骨髓造血干细胞 .ppt

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1、造血造血干细胞移植干细胞移植进展进展云南省肿瘤医院血液科云南省肿瘤医院血液科何明生何明生 博士博士 1999年12月美国SCIENCE 人类干细胞研究人类干细胞研究 列入人类十大科学成就列入人类十大科学成就 榜首榜首2造血干细胞移植进展20032003年度年度 十大科学进展中同样涉及了干十大科学进展中同样涉及了干细胞，即鼠的胚胎细胞，即鼠的胚胎干细胞干细胞在培养在培养皿中既能发育成精子也能发育成皿中既能发育成精子也能发育成卵子，有望发展出新一代的试管卵子，有望发展出新一代的试管婴儿技术。婴儿技术。3造血干细胞移植进展hematopoieticstemcellinPubMedItems 1-50

2、0 of 56 66312/5/20054造血干细胞移植进展干细胞移植进展干细胞移植进展第一部分第一部分 基础理论基础理论第二部分第二部分 实验技术实验技术第三部分第三部分 临床移植临床移植1骨髓造血干细胞的基本概念骨髓造血干细胞的基本概念l骨髓造血干细胞骨髓造血干细胞(hematopoietichematopoietic stem cell,HSC)stem cell,HSC)是指存在于骨髓是指存在于骨髓中的一小群具有中的一小群具有无限或较长期无限或较长期的的自我更新自我更新能力能力,并具有并具有多向分化多向分化潜能潜能的原始造血细胞的原始造血细胞6造血干细胞移植进展1骨髓造血干细胞的基本概

3、念l传统观念认为传统观念认为HSCHSC的生物学特征是：的生物学特征是：具有高度增殖分裂能力；具有高度增殖分裂能力；能多向分化产生各系血细胞；能多向分化产生各系血细胞；可移植性；可移植性；能自我更新能自我更新(self-renew)(self-renew)，持久地持久地维持正常造血功能。维持正常造血功能。7造血干细胞移植进展2.骨髓造血干细胞的研究历史8造血干细胞移植进展2.骨髓造血干细胞的研究历史9造血干细胞移植进展造血干细胞移植造血干细胞移植在近在近3030年里迅猛发展壮大至今年里迅猛发展壮大至今 19901990年年，美美国国的的ThomasThomas因因在在骨骨髓髓移移植植中中做做出

4、出重重要要贡贡献献，从从而而共共同同获获得得该该年年度度的的诺诺贝贝尔尔生生理理奖奖和和医医学学奖奖，这这是是临临床床医医学学首首次次获获得得此项殊荣。此项殊荣。10造血干细胞移植进展3.造血干细胞的体外研究l造血干细胞向红细胞分化造血干细胞向红细胞分化l造血干细胞向粒细胞分化造血干细胞向粒细胞分化l造血干细胞向单核细胞分化造血干细胞向单核细胞分化l造血干细胞向淋巴细胞分化造血干细胞向淋巴细胞分化l造血干细胞向血小板分化造血干细胞向血小板分化l造血干细胞向造血干细胞向NKNK细胞分化细胞分化11造血干细胞移植进展3.造血干细胞的体外研究l造血干细胞造血干细胞还可向心肌还可向心肌细胞分化、肝细胞

5、、神经组细胞分化、肝细胞、神经组织细胞、血管内皮细胞等织细胞、血管内皮细胞等非非血液细胞血液细胞分化分化12造血干细胞移植进展4造血干细胞的体内特性l骨髓造血干细胞骨髓造血干细胞来源来源于胚胎干细胞于胚胎干细胞的成血血管内皮细胞，经由卵黄的成血血管内皮细胞，经由卵黄囊、胎肝、胸腺、脾、最后到骨髓，囊、胎肝、胸腺、脾、最后到骨髓，在体内不断增殖发育，产生髓系、在体内不断增殖发育，产生髓系、红细胞系和淋巴细胞系，逐步分化红细胞系和淋巴细胞系，逐步分化至各系成熟血细胞。至各系成熟血细胞。4造血干细胞的体内特性造血干细胞的体内特性13造血干细胞移植进展4造血干细胞的体内特性l骨髓造血干细胞骨髓造血干细

