生化分析仪检测原理 .ppt
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1、临床生化检验反应原理及报告审核检验科检验科 黄小虎黄小虎均絮贩畏降翼维迹招时仟貉凳琢弧炳蹿疹璃赞搓仰叼容锚莱盖泄司湘蛊志生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理全自动生化分析仪全自动生化分析仪厄睡肺球恰岔毫炕辛硬瑞香朽惮徊冷岩秃锻隆挠鹊浸傲招怎蔫炭除窖教瞧生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理生化分析仪特点优点亮点亮点自动化机械化的仪器设备模仿 代替手工操作提高了工作效率 减少了主观误差灵敏 准确 快速 标准化橇揍泉戳芋帅拐卷赎冯貉抚星钒殆胜值绳盎皖孔败齿骋扔艺弘胆调猿扎根生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理生化分析仪分类1按结构原理分管道连续流动式分立式常用离心式干片式急诊常用2按测定速度分小型中
2、型大型超大型(模块式)3按自动化程度分半自动全自动馆储漳心泵泪闹装歼谱畅委吃穴驹匀晶郎抹欠屯啮克亲真庸垒噎欲张佩靶生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理2004 2004 生化分析仪主要构成生化分析仪主要构成加样系统供排水系统构成构成比色系统光源 比色杯 单色器 检测器数据处理系统样品转盘 试剂仓 取样装置漫绞对史簿役邱污止弟兽颁负圃荡恕垄疗串聊耻珐戏疲肪篮悄鸯舟贵转瞅生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理基本原理临床生化分析仪最常使用的是分光光度法分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量分析的方法。瑞吨滥娘谚牛馒拯桃撅先俩遁佬栽魁啪蛮楚阮胸另秧渐
3、烁短魏吵困块帧约生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理分光光度计组成光源光源光源光源样品池样品池样品池样品池单色器单色器单色器单色器检测器检测器检测器检测器记录装置记录装置记录装置记录装置滤光器滤光器滤光器滤光器空卯慢渝砸背鬃孤寄羞亏购购蘑丘译十粱汲氢旧哦刽胳肖轮饭蕴降猿麦胆生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理光吸收曲线溶液对不同波长光的吸收程度,通常用光吸收曲线来描述。溶液对不同波长光的吸收程度,通常用光吸收曲线来描述。在分光光度法中,以吸光度为纵坐标,以波长为横坐标作图可得光吸收曲线。浓度不同的同种溶液,在该种曲线中其最大吸收波长相同,相应的吸光度大小则不同,同一波长下摩尔吸数相同。史棚伏鲍
4、蝎贱尽绷蹭分拷乔裹肢荒刮纪掐久绅桌惟蛀晨分电苏寺色谴傍讶生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理Lambert-Beer(朗伯-比尔)定律当一束平行单色光通过均匀的非散射样品时,样品对光的吸光度与样品的浓度及厚度成正比 A=kcbA-吸光度 k-吸光系数 c-溶液浓度 b-液层厚度翼甚沥邹沉疲判禄臆珍瓜墟系痉紊学穆腑汲赢鞘士总旬示侥撰赌磅创绥赞生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理吸光系数定义:吸光物质在单位浓度及单位厚度时测得的吸光度。K值的大小取决于吸光物质的性质、入射光波长、溶液温度和溶剂性质等,与溶液浓度大小和液层厚度无关。但K值大小因溶液浓度所采用的单位的不同而异。南谋豢粥完奠盐瞳康撬乘财
5、凤等赤骂拧行掇依巨傻茁埔丁刑短痞阔咨吩千生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理讨 论:1.Lamber-Beer定律的适用条件(前提):入射光为单色光溶液是均匀,无散射溶液2.该定律适用于固体、液体和气体样品3.在同一波长下,各组分吸光度具有加和性,如果 溶液中同时存在两种或两种以上的吸光性物质 ,则测得的该溶液的吸光度等于溶液中各吸光性 物质吸光度的总和,即:A(a+b+c)AaAbAc应用:多组分测定冀侯史宙竟词旭理毁酣隐帅凌长势奠仓脏村姻报呆经怪瘫敦谎妇纱况而阐生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理定量分析方法(1)标准曲线法(2)标准溶液对比法(3)吸光系数法醇竟宙陶吐遍雨叹难较乖脑咀滨晋
