1020ml,婴儿,婴儿1-5ml。血液标本的采集方法血液标本的采集方法呼吸道标本采集呼吸道标本采集类型:鼻咽拭、痰和类型:鼻咽拭、痰和经气管采集的标本。经气管采集的标本。上呼吸道存在正常菌上呼吸道存在正常菌群,在采集标本与结群,在采集标本与结果分析时应予考虑果分析时应予考虑。痰标本的采集痰标本的采集采集时间:晨痰,且采集时间:
8、晨痰,且在取痰前用清水反复在取痰前用清水反复漱口。漱口。方法:(方法:(1)自然咳)自然咳痰法:(痰法:(2)气管镜)气管镜下采集法;(下采集法;(3)气)气管穿刺法。管穿刺法。尿标本的采集尿标本的采集无菌采集中段尿无菌采集中段尿如考虑厌氧菌感染,如考虑厌氧菌感染,采取膀胱穿刺法采集采取膀胱穿刺法采集标本。标本。排尿困难者考虑导尿排尿困难者考虑导尿采集标本采集标本。粪便标本采集粪便标本采集自然排便,挑取脓、血或粘液部分于清自然排便,挑取脓、血或粘液部分于清洁容器中送检。洁容器中送检。排便困难者,采用直肠拭子采集。排便困难者,采用直肠拭子采集。怀疑霍乱弧菌感染引起的腹泻,立即接怀疑霍乱弧菌感染引
9、起的腹泻,立即接种或将标本置于碱性蛋白胨或卡种或将标本置于碱性蛋白胨或卡-布运送布运送培养液送检。培养液送检。传染性腹泻应连续送检传染性腹泻应连续送检3次。次。生殖道标本生殖道标本男性:无菌采集尿道男性:无菌采集尿道口分泌物或前列腺液口分泌物或前列腺液。生殖道标本生殖道标本女性:用无菌棉纤采集阴道或宫颈分泌女性:用无菌棉纤采集阴道或宫颈分泌物。怀疑厌氧菌感染,应采用阴道后穹物。怀疑厌氧菌感染,应采用阴道后穹隆穿刺法,并立即接种于厌氧平板。隆穿刺法,并立即接种于厌氧平板。疑似梅毒螺旋体感染,直接从外生殖器疑似梅毒螺旋体感染,直接从外生殖器硬下疳蘸取渗出液,置于盖玻片上,立硬下疳蘸取渗出液,置于盖
10、玻片上,立即送检。即送检。脑脊液脑脊液由临床医生采用腰椎穿刺,抽取由临床医生采用腰椎穿刺,抽取2-3ml,置于无菌容器中立即送检,不能暂时保置于无菌容器中立即送检,不能暂时保存于冰箱中。存于冰箱中。胸腹水等穿刺液标本胸腹水等穿刺液标本标本采集应在用药前或停止用药后标本采集应在用药前或停止用药后12天天后进行。后进行。用无菌注射器抽取可疑标本,分别置于用无菌注射器抽取可疑标本,分别置于抗凝与不抗凝无菌容器中立即送检。抗凝与不抗凝无菌容器中立即送检。怀疑厌氧菌感染,采用床边接种为宜。怀疑厌氧菌感染,采用床边接种为宜。脓液及创伤感染分泌物标本脓液及创伤感染分泌物标本开放性脓肿及脓性分泌物:用无菌棉纤
11、开放性脓肿及脓性分泌物:用无菌棉纤采取脓液或病灶深部分泌物,置于斯氏采取脓液或病灶深部分泌物,置于斯氏运送培养基送检。运送培养基送检。封闭性脓肿:局部消毒后,用注射器抽封闭性脓肿:局部消毒后,用注射器抽取,怀疑厌氧菌感染,应隔绝空气采集。取,怀疑厌氧菌感染,应隔绝空气采集。大面积烧伤的创面分泌物:用无菌棉纤大面积烧伤的创面分泌物:用无菌棉纤多点采取脓液或分泌物,置于无菌试管多点采取脓液或分泌物,置于无菌试管中送检中送检。检查方法检查方法直接显微镜检查。直接显微镜检查。病原体抗原与抗体的检测。病原体抗原与抗体的检测。病原体核酸的检测。病原体核酸的检测。病原体的分离培养与鉴定。病原体的分离培养与鉴
12、定。SARS(severe acute respiratory syndrome)病原体)病原体的确定的确定电子显微镜发现为电子显微镜发现为某种冠状病毒某种冠状病毒基因组测序锁定为基因组测序锁定为新型冠状病毒新型冠状病毒复制出相应的动物模型复制出相应的动物模型建立新的检测方法建立新的检测方法PCR法法间接免疫荧光法间接免疫荧光法ELISA直接显微镜检查的目的与评价直接显微镜检查的目的与评价(1)染色标本目的:了解细菌的形染色标本目的:了解细菌的形态、染色性或观察宿主细胞内态、染色性或观察宿主细胞内包涵体。包涵体。评价:为临床初步诊断提供依评价:为临床初步诊断提供依据。如据。如CSF找到抗酸杆菌