6、胞在体内在体内具具有高度的自我更新能力和有高度的自我更新能力和多向分化潜能，不断的产多向分化潜能，不断的产生髓系、红系和淋巴系细生髓系、红系和淋巴系细胞。胞。4造血干细胞的体内特性造血干细胞的体内特性14造血干细胞移植进展神经性疾病神经性疾病 南佛罗里达医学院和佐治南佛罗里达医学院和佐治亚医学院的研究人员在亚医学院的研究人员在20032003年美国神经年会上报告，将年美国神经年会上报告，将血液中的干细胞移植到卒中血液中的干细胞移植到卒中大鼠的大脑中能大大促进大大鼠的大脑中能大大促进大脑的功能恢复。脑的功能恢复。15造血干细胞移植进展神经性疾病神经性疾病 巴西圣保罗大学的研究小巴西圣保罗大学的研

7、究小组从组从3030例脊椎损伤所致瘫痪例脊椎损伤所致瘫痪患者的血液中抽取干细胞，患者的血液中抽取干细胞，再注入患者脊椎动脉血管，再注入患者脊椎动脉血管，几个月后，几个月后，1212例患者的瘫痪例患者的瘫痪肢体恢复了知觉。肢体恢复了知觉。16造血干细胞移植进展神经性疾病神经性疾病 我们与昆医神经科学研究我们与昆医神经科学研究所的合作研究表明，骨髓的所的合作研究表明，骨髓的CD34+CD34+细胞移植对恢复全脊髓细胞移植对恢复全脊髓损伤有治疗作用，相关论文损伤有治疗作用，相关论文正在审稿之中。正在审稿之中。17造血干细胞移植进展（HSC）向神经细胞（）向神经细胞（NC）分化）分化及其治疗脊髓损伤的

8、研究及其治疗脊髓损伤的研究 l干细胞移植成为治疗神经系统退行性疾干细胞移植成为治疗神经系统退行性疾病唯一可能有效的手段。但是，目前病唯一可能有效的手段。但是，目前NSCNSC移植还未广泛用于临床实践中，原因主移植还未广泛用于临床实践中，原因主要有要有3 3点：点：lNSCNSC取材困难，需做开颅手术，对患者创取材困难，需做开颅手术，对患者创伤较大，给患者带来较大痛苦。再加上伤较大，给患者带来较大痛苦。再加上神经系统退行性疾病患者多为高龄者，神经系统退行性疾病患者多为高龄者，故患者已经受不住神经干细胞移植。故患者已经受不住神经干细胞移植。18造血干细胞移植进展（HSC）向神经细胞（）向神经细胞（

9、NC）分化）分化及其治疗脊髓损伤的研究及其治疗脊髓损伤的研究 lNSCNSC分离提纯技术尚未成熟，想要得到一分离提纯技术尚未成熟，想要得到一定数量一定纯度的定数量一定纯度的NSCNSC困难较大。困难较大。lNSCNSC较脆弱，易受各种因素的影响，即使较脆弱，易受各种因素的影响，即使分离提纯出分离提纯出NSCNSC，也很难断定这些神经干，也很难断定这些神经干细胞仍具有正常功能和特性，以及将这细胞仍具有正常功能和特性，以及将这些些“神经干细胞神经干细胞”注入神经系统后能否注入神经系统后能否分化为一定数量的神经细胞。分化为一定数量的神经细胞。19造血干细胞移植进展（HSC）向神经细胞（）向神经细胞（

10、NC）分化）分化及其治疗脊髓损伤的研究及其治疗脊髓损伤的研究 l与与NSCNSC相比相比HSCHSC具有以下优点：具有以下优点：l1 1）HSCHSC取材容易，无论是骨髓取材容易，无论是骨髓HSCHSC还是外还是外周血周血HSCHSC的采集都具有创口小、患者痛苦的采集都具有创口小、患者痛苦小、安全性高的特点。小、安全性高的特点。l2 2）HSCHSC的分离提纯技术已较为成熟，可的分离提纯技术已较为成熟，可较容易的得到一定数量一定纯度的较容易的得到一定数量一定纯度的HSCHSC。20造血干细胞移植进展（HSC）向神经细胞（）向神经细胞（NC）分化）分化及其治疗脊髓损伤的研究及其治疗脊髓损伤的研究

11、 l3 3）对干细胞的认识首先从）对干细胞的认识首先从HSCHSC开始，因开始，因此关于此关于HSCHSC的研究较的研究较NSCNSC要深入得多。要深入得多。l4 4）HSCHSC呈悬浮状态，再采集和培养等过呈悬浮状态，再采集和培养等过程中损伤较小。程中损伤较小。21造血干细胞移植进展（HSC）向神经细胞（）向神经细胞（NC）分化）分化及其治疗脊髓损伤的研究及其治疗脊髓损伤的研究 l临床价值临床价值l可将可将HSCHSC培养分化出培养分化出“神经细胞神经细胞”的特的特性及功能，将这些性及功能，将这些“神经细胞神经细胞”注入神注入神经系统病变局部，从而替代或部分替代经系统病变局部，从而替代或部分

