自身免疫病与自身抗体的检测 .ppt
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1、自身免疫病与自身抗体的检测自身免疫病与自身抗体的检测与自身免疫性疾病相关的基本概念与自身免疫性疾病相关的基本概念免疫免疫 机体识别和排除抗原性异物的功能,机体识别和排除抗原性异物的功能,也就是机体免疫系统对抗原刺激所产生也就是机体免疫系统对抗原刺激所产生的以排除抗原为目的的生理过程。的以排除抗原为目的的生理过程。体液免疫体液免疫-产生抗体产生抗体细胞免疫细胞免疫-致敏淋巴细胞致敏淋巴细胞与自身免疫性疾病相关的基本概念与自身免疫性疾病相关的基本概念隐蔽抗原:隐蔽抗原:机体有些组织成分由于解剖机体有些组织成分由于解剖位置的特殊性,正常情况下终生不与免位置的特殊性,正常情况下终生不与免疫系统接触,称
2、为隐蔽抗原。疫系统接触,称为隐蔽抗原。眼晶状体、葡萄膜眼晶状体、葡萄膜-交感性眼炎;交感性眼炎;精子精子男性不育。男性不育。与自身免疫性疾病相关的基本概念与自身免疫性疾病相关的基本概念自身免疫:自身免疫:是指机体免疫系统对是指机体免疫系统对自身抗自身抗原原发生免疫应答,产生自身抗体和(或)发生免疫应答,产生自身抗体和(或)致敏淋巴细胞的现象。致敏淋巴细胞的现象。与自身免疫性疾病相关的基本概念与自身免疫性疾病相关的基本概念自身免疫病:自身免疫病:是指在各种内外因素的作用下,是指在各种内外因素的作用下,自身免疫反应过强,超过了生理性自自身免疫反应过强,超过了生理性自身免疫反应的强度且持续相当长时间
3、,身免疫反应的强度且持续相当长时间,造成对正常细胞、器官的功能与结构造成对正常细胞、器官的功能与结构的破坏,呈现与此损伤相关的临床表的破坏,呈现与此损伤相关的临床表现及免疫学异常。现及免疫学异常。自身免疫性疾病发生的原因自身免疫性疾病发生的原因机体抗原特异性淋巴细胞发生异常机体抗原特异性淋巴细胞发生异常,对正,对正常组织发生免疫应答状态;常组织发生免疫应答状态;机体自身组织成分发生改变机体自身组织成分发生改变从而引起的免从而引起的免疫应答状态。疫应答状态。自身免疫病的基本特征自身免疫病的基本特征多数自身免疫病的病因不清,有些多数自身免疫病的病因不清,有些自身免疫病的发生和复发似乎与某自身免疫病
4、的发生和复发似乎与某些外因有关,但大多数自身免疫病些外因有关,但大多数自身免疫病是是“自发自发”地发生的,目前未找到地发生的,目前未找到肯定的外因。肯定的外因。自身免疫病的基本特征自身免疫病的基本特征血液中可检出血液中可检出高滴度高滴度的自身抗体和的自身抗体和(或)与自身组织成分起反应的致(或)与自身组织成分起反应的致敏淋巴细胞。敏淋巴细胞。自身免疫病的基本特征自身免疫病的基本特征组织器官损伤和功能障碍的范围取决于组织器官损伤和功能障碍的范围取决于自身抗原分布自身抗原分布:器官特异性自身免疫病:器官特异性自身免疫病:桥本氏甲状腺炎,桥本氏甲状腺炎,非器官特异性自身免疫病:非器官特异性自身免疫病