13、,应初找到抗酸杆菌,应初步考虑结核分枝杆菌感染步考虑结核分枝杆菌感染。革兰氏阳性球菌革兰氏阳性球菌革兰氏阴性杆菌革兰氏阴性杆菌墨汁染色找墨汁染色找新型隐球菌新型隐球菌 抗酸染色抗酸染色直接显微镜检查的目的与评价直接显微镜检查的目的与评价(2)不染色标本:用于观不染色标本:用于观察病原体的大小、形察病原体的大小、形态与运动等特性。态与运动等特性。结果评价:部分病原结果评价:部分病原体可借此初步诊断,体可借此初步诊断,如暗视野显微镜下见如暗视野显微镜下见弹簧状螺旋体,应怀弹簧状螺旋体,应怀疑梅毒螺旋体的感染。疑梅毒螺旋体的感染。病原体分离培养与鉴定的目的病原体分离培养与鉴定的目的明确感染病原体。明
14、确感染病原体。为临床提供体外抗微为临床提供体外抗微生物药物敏感试验结生物药物敏感试验结果果。细菌分离培养与鉴定的结果评价细菌分离培养与鉴定的结果评价正常人群的无菌体液中检测到细菌,应正常人群的无菌体液中检测到细菌,应考虑细菌为感染的病原体。考虑细菌为感染的病原体。存在正常菌群的标本检测到细菌,应结存在正常菌群的标本检测到细菌,应结合细菌的量考虑是否为致病菌。合细菌的量考虑是否为致病菌。如临床表现支持感染,但培养阴性,应如临床表现支持感染,但培养阴性,应考虑为标本不合格、培养不恰当等因素。考虑为标本不合格、培养不恰当等因素。直接镜检找到病原体,而培养阴性,应直接镜检找到病原体,而培养阴性,应考虑
15、有考虑有L细菌、厌氧菌或苛氧菌感染。细菌、厌氧菌或苛氧菌感染。病毒分离培养与鉴定的结果评价病毒分离培养与鉴定的结果评价必须结合流行病学资料、临床表现、标必须结合流行病学资料、临床表现、标本来源及病毒种类加以分析。本来源及病毒种类加以分析。从组织、血液以及脑脊液中分离到病毒从组织、血液以及脑脊液中分离到病毒可明确诊断。可明确诊断。从呼吸道、肠道等分离到病毒,如该病从呼吸道、肠道等分离到病毒,如该病毒人体不能长期携带,有诊断价值,如毒人体不能长期携带,有诊断价值,如麻疹病毒、流感病毒等。反之需相应的麻疹病毒、流感病毒等。反之需相应的临床表现,才有病原学意义,如巨细胞临床表现,才有病原学意义,如巨细
16、胞病毒,肠道病毒等。病毒,肠道病毒等。阴性不能排除病毒感染。阴性不能排除病毒感染。病原体核酸的检测病原体核酸的检测聚合酶链式反应:扩增聚合酶链式反应:扩增病原体微生物特异的病原体微生物特异的DNA或或 RNA片段。片段。探针杂交法:通过已知探针杂交法:通过已知序列的探针与病原体的序列的探针与病原体的核苷酸杂交,用以了解核苷酸杂交,用以了解病原体的有无病原体的有无。病原体核酸检测结果评价病原体核酸检测结果评价是检测病原体微生物最灵敏的方法,但是检测病原体微生物最灵敏的方法,但具有一定的假阳性与假阴性。具有一定的假阳性与假阴性。阳性只表明存在某种病原体的核酸,是阳性只表明存在某种病原体的核酸,是否
17、正被感染应结合临床具体分析。否正被感染应结合临床具体分析。病原体抗原与抗体的检测病原体抗原与抗体的检测特异性特异性 IgM可作为感染性可作为感染性疾病的早期诊断指标,且疾病的早期诊断指标,且可区分原发与复发感染。可区分原发与复发感染。特异性特异性 IgG,尤其双份血,尤其双份血清的滴度呈清的滴度呈4倍或倍或4倍以上倍以上升高,考虑病原体感染。升高,考虑病原体感染。排除交叉抗原的影响,病排除交叉抗原的影响,病原体抗原检测可明确感染原体抗原检测可明确感染的病原体。的病原体。第二节第二节 临床常见病原体检查临床常见病原体检查临床常见病原体为:细菌、病毒、支原临床常见病原体为:细菌、病毒、支原体、衣原
18、体、立克次体体、衣原体、立克次体 以及寄生虫等。以及寄生虫等。细菌感染检查项目的选择细菌感染检查项目的选择普通细菌:常采用直接镜检、分离培养普通细菌:常采用直接镜检、分离培养与鉴定明确病原体。与鉴定明确病原体。难培养或培养要求高的细菌:综合运用难培养或培养要求高的细菌:综合运用免疫学或分子生物学检测,如结核分枝免疫学或分子生物学检测,如结核分枝杆菌感染以及幽门螺杆菌感染等。杆菌感染以及幽门螺杆菌感染等。流行病学调查:病原体抗体检测,如流行病学调查:病原体抗体检测,如ASO试验与试验与Widal反应等。反应等。病毒感染检查项目的选择病毒感染检查项目的选择细胞培养快速复制的病毒:细胞培养。细胞培养
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