12、替代受损神经细胞的功能治疗神经系统疾病。受损神经细胞的功能治疗神经系统疾病。lHSCHSC源自患者本人，既可以避免移植后免源自患者本人，既可以避免移植后免疫排斥反应，年龄的限制也可延长。疫排斥反应，年龄的限制也可延长。22造血干细胞移植进展（HSC）向神经细胞（）向神经细胞（NC）分化）分化及其治疗脊髓损伤的研究及其治疗脊髓损伤的研究 l预期研究成果l1、骨髓干细胞可诱导分化为具有神经细胞功能的细胞l2、骨髓干细胞诱导分化的神经细胞对脊髓损伤有治疗作用 23造血干细胞移植进展第二部分第二部分 实验技术实验技术24造血干细胞移植进展1.1.问题问题如何取得干细胞如何取得干细胞如何体外培养干细胞如

13、何体外培养干细胞如何保持体外培养干细胞的生物学如何保持体外培养干细胞的生物学特性特性25造血干细胞移植进展2.髓造血干细胞的培养原理1.1.骨髓造血干细胞的体外培养指骨髓造血干细胞的体外培养指在模拟体内生理环境等特定的在模拟体内生理环境等特定的体外条件下，进行干细胞的孵体外条件下，进行干细胞的孵育培养，使之生存并生长。造育培养，使之生存并生长。造血干细胞体外培养呈悬浮状生血干细胞体外培养呈悬浮状生长，无需底物支持。长，无需底物支持。1.体外培养原理26造血干细胞移植进展3.3.动物取材动物取材l在置备细胞悬液之前须将目在置备细胞悬液之前须将目的细胞所在组织材料分散成的细胞所在组织材料分散成单细

14、胞。单细胞。l机械分离和酶学解离是将组机械分离和酶学解离是将组织分散成单细胞最常用的方织分散成单细胞最常用的方法。法。27造血干细胞移植进展3.1细胞悬液的制备 l 介绍两种方法：介绍两种方法：在无菌条件下利用穿刺法从髂骨抽在无菌条件下利用穿刺法从髂骨抽取骨髓，缓慢加入到比重为取骨髓，缓慢加入到比重为1.077g/1.077g/3 3的淋巴细胞分离液中，经密度梯度离的淋巴细胞分离液中，经密度梯度离心吸取白细胞层，多次离心后可得到心吸取白细胞层，多次离心后可得到骨髓单个核细胞骨髓单个核细胞（BMNCBMNC），），重新悬重新悬浮在含有浮在含有10U/ml10U/ml肝素的肝素的RPMI-1640

15、RPMI-1640液中，液中，制成细胞悬液。制成细胞悬液。28造血干细胞移植进展3.1细胞悬液的制备 l 介绍两种方法：介绍两种方法：无菌条件下从髂骨抽取骨髓经输血无菌条件下从髂骨抽取骨髓经输血滤网过滤后，自然沉淀，去除大部分滤网过滤后，自然沉淀，去除大部分红细胞，再以红细胞，再以200r/min200r/min低速离心，漂低速离心，漂洗洗2 23 3次去除血浆，保留有核细胞。次去除血浆，保留有核细胞。然后加入到然后加入到RPMI-1640RPMI-1640液中，制成密度液中，制成密度为（为（1 15 5）10107 7MNC/mlMNC/ml的细胞悬液。的细胞悬液。29造血干细胞移植进展3.

16、2 培养方法l两种常用的干细胞分离方法两种常用的干细胞分离方法:l1 1、免疫亲和柱分离法、免疫亲和柱分离法l2 2、免疫磁珠分离法、免疫磁珠分离法30造血干细胞移植进展1 1）免疫亲和柱分离法l具体方法如下：取收集的单核细胞具体方法如下：取收集的单核细胞置于置于RPMI 1640RPMI 1640培养液中，并加入胎培养液中，并加入胎牛血清过夜，以除去贴壁的细胞，牛血清过夜，以除去贴壁的细胞，在形成玫瑰花环的细胞中直接加入在形成玫瑰花环的细胞中直接加入生物素标记的生物素标记的抗抗-CD34-CD34单克隆抗体，单克隆抗体，于于4 4条件下旋转孵育条件下旋转孵育3030分钟，然后分钟，然后用用H