5、:如系统性红斑如系统性红斑狼疮(狼疮(SLE)。)。自身免疫病的基本特征自身免疫病的基本特征自身免疫病的发生与多因素相关,自身免疫病的发生与多因素相关,包括遗传因素、性别差异、年龄大包括遗传因素、性别差异、年龄大小、气候环境及地理位置等。小、气候环境及地理位置等。自身免疫病的基本特征自身免疫病的基本特征遗传因素:遗传因素:强直性脊柱炎(强直性脊柱炎(AS)患者患者90%为为HLA-B27阳性,然而在阳性,然而在HLA-B27阳性的人群中发生强直性脊柱炎阳性的人群中发生强直性脊柱炎的可能仅为的可能仅为2%,而第一级,而第一级HLA-B27阳性的亲属中,发生强直性脊柱阳性的亲属中,发生强直性脊柱炎
6、的危险性达炎的危险性达20%。自身免疫病的基本特征自身免疫病的基本特征 系统性红斑狼疮(系统性红斑狼疮(SLE)的家族发病率的家族发病率也较高,在也较高,在SLE第一代亲属中发病率达第一代亲属中发病率达3%-5%,同胞姐妹发病率更高,特别是,同胞姐妹发病率更高,特别是单卵双胎更为常见单卵双胎更为常见。在。在1980年的调查中年的调查中35组单卵双胎的患者中,有组单卵双胎的患者中,有22组患组患SLE,共患病率达共患病率达62.9%,而双卵双胎,而双卵双胎8组中组中仅仅1组患病,为组患病,为12.5%。自身免疫病的基本特征自身免疫病的基本特征性别差异和年龄大小:性别差异和年龄大小:强直性脊柱炎(
7、强直性脊柱炎(AS)多见于年轻男多见于年轻男性,其发病年龄从性,其发病年龄从4-90岁不等,但以岁不等,但以15-20岁多见,男女比列为岁多见,男女比列为9-10:1,但最近,但最近有人调查发现男女比列约为有人调查发现男女比列约为1.5-3:1,只,只不过女性不过女性 强直性脊柱炎患者起病缓慢,强直性脊柱炎患者起病缓慢,病情较轻,易被误诊。病情较轻,易被误诊。自身免疫病的基本特征自身免疫病的基本特征系统性红斑狼疮(系统性红斑狼疮(SLE)是最常见的自是最常见的自身免疫性疾病之一,发病的男女比列为身免疫性疾病之一,发病的男女比列为1:9,在生肓年龄甚至可高达,在生肓年龄甚至可高达1:30,而且,
8、而且多发生于多发生于20-40岁的孕龄妇女。岁的孕龄妇女。自身免疫病的基本特征自身免疫病的基本特征大多数自身免疫病呈现出发作大多数自身免疫病呈现出发作缓解缓解复发复发缓解缓解迁延的迁延的临床特征,以致成为终身痼疾。临床特征,以致成为终身痼疾。自身免疫病的基本特征自身免疫病的基本特征免疫抑制剂(肾上腺皮质激素、环免疫抑制剂(肾上腺皮质激素、环磷酰胺)治疗有一定疗效,但副作磷酰胺)治疗有一定疗效,但副作用与不良反应严重,停药后常易复用与不良反应严重,停药后常易复发。发。自身免疫性疾病临床自身免疫性疾病临床“病谱病谱”器官特异性器官特异性 非器官特异性非器官特异性桥本甲状腺炎桥本甲状腺炎 类天疱疮类
9、天疱疮 自身免疫性肾小球肾炎自身免疫性肾小球肾炎 系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮原发性粘液水肿原发性粘液水肿 恶性贫血恶性贫血 肺肾出血综合征肺肾出血综合征 干燥综合征干燥综合征甲状腺机能亢进甲状腺机能亢进 自身免疫性萎缩性胃炎自身免疫性萎缩性胃炎 绝经过早(少数病例)绝经过早(少数病例)类风湿关节炎类风湿关节炎Addisino病病 自身免疫性肝炎自身免疫性肝炎 男性不育(少数病例)男性不育(少数病例)硬皮病硬皮病1型糖尿病型糖尿病 原发性胆汁性肝硬化原发性胆汁性肝硬化 溃疡性结肠炎溃疡性结肠炎 多发性肌炎多发性肌炎/皮肌皮肌炎炎重症肌无力重症肌无力 原发性硬化性胆管炎原发性硬化性胆管炎 克隆氏