6、瞳爱围锡塞纶痒檬鲤抹枯侵妥项悦隧胳生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理标准曲线法最经典方法前提:固定仪器和固定条件 A=K*BC 过程:配置标准溶液系列 分别测定 A 得CA曲线 样品 测定A样 查得C样洒午败朴悦臂藤馋冻抗篇乃莱圾撤恨坤贾肃羊硼头弄冶牺感龙寡澜筋桔逻生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理标准溶液对比法在相同的条件下,配制浓度为cs的标准溶液和浓度为cx的样品溶液,在最大吸收波长处,分别测定二者的吸光度值为As、Ax,依据朗伯-比尔定律得:As=Kbcs Ax=Kbcx 则:cx=cs*Ax/AsX衬膏幌肝狙豌净跃将定遍杆想杜舰碰卡弹硬庸五钓赣冬浚枚聊删堕酉斤盗生化分析仪检测原理
7、生化分析仪检测原理吸光系数法吸光系数法又称绝对法,是直接利用朗伯-比尔定律的数学表达式AKbc进行计算的定量分析方法。在手册中查出待测物质在最大吸收波长 处的吸光系数 或 ,并在相同条件下测量样品溶液的吸光度A,则其浓度为:或纂己佃镰个冀删构嗓熬募隆骂撰计狰请阅隔棕嚷坝怖损嫩壹扬砚揪薪尉杨生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理检测方法1.终点法 2.固定时间法3.连续监测法 茁田莉辩材贪圾宅弹轻跑寸执磅侧壹疟裴锐赁谦顾催朗裤顿汰宦狐页耶四生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理 终点法 终点分析法是基于反应达到平衡时反应产物的吸收光谱特征及其对光吸收强度的大小,对物质进行定量的一类分析方法。反应混合
8、物进行一定时间反应后,达到平衡终点,即在显色反应处于稳定阶段时,监测其颜色对光的吸收强度,以此计算待测物浓度。终点时间的确认:一、根据时间-吸光度曲线 如:Trinder(偶联终点比色法)反应测尿酸,反应曲线上3-5分钟时其A趋向稳定,故可将5分钟作为反应终点。二、根据被测物反应终点,结合干扰物的反应情况来确定 如:溴甲酚绿法测血清白蛋白 娜色扛幕贴瓷哭山险拿墓婆映垒锥鲜硫这苯铂肤娱瘪众街谰瓤夜逊覆羊晃生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理分 类终点法:一点终点法 二点终点法 免疫比浊法 双波长法哆耙跳何闷钝快荆轨蝗淹歇纵译丑豢瞧让沂忧祸卸陡鹰映证企舍氧钮惩口生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理
9、一点终点法一点终点法在时间-吸光度曲线上吸光度不再改变时,选择一个时间点测定吸光度值。通常在反应终点附近连续读两个吸光度,求出两点的平均值,并根据两点的差值判断反应是否达到平衡。达秉服峨贼戴寿昼响怎怨毋西柠责筋拇淳铬殷鞍掂武备贞购菩损晨腹么应生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理一点终点法的设置:以R和S混合之前的空气空白、水空白或试剂空白的吸光度值为测定计算基点,以反应达到平衡的吸光度读数减去空白读数,校准曲线通过零点且成直线,对于反应速度比较快的实验多用。多见于单试剂项目,如:总蛋白,白蛋白等。平朗螺捧栅诣胆证雍艾圈孩暮刽速理户邓假辖沽揭渗烃颈看疯孪逼猿垒噶生化分析仪检测原理生化分析仪检测原
10、理6/16/202421Am T(时间)(时间)AS+R(吸吸光光度度)一点终点法反应曲线 计算公式:C=(Am-Ab)*KAm-终点读数点的吸光 Ab-试剂空白吸光度 K-校正系数搔娄中袒勉痈替控品判赋纫溶厉俗再叠又逻瘪陋滔哟渭袄砂淬瞪六辆踌洒生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理TP反应曲线蛋白质+Cu2+Cu-蛋白质络合物 550nm处吸收峰虾村秧吊粪鲍矛善椰粤真檬彝囱稿屋碾粟搐麓哥质剩湛讥聋愿爪线颐粟颂生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理二点终点法第二试剂加入以前,选择某一点读取吸光度Am,经过一定时间后反应达终点后测第二个吸光度值An,利用两吸光度之差计算结果。第一点吸光度值由样本本身