17、anksHanks液清洗。液清洗。31造血干细胞移植进展1 1）免疫亲和柱分离法l将结合好的细胞放入亲和层析柱中，将结合好的细胞放入亲和层析柱中，通过亲和素和生物素的结合作用，通过亲和素和生物素的结合作用，标记的细胞被亲和柱吸收，清洗亲标记的细胞被亲和柱吸收，清洗亲和柱除去非特异结合的细胞，即可和柱除去非特异结合的细胞，即可获得获得CD34CD34细胞。细胞。32造血干细胞移植进展2 2）免疫磁珠分离法l此法特异性高、纯度好、简便快此法特异性高、纯度好、简便快速、可以处理大量的细胞样品以速、可以处理大量的细胞样品以满足临床移植的需要。满足临床移植的需要。33造血干细胞移植进展c 磁珠准备l从被

18、覆绵羊抗小鼠从被覆绵羊抗小鼠IgGIgG1 1（FcFc）抗体抗体DynabeadsDynabeads M-450 M-450的小瓶中（磁珠密度的小瓶中（磁珠密度4 410108 8/ml/ml，30mg/ml30mg/ml），），按按0.50.5个磁珠个磁珠/MNC/MNC的比例取出预计磁珠量，的比例取出预计磁珠量，用用RPMI/HASRPMI/HAS漂洗后将磁铁置于试管外壁吸漂洗后将磁铁置于试管外壁吸引引2 2分钟，弃去上清液，收集磁珠，加入分钟，弃去上清液，收集磁珠，加入RPMI/HAS/IG 1mlRPMI/HAS/IG 1ml悬浮磁珠，置于冰浴中，悬浮磁珠，置于冰浴中，立即使用。立即

19、使用。34造血干细胞移植进展d 致敏细胞l用用CD34CD34单克隆抗体单克隆抗体（9C59C5）按）按0.50.5g/10g/106 6细胞比例致敏细胞细胞比例致敏细胞，MNCMNC浓度为（浓度为（1 15 5）10107 7MNC/mlMNC/ml，混合均匀后置于混合均匀后置于4 4的旋的旋转混合器上转混合器上以以4r/min4r/min的速度低速转动孵的速度低速转动孵育育30306060分钟，分钟，用用RPMI/HASRPMI/HAS清洗细胞后清洗细胞后4 4低速离心低速离心5 5分钟，去除未结合的单克分钟，去除未结合的单克隆抗体，最后将致敏细胞加入隆抗体，最后将致敏细胞加入RPMI/H

20、ASRPMI/HAS中形成细胞悬液。中形成细胞悬液。35造血干细胞移植进展e 混合l按磁珠与致敏细胞按磁珠与致敏细胞0.5:10.5:1的比例将致敏细的比例将致敏细胞与磁珠结合，在胞与磁珠结合，在4 4旋转混合物器上转旋转混合物器上转动混合动混合3030分钟，用磁铁在管壁外吸引，分钟，用磁铁在管壁外吸引，收集磁珠收集磁珠-玫瑰花环形成细胞，再用玫瑰花环形成细胞，再用RPMI/HASRPMI/HAS漂洗，除去非玫瑰花环形成细漂洗，除去非玫瑰花环形成细胞。胞。36造血干细胞移植进展3）培养造血干细胞的常用方法l液体悬浮培养法液体悬浮培养法l体外集落形成实验体外集落形成实验 l骨髓基质细胞培养法骨髓

21、基质细胞培养法 l微载体微载体-微囊培养技术微囊培养技术37造血干细胞移植进展4.鉴定结果 l一般采用脾结节形成测定法，计一般采用脾结节形成测定法，计数脾脏的结节数一个造血干细胞数脾脏的结节数一个造血干细胞增殖分化成一个集落，通常植入增殖分化成一个集落，通常植入的造血干细胞数与生成的脾结节的造血干细胞数与生成的脾结节数呈线性相关。数呈线性相关。38造血干细胞移植进展4.4.鉴定结果鉴定结果 l 采用造血干细胞表面标志即分采用造血干细胞表面标志即分化抗原的鉴定造血干细胞。化抗原的鉴定造血干细胞。如如CD34CD34分子、血管内皮生长因子受分子、血管内皮生长因子受体体2 2（VEGFR-2,VEG

22、FR-2,又称又称KDRKDR）CD133CD133（AC133AC133）分子。分子。39造血干细胞移植进展体外细胞的生长过程体外细胞的生长过程l体外细胞培养的过程大致分为原代体外细胞培养的过程大致分为原代培养期、传代期和衰退期三个阶段。培养期、传代期和衰退期三个阶段。原代培养期：原代培养期：细胞自体内新鲜组织细胞自体内新鲜组织取出并在体外培养生长至第一次传取出并在体外培养生长至第一次传代的时期，约持续代的时期，约持续1 14 4周。此期细周。此期细胞活动较活跃胞活动较活跃40造血干细胞移植进展体外细胞的生长过程体外细胞的生长过程l传代期：传代期：原代培养的细胞生长至一原代培养的细胞生长至一