10、病克隆氏病 混合性结缔组织混合性结缔组织病病多发性硬化症多发性硬化症 自身免疫性溶血性贫血自身免疫性溶血性贫血 交感性眼炎交感性眼炎 系统性血管炎系统性血管炎脱髓鞘疾病脱髓鞘疾病 特发性血小板减少性紫癜特发性血小板减少性紫癜 晶状体源性葡萄膜炎晶状体源性葡萄膜炎 抗磷脂综合征抗磷脂综合征寻常天疱疮寻常天疱疮 特发性粒细胞减少症特发性粒细胞减少症 药物性狼疮药物性狼疮自身免疫性疾病有一百多种,发病率占世界人口的自身免疫性疾病有一百多种,发病率占世界人口的10%自身免疫性疾病自身免疫性疾病几乎遍布临床各科(非手术科)几乎遍布临床各科(非手术科)疑难疑难病症?病症?常见的自身免疫性疾病图片资料常见的
11、自身免疫性疾病图片资料系统性红斑狼疮(系统性红斑狼疮(SLE)常见的自身免疫性疾病图片资料常见的自身免疫性疾病图片资料类风湿性关节炎(类风湿性关节炎(RA)常见的自身免疫性疾病图片资料常见的自身免疫性疾病图片资料系统性硬化症(系统性硬化症(PSS)常见的自身免疫性疾病图片资料常见的自身免疫性疾病图片资料干燥综合症(干燥综合症(SS)常见的自身免疫性疾病图片资料常见的自身免疫性疾病图片资料皮肌皮肌炎炎/多发性肌炎(多发性肌炎(DM/PM)自身抗体的检测自身抗体的检测自身抗体:自身抗体:是指抗自身细胞内,细胞表是指抗自身细胞内,细胞表面和细胞外抗原的免疫球蛋白。面和细胞外抗原的免疫球蛋白。自身抗体
12、的检测自身抗体的检测自身抗体是自身免疫病的重要标记,自身抗体是自身免疫病的重要标记,每种自身免疫病都伴有特征性的自身抗体,每种自身免疫病都伴有特征性的自身抗体,某些自身抗体因对疾病的诊断具有高度的特异性,某些自身抗体因对疾病的诊断具有高度的特异性,已成为诊断某些疾病的血清标记性抗体或特异性已成为诊断某些疾病的血清标记性抗体或特异性抗体,抗体,某些自身抗体与疾病的活动性有相关性,个别的某些自身抗体与疾病的活动性有相关性,个别的自身抗体被证实参与了组织的免疫病理损伤。自身抗体被证实参与了组织的免疫病理损伤。自身抗体的检测自身抗体的检测自身抗体检测的临床意义自身抗体检测的临床意义有助于自身免疫病的早
13、期诊断;有助于自身免疫病的早期诊断;有助于判断疾病的活动性和预后,有助于判断疾病的活动性和预后,观察治疗反应,指导临床用药;观察治疗反应,指导临床用药;有助于进一步研究和阐明自身免疫有助于进一步研究和阐明自身免疫性疾病的发病机制。性疾病的发病机制。自身抗体的检测方法自身抗体的检测方法间接荧光染色技术(间接荧光染色技术(IIF)实验原理实验原理细胞、组织切片或纯化的、生化性质明确的物质细胞、组织切片或纯化的、生化性质明确的物质均可作为检测自身抗体或病原体抗体的抗原基质。均可作为检测自身抗体或病原体抗体的抗原基质。如标本为阳性,已稀释血清中的特异性抗体将与如标本为阳性,已稀释血清中的特异性抗体将与
14、包被在固相上的抗原结合。包被在固相上的抗原结合。第二步,已结合的抗体与荧光素标记的抗人抗体第二步,已结合的抗体与荧光素标记的抗人抗体结合,然后在荧光显微镜下观察结果。结合,然后在荧光显微镜下观察结果。自身抗体的检测方法自身抗体的检测方法间接荧光染色技术(间接荧光染色技术(IIF)自身抗体的检测方法自身抗体的检测方法间接荧光染色技术(间接荧光染色技术(IIF)特异性高:阴阳性结果的信号强度对比明特异性高:阴阳性结果的信号强度对比明显。每种已结合的抗体在相应抗原的位置显。每种已结合的抗体在相应抗原的位置产生典型的荧光模型。产生典型的荧光模型。基质中抗原谱完整,可检测多种抗体,并基质中抗原谱完整,可