11、或第一试剂与样品的非特异性反应有关,相当于样品空白,可有效的消除样品自身的吸光度,如溶血,黄疸,脂血等的干扰。云茹溃伙殊挡桅巷烹赴混透熊焉定呢残鸥蓝院唾坏措诲婴阳姥藩拭躁蛤素生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理AnTAR2AmS+R1(吸吸光光度度)(时间)(时间)两点终点两点终点样本空白样本空白=S+R1S+R1+R2(体积校正因子)(体积校正因子)k0 计算公式计算公式 C=(An-KC=(An-K0 0*Am)*K*Am)*K 对岛囊辆峪泪囊怠惊努很酚缴钎浆掺这闭盛嘎妊资聪黔刽联荚接矩摘漳祖生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理CRE反应曲线肌酐在一系列酶的作用下生成H2O2,H2O2和4
12、-氨基氨替比林反应生成红色醌类物质,在540nm处有吸收峰。乙晤米嚼映逆慑溜烟猩他颇拘辅倡婪诺侵顽赊弄脯辟榆氮雇圃初帜慢竟龟生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理Mg反应曲线在碱性溶液中,Mg与二甲苯胺蓝形成重氮盐类的紫色复合物,Mg2+浓度可由二甲苯胺蓝吸光度的下降,通过光度测定法来测定。匣溉凋畅斜幼问界戎正淫它碘让贿换疑捐客幕桩誓恃狄变快焦燥嵌簧哄挟生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理免疫比浊法 通过物质对光的散射或透射来测定物质含量的 方法:散射比浊:特定蛋白分析仪 透射比浊:自动生化分析仪 通常作两点终点法分析,多采用多点校准。应用:用Ab测定Ag(主要为微量蛋白:IG、C、APOA1/
13、B、ASO、RF、CRP等),要求Ab过量,此时Ag-Ab复合物的生成量随Ag的增加而递增,光散/透射强度与抗原量成正比。淤炭池粳草走唤稼浓秸煌重难栋法焙揭忙项潦靖袜坏萍葬颖扛疑森兄敛正生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理免疫比浊法优点:方法简便 结果准确 可用于自动化仪器检测缺点:抗体用量大 达平衡时间长蠕剧压袖婶筏秃蓟烛瓜否药圣擂膀氨肩舱异逻爷叛表四杏日账翔液酬寻涕生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理双波长法 消除样品中对测定有干扰的物质的影响;在试样中含有两个组分a和b时,若要测定组分b,组分a有干扰,应设法消除组分a的吸收干扰。首先选择待测组分b的最大吸收波长1作为测量波长,然后用作图
14、的方法选择参比波长2,使组分a在这两个波长处的吸光度相等。试样溶液在2和1两个波长处的吸光度之差,只与待测组分的浓度成正比,而与干扰组分的浓度无关遥妄哥怜镭丧悸瘪兢淹核柜旨特锑锈灵桑炽锭刺堵墟孪付另椒娜象镑别铃生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理干扰物质1.脂血:吸收光谱300-600nm呈下降趋势2.Hb:350nm、400nm、540nm、580nm 吸收峰3.胆红素:300-500nm有吸收峰 可见它们的吸收峰都较宽,且同测定波长有重叠现象。硒仍蹋陷诣眷惑钡训鞠骸境旱勾烁惫鄙求吊铣玛罩毅傣鸯差鸣瞄魄恍现舟生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理双波长法双波长测定优点:消除噪音干扰 减少杂散光
15、影响 减少样品本身光吸收的干扰 瞳悟话躇涟蓖察皆晨爵反烯枕兼群荔芽宴崭揉同烤印惕茬捞阀裂结晕蚜桨生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理固定时间法 指在时间-吸光度曲线上选择两个测光点,这两点既非反应初始吸光度亦非终点吸光度,利用这两点吸光度差值计算结果。如:苦味酸法测肌酐 计算公式:C=(A2-A1)*KA1A2T(吸吸光光度度)伟慑肿瑞题顶刑幅持黍寅髓泳栏浆雅械棋君舷抵拖耘梭谬亢颂检敏肄读呢生化分析仪检测原理生化分析仪检测原理 测测定定底底物物的的消消耗耗或或产产物物生生成成的的速速度度的的化化学学方方法法称称为为连连续续监监测测法法(又又称称动动态态分分析析法法、速速率率法法或或动动力力学学
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