23、定时间后，达到较高密度，此时应定时间后，达到较高密度，此时应将原代细胞接种至其他培养皿中，将原代细胞接种至其他培养皿中，此过程称为传代。此过程称为传代。l衰退期：衰退期：此期细胞仍在生存，但增此期细胞仍在生存，但增殖很慢或不增殖。细胞形态轮廓增殖很慢或不增殖。细胞形态轮廓增强，直至衰退死亡。强，直至衰退死亡。41造血干细胞移植进展培养细胞的传代生长过程培养细胞的传代生长过程细胞传一代经历四个阶段：细胞传一代经历四个阶段：l滞后期滞后期l对数生长期对数生长期l稳定期稳定期l衰退期衰退期42造血干细胞移植进展滞后期滞后期 l包括悬浮期和潜伏期。细胞的胞质包括悬浮期和潜伏期。细胞的胞质收缩，包体呈圆

24、球状，悬浮于培养收缩，包体呈圆球状，悬浮于培养基中。经过一段时间的培养，有活基中。经过一段时间的培养，有活力的细胞开始附着于底物并逐渐延力的细胞开始附着于底物并逐渐延伸，恢复原来的形态，但还不分裂伸，恢复原来的形态，但还不分裂增殖。正常细胞的滞后期约为增殖。正常细胞的滞后期约为24249696小时。小时。43造血干细胞移植进展对数生长期l细胞增殖旺盛，开始阶段细胞的增细胞增殖旺盛，开始阶段细胞的增长速率与最初细胞数成正比，此时长速率与最初细胞数成正比，此时细胞数量呈指数增长。此期持续时细胞数量呈指数增长。此期持续时间的长短因细胞本身的特性和培养间的长短因细胞本身的特性和培养条件而异，一般持续条

25、件而异，一般持续3 35 5天。天。44造血干细胞移植进展稳定期稳定期l此期细胞虽仍保持分裂增殖能力，此期细胞虽仍保持分裂增殖能力，但增殖的细胞数与死亡的细胞数但增殖的细胞数与死亡的细胞数相当，从而处于一种动态平衡的相当，从而处于一种动态平衡的状态。状态。45造血干细胞移植进展衰退期l处于稳定期的细胞如不传代或不加入新处于稳定期的细胞如不传代或不加入新的培养基，则会进入衰退期，逐渐死亡。的培养基，则会进入衰退期，逐渐死亡。此期死亡细胞数超过分裂细胞数，细胞此期死亡细胞数超过分裂细胞数，细胞数因此逐渐减少。数因此逐渐减少。46造血干细胞移植进展培养细胞的细胞周期培养细胞的细胞周期 lG G1 1

26、期期 发生在上一细胞周期发生在上一细胞周期的的M M期之期之后，此细胞周期后，此细胞周期S S期之前，有称为细期之前，有称为细胞分裂后期。胞分裂后期。在在G G1 1期主要发生期主要发生与与DNADNA合成前有关的生化变化。合成前有关的生化变化。lS S期期 此期主要进行此期主要进行DNADNA的合成，各的合成，各种细胞的种细胞的S S期持续时间的差别较小，期持续时间的差别较小，一般为一般为6 68 8小时。小时。47造血干细胞移植进展培养细胞的细胞周期培养细胞的细胞周期 lG G2 2期期 发生在发生在DNADNA合成后或细胞分裂合成后或细胞分裂前，有称细胞分裂前期前，有称细胞分裂前期。G

27、G2 2期持续时期持续时间较短，一般为间较短，一般为2 23 3小时。小时。lM M期期 即细胞分裂期。处于分裂期的即细胞分裂期。处于分裂期的细胞是评价细胞增殖和生长能力的细胞是评价细胞增殖和生长能力的参考指标。此期持续时间很短，一参考指标。此期持续时间很短，一般只有般只有1 12 2小时小时48造血干细胞移植进展5.注意事项l污染预防和处理污染预防和处理l培养基成分培养基成分l培养基的酸碱度培养基的酸碱度49造血干细胞移植进展5.注意事项l另外另外 接种细胞应处于对数生长状接种细胞应处于对数生长状态。处于静止期的细胞在新鲜态。处于静止期的细胞在新鲜培养基中开始阶段生长缓慢或培养基中开始阶段生