15、检测多种抗体,并且检出率高。且检出率高。当制备酶免试剂所需要的抗原太困难或复当制备酶免试剂所需要的抗原太困难或复杂时,可选择间接免疫荧光法。杂时,可选择间接免疫荧光法。自身抗体的检测方法自身抗体的检测方法核均质核均质型:型:ds-DNA或抗组蛋白?或抗组蛋白?自身抗体的检测方法自身抗体的检测方法斑点型(斑点型(S):抗):抗SSA、抗、抗SSB?自身抗体的检测方法自身抗体的检测方法着丝点着丝点型(型(ACA):):抗着丝点抗体。抗着丝点抗体。自身抗体的检测方法自身抗体的检测方法抗纺锤体抗体抗纺锤体抗体自身抗体的检测方法自身抗体的检测方法ELISA法检测法检测ANA原理原理:利用:利用ELISA
16、法,搜集细胞核法,搜集细胞核和细胞浆抗原,如和细胞浆抗原,如ds-DNA、Histones、Sm、RNP、SSA、SSB、Scl-70、centromere、Jo-1等混合液等混合液包被微孔板,检测抗核抗体。包被微孔板,检测抗核抗体。自身抗体的检测方法自身抗体的检测方法 ELISA法与法与IIF法比较,有操作法比较,有操作简便,结果判断较客观,无需荧光简便,结果判断较客观,无需荧光显微镜等优点,现在一些医院用显微镜等优点,现在一些医院用ELISA法来作检测法来作检测ANA的筛选方法。的筛选方法。自身抗体的检测方法自身抗体的检测方法颗粒凝集法颗粒凝集法(PA)原理原理:以检测抗脱氧核糖核蛋白体(
17、抗:以检测抗脱氧核糖核蛋白体(抗DNP抗体)为例。从小牛胸腺中提取脱抗体)为例。从小牛胸腺中提取脱氧核糖核蛋白氧核糖核蛋白(DNP)抗原,致敏聚苯乙抗原,致敏聚苯乙烯乳胶,制成抗烯乳胶,制成抗DNP抗体乳胶凝集试剂,抗体乳胶凝集试剂,当血清中存在抗当血清中存在抗DNP抗体时,便与乳胶抗体时,便与乳胶颗粒上的颗粒上的DNP抗原结合,使乳胶颗粒相抗原结合,使乳胶颗粒相互凝集出现肉眼可见的凝集颗粒。互凝集出现肉眼可见的凝集颗粒。自身抗体的检测方法自身抗体的检测方法金标免疫斑点法金标免疫斑点法原理原理:斑点反应板上固相纯化抗原:斑点反应板上固相纯化抗原与血清中抗体形成复合物,胶体金与血清中抗体形成复合
18、物,胶体金标记抗人标记抗人IgG单抗与复合物结合,形单抗与复合物结合,形成肉眼可见的红色圆斑点。本法用成肉眼可见的红色圆斑点。本法用于快速检测血清中抗体。于快速检测血清中抗体。自身抗体的检测方法自身抗体的检测方法免疫印迹法免疫印迹法(IB):):原理原理:用:用SOS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,将抗聚丙烯酰胺凝胶电泳,将抗原按分子量大小予以分离,再将其转移至原按分子量大小予以分离,再将其转移至硝酸纤维薄膜,如果受检血清含有相应抗硝酸纤维薄膜,如果受检血清含有相应抗原的自身抗体,则在相应位置会发生免疫原的自身抗体,则在相应位置会发生免疫反应,再加酶标抗体,底物,显色液和终反应,再加酶标抗体,底物,显色
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