28、长缓慢或根本不生长。根本不生长。50造血干细胞移植进展 5.注意事项细胞接种前，培养基要预先细胞接种前，培养基要预先加热至加热至3737，培养基的，培养基的PHPH用用COCO2 2预先平衡。预先平衡。细胞的接种密度要大于细胞的接种密度要大于1 110105 5/ml/ml。51造血干细胞移植进展 5.5.注意事项注意事项搅拌速度在搅拌速度在100100300r/min300r/min的范围内，能够保持细胞处于的范围内，能够保持细胞处于均匀的悬浮状态即可。均匀的悬浮状态即可。至少每天取样一次，检测细至少每天取样一次，检测细胞的生长状况和计数细胞密度。胞的生长状况和计数细胞密度。52造血干细胞移

29、植进展 第三部分第三部分 临床移植临床移植53造血干细胞移植进展1.1 1.1 移植的基本概念移植的基本概念 对患者进行超大剂量化疗和（或）对患者进行超大剂量化疗和（或）放疗以摧毁患者的造血和免疫功能，放疗以摧毁患者的造血和免疫功能，同时最大限度的杀灭肿瘤细胞，然同时最大限度的杀灭肿瘤细胞，然后输入正常供体的造血干细胞或预后输入正常供体的造血干细胞或预先采集的患者自体造血干细胞，以先采集的患者自体造血干细胞，以重建患者的造血和免疫功能，称为重建患者的造血和免疫功能，称为造血干细胞移植造血干细胞移植技术。技术。54造血干细胞移植进展1.1 1.1 移植的基本概念移植的基本概念l造血干细胞造血干细

30、胞主要存在于单个核细主要存在于单个核细胞中，表达胞中，表达CD34CD34抗原抗原。CD34CD34+细细胞占单个核细胞的胞占单个核细胞的1%1%4%4%。l大量研究提示大量研究提示，CD34CD34+HSCHSC源于源于CD34CD34-HSCHSC，即，即CD34CD34-细胞才是真正细胞才是真正的的造血干细胞。造血干细胞。55造血干细胞移植进展1.21.2骨髓移植的分类骨髓移植的分类 l自体骨髓造血干细胞移植自体骨髓造血干细胞移植（AHSCTAHSCT）.l同基因造血干细胞移植同基因造血干细胞移植,即单卵即单卵孪生同胞孪生同胞（identical twinidentical twin）供

31、供髓。髓。56造血干细胞移植进展1.21.2骨髓移植的分类骨髓移植的分类 l异基因造血干细胞移植（异基因造血干细胞移植（AlloAllo-HSCTHSCT），），包括包括：HLAHLA相合或半相相合或半相合的同胞供髓；合的同胞供髓；HLAHLA相合或部分相合或部分相合的相关供髓；相合的相关供髓；HLAHLA相合或部相合或部分相合的无关供髓分相合的无关供髓。57造血干细胞移植进展1.31.3骨髓移植前的准备骨髓移植前的准备 最重要的是移植最重要的是移植患者的准备患者的准备58造血干细胞移植进展 系统检查及注意事项a a原发病状况原发病状况b b心，肺，肝，肾功能心，肺，肝，肾功能c c糖代谢功能

32、糖代谢功能d d口腔科检查口腔科检查此外，应去处隐性感染灶，如耳、鼻、此外，应去处隐性感染灶，如耳、鼻、喉、肛周等处的病灶。喉、肛周等处的病灶。59造血干细胞移植进展 全环境保护l全环境保护（全环境保护（tTEPtTEP）包括口服肠包括口服肠道不吸收抗生素（常用抗生素有道不吸收抗生素（常用抗生素有黄连素、庆、无菌饮食、皮肤清黄连素、庆、无菌饮食、皮肤清洁消毒和眼、耳、鼻、口腔、脐、洁消毒和眼、耳、鼻、口腔、脐、阴道等部位的消毒；住空气层流阴道等部位的消毒；住空气层流病房（病房（LAFRLAFR）等。等。60造血干细胞移植进展 全环境保护全环境保护lTEPTEP的时间应持续的时间应持续10101

33、414天天左右，其目的是尽量减少左右，其目的是尽量减少患者体内致病菌的负荷，患者体内致病菌的负荷，从而最大限度地降低骨髓从而最大限度地降低骨髓移植后感染的发生率。移植后感染的发生率。61造血干细胞移植进展 移植前预防感染的措施移植前预防感染的措施l清除感染灶及体内已存在的病原清除感染灶及体内已存在的病原体，以防预处理激活体内已存在体，以防预处理激活体内已存在的病原体。的病原体。a a细菌感染的预防细菌感染的预防b b真菌感染的预防真菌感染的预防c c病毒感染的预防病毒感染的预防62造血干细胞移植进展1.4 1.4 供者的选择供者的选择l骨髓移植供髓者的选择骨髓移植供髓者的选择关系到骨髓移植的方

34、法、关系到骨髓移植的方法、预处理方案、移植后处预处理方案、移植后处理及预后等。理及预后等。63造血干细胞移植进展1.4 1.4 供者的选择供者的选择l供受者之间供受者之间HLAHLA相合与否相合与否直直接影响着造血干细胞移植接影响着造血干细胞移植的成败，所以通过的成败，所以通过HLAHLA的检的检测来筛选供者。测来筛选供者。64造血干细胞移植进展1.4 1.4 供者的选择供者的选择lHLAHLA基因系统是人类主要组织相基因系统是人类主要组织相容性复合体。由一系列紧密连锁容性复合体。由一系列紧密连锁的基因坐位所组成的的基因坐位所组成的HLAHLA系统构系统构成了人体生物学的成了人体生物学的“身份

35、证身份证”。65造血干细胞移植进展1.4 1.4 供者的选择供者的选择l个体的免疫活性细胞均个体的免疫活性细胞均以以HLAHLA作作为识别为识别“自己自己”与与“非己非己”的标的标志，从而通过免疫反应志，从而通过免疫反应排除排除“非非己己”，保持，保持“自体自体”的完整性。的完整性。66造血干细胞移植进展1.5 1.5 移植免疫学移植免疫学l现代医学三大支柱：现代医学三大支柱：l1 1、神经生物学：解决生物信息如何传递问题、神经生物学：解决生物信息如何传递问题l2 2、分子免疫学：认识自己和排斥异己的问题、分子免疫学：认识自己和排斥异己的问题l3 3、分子生物学：研究分子机制的方法和工具、分子

36、生物学：研究分子机制的方法和工具67造血干细胞移植进展1.6 骨髓造血干细胞的采集l麻醉麻醉 抗凝抗凝 采髓前准备采髓前准备 骨髓采骨髓采集集l采髓部位为髂后上棘，多点穿刺，采髓部位为髂后上棘，多点穿刺，分次采取。分次采取。l采集的有核细胞数应采集的有核细胞数应2 210108 8/kg/kg，CD34CD34+细胞应细胞应2 210106 6/kg/kg。1.51.5骨髓造血干细胞的采集骨髓造血干细胞的采集68造血干细胞移植进展1.7 1.7 预处理预处理l移植前的预处理是指移植前移植前的预处理是指移植前1414天天到移植时给予患者的化学药物治到移植时给予患者的化学药物治疗及放射治疗。疗及放

37、射治疗。69造血干细胞移植进展1)目的l最大限度的消灭患者体内的异常克隆最大限度的消灭患者体内的异常克隆或肿瘤细胞，减少复发；或肿瘤细胞，减少复发；l破坏患者免疫系统，为造血干细胞的破坏患者免疫系统，为造血干细胞的植入提供条件，防止排斥反应；植入提供条件，防止排斥反应；l清除异常细胞，为造血干细胞及基质清除异常细胞，为造血干细胞及基质细胞的植入和增殖提供必要的空间。细胞的植入和增殖提供必要的空间。1)目的70造血干细胞移植进展1)目的l最大限度的消灭患者体内的异常克隆最大限度的消灭患者体内的异常克隆或肿瘤细胞，减少复发；或肿瘤细胞，减少复发；l破坏患者免疫系统，为造血干细胞的破坏患者免疫系统，

38、为造血干细胞的植入提供条件，防止排斥反应；植入提供条件，防止排斥反应；l清除异常细胞，为造血干细胞及基质清除异常细胞，为造血干细胞及基质细胞的植入和增殖提供必要的空间。细胞的植入和增殖提供必要的空间。1)目的71造血干细胞移植进展 用于消除白血病细胞或肿瘤用于消除白血病细胞或肿瘤细胞的措施细胞的措施l全身照射全身照射（TBITBI）+化疗化疗l不含不含TBITBI的联合化疗的联合化疗72造血干细胞移植进展 抗肿瘤化学药物 几乎所有的抗白血病药物均可用于白血几乎所有的抗白血病药物均可用于白血病患者骨髓移植的预处理病患者骨髓移植的预处理73造血干细胞移植进展 用于抑制受者免疫功能的药物la a抗淋

39、巴细胞球蛋白抗淋巴细胞球蛋白（ALGALG或或ATGATG）lb b全淋巴结照射全淋巴结照射（TLITLI）lc c最常用药物有最常用药物有环孢菌素环孢菌素(CSA)(CSA)74造血干细胞移植进展1.8 1.8 移植并发症移植并发症l1)造血和免疫功能受抑造血和免疫功能受抑l2)2)出血性膀胱炎出血性膀胱炎l3)3)间质性肺炎间质性肺炎75造血干细胞移植进展1.8 1.8 移植并发症移植并发症 4)4)肝静脉闭塞病肝静脉闭塞病 5)5)移植物抗宿主病（移植物抗宿主病（GVHDGVHD）和移植排斥反应和移植排斥反应 6)6)晚期并发症晚期并发症76造血干细胞移植进展2骨髓造血干细胞移植的临床应

40、用l血液病血液病 l1 1、血液肿瘤、血液肿瘤 白血病白血病l2 2、非血液肿瘤、非血液肿瘤 再生障碍性贫血再生障碍性贫血2骨髓造血干细胞移植的临床应用骨髓造血干细胞移植的临床应用77造血干细胞移植进展2骨髓造血干细胞移植的临床应用l非血液病非血液病 l1 1、实体瘤、实体瘤1 1）乳腺癌）乳腺癌2 2）小细胞肺癌）小细胞肺癌3 3）生殖腺肿瘤）生殖腺肿瘤2骨髓造血干细胞移植的临床应用骨髓造血干细胞移植的临床应用78造血干细胞移植进展HSCandlungcancerItems1-301of301HSCandbreastcancerItems1-500of124712/5/2005（fromPu

41、bMed）79造血干细胞移植进展2骨髓造血干细胞移植的临床应用4 4）神经母细胞瘤）神经母细胞瘤5 5）其他）其他 进行造血干细胞移植的实体进行造血干细胞移植的实体肿瘤还有脑胶质瘤、结肠癌、胃癌、肿瘤还有脑胶质瘤、结肠癌、胃癌、胰腺癌、肾细胞癌、黑色素瘤、肉瘤、胰腺癌、肾细胞癌、黑色素瘤、肉瘤、鼻咽癌等，有效率鼻咽癌等，有效率0 0100%100%不等。不等。l2 2、自身免疫性疾病、自身免疫性疾病2骨髓造血干细胞移植的临床应用骨髓造血干细胞移植的临床应用80造血干细胞移植进展3.移植适应症的扩大与缩小l19981998年年美美国国学学者者 GoldmanGoldman等等干干细细胞胞移移植植

42、的适应症分成的适应症分成4 4类：类：l经经批批准准的的临临床床研研究究项项目目，如如慢慢性性淋淋巴巴细胞白血病；细胞白血病；l仅仅在在经经批批准准的的专专家家单单位位的的试试点点项项目目，如多发性骨髓瘤；如多发性骨髓瘤；81造血干细胞移植进展3.移植适应症的扩大与缩小l一一般般不不建建议议进进行行，如如慢慢性性髓髓性性白白血血病病的急变期；的急变期；l有有选选择择的的病病人人中中常常规规进进行行，如如生生殖殖细细胞瘤。胞瘤。82造血干细胞移植进展3.移植适应症的扩大与缩小 今今后后将将有有更更多多的的病病种种不不必必用用异异体体移移植植，而而同同时时又又会会有有更更多多的的病种成为异体移植新

43、的适应证。病种成为异体移植新的适应证。83造血干细胞移植进展 肿瘤干细胞的概念肿瘤干细胞的概念 在实体瘤中得到了证实。许在实体瘤中得到了证实。许多治疗癌症的普通方法失效可能多治疗癌症的普通方法失效可能是由于不能杀灭肿瘤干细胞。将是由于不能杀灭肿瘤干细胞。将来的药物研究将针对这些肿瘤干来的药物研究将针对这些肿瘤干细胞。细胞。84造血干细胞移植进展问题与展望l问题问题：继续深入研究继续深入研究 l如何在体外培养大量的造血干细如何在体外培养大量的造血干细胞？体外培养的造血干细胞在体胞？体外培养的造血干细胞在体内是否真正与原来体内的干细胞内是否真正与原来体内的干细胞生物学功能相同？生物学功能相同？85造血干细胞移植进展问题与展望问题与展望l展望：展望：l获取知识产权获取知识产权l基础和应用研究深入基础和应用研究深入l市场和利润巨大市场和利润巨大86造血干细胞移植进展 古希腊物理学古希腊物理学家阿基米德：家阿基米德：给我支点，我就可以转动地球！87造血干细胞移植进展