蛋白质工程的原理和应用课件-2023-2024学年高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

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1、本节聚焦蛋白质工程的基本原理是什么？蛋白质工程已有哪些实际的应用？第4节蛋白质工程的原理和应用第3章基因工程从社会中来你见过用细菌画画吗？从社会中来你见过用细菌画画吗？这些细菌能够发出荧光，是因为在它们的体内导入了荧光蛋白的基因。最早被发现的荧光蛋白是绿色荧光蛋白，科学家通过改造它，获得了黄色荧光蛋白等。那么，科学家是怎样对蛋白质分子进行设计和改造的呢？一、蛋白质工程崛起的缘由对蛋白质分子的设计和改造是通过蛋白质工程来实现的。1蛋白质工程的概念蛋白质工程是指以蛋白质分子的_及其与_的关系作为基础，通过_基因，来改造现有蛋白质，或制造一种新的蛋白质，以满足人类生产和生活的需求。结构规律生物功能改

2、造或合成基础手段目的蛋白质工程是在基因工程基础上延伸出来的，又叫作第二代基因工程。一、蛋白质工程崛起的缘由2蛋白质工程崛起的缘由（1）基因工程的实质将一种生物的_转移到另一种生物体内，后者可以产生它本不能产生的_，进而表现出_。（2）基因工程的不足基因工程原则上只能生产自然界中_的蛋白质。（3）天然蛋白质的不足天然蛋白质的结构和功能符合_生存的需要，却不一定完全符合_的需要。基因蛋白质新的性状已存在特定物种人类生产和生活一、蛋白质工程崛起的缘由（4）实例：提高玉米赖氨酸含量赖氨酸合成352位的苏氨酸变成异亮氨酸104位的天冬酰胺变成异亮氨酸赖氨酸含量+天冬氨酸激酶二氢吡啶二羧酸合成酶提高调 控

3、达到一定浓度酶的活性抑 制限制提高提高改造改造提高5倍提高2倍二、蛋白质工程的基本原理1蛋白质工程的目标根据人们对蛋白质_的特定需求，对蛋白质的_进行设计改造。2改造蛋白质的方法_。功能结构改造或合成基因为什么蛋白质工程需改造基因而不是直接改造蛋白质？(1)任何一种天然蛋白质都是由基因编码的，改造了基因即对蛋白质进行了改造，而且可以遗传下去。如果对蛋白质直接改造，即使改造成功，被改造的蛋白质也是无法遗传的。(2)对基因进行改造比对蛋白质直接改造更容易操作，难度要小得多。二、蛋白质工程的基本原理3蛋白质工程的基本思路预期蛋白质的功能设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列找到并改变相对应的脱氧核

4、苷酸序列(基因)或合成新的基因获得所需蛋白质蛋白质工程是中心法则的逆推某多肽链的一段氨基酸序列是：1怎样得出决定这一段肽链的脱氧核苷酸序列？请把相应的碱基序列写出来。（1）查密码子表得知：丙氨酸（GCU、GCC、GCA、GCG)、色氨酸(UGG)、赖氨酸(AAA、AAG）、谷氨酸（GAA、GAG）、苯丙氨酸（UUU、UUC）。（2）推出mRNA序列为：GCU（或C或A或G）UGG AAA（或G）GAA（或G）UUU（或C）。（3）进一步推出脱氧核苷酸序列为：CGA（或G或T或C）ACC TTT（或C）CTT（或C）AAA（或G）GCT（或C或A或G）TGG AAA（或G）GAA（或G）TTT（

5、或C）。思考讨论丙氨酸色氨酸赖氨酸谷氨酸苯丙氨酸某多肽链的一段氨基酸序列是：2确定目的基因的碱基序列后，怎样才能合成或改造目的基因？（1）确定目的基因的碱基序列后，可以人工合成目的基因，或从基因文库中获取目的基因。（2）对基因的改造经常会用到基因定点突变技术来进行碱基的替换、增添等。思考讨论丙氨酸色氨酸赖氨酸谷氨酸苯丙氨酸4过程 【知识拓展知识拓展】基因的定点突变技术重叠延伸PCR技术重叠延伸PCR技术：一项重要的基因定点突变技术，其主要设计思路是用具有互补配对片段的引物（图中的引物2和3，突起处代表与模板链不能互补的突变位点），分别进行PCR，获得有重叠链的两种DNA片段，再在随后的扩增反应

6、中通过重叠链的延伸获得想要的目的基因。4过程 【知识拓展知识拓展】基因的定点突变技术重叠延伸PCR技术（1）由以上事例可知，要对蛋白质的结构进行改造，需要通过_来完成。改造基因(基因定点突变)4过程 【知识拓展知识拓展】基因的定点突变技术重叠延伸PCR技术（2）在第一阶段获得两种具有重叠片段DNA的过程中，引物1、引物2组成的反应系统和引物3、引物4组成的反应系统中均进行一次复制，共产生_种DNA分子。该阶段必须将引物1、2和引物3、4置于不同反应系统中，这是因为_。3 引物2和3中存在互补配对片段，置于同一反应系统时它们会发生结合而失去作用三、蛋白质工程的应用1医药工业方面实例1：研发速效胰

7、岛素类似物天然胰岛素易形成二聚体或六聚体降低胰岛素的聚合作用改变B链第2029位氨基酸组成B28位脯氨酸替换为天冬氨酸或将它与B29位的赖氨酸交换位置新胰岛素基因有效抑制胰岛素的聚合脯氨酸赖氨酸三、蛋白质工程的应用1医药工业方面实例2：延长干扰素体外保存时间天然干扰素（体外保存困难）改造后的干扰素（-70可保存半年）对编码干扰素分子的基因进行改造时，利用什么技术进行碱基的替换？基因定点突变技术。三、蛋白质工程的应用1医药工业方面实例3：降低人对小鼠单抗隆抗体的免疫反应小鼠单克隆抗体会使人产生免疫反应，降低治疗效果。科学家通过改造基因，将小鼠单克隆抗体上结合抗原的区域（即可变区）“嫁接”到人的抗

8、体（即恒定区）上，降低了诱发人体免疫反应的强度。三、蛋白质工程的应用2在其他工业方面改进酶的性能或开发新的工业用酶如利用蛋白质工程获得枯草杆菌蛋白酶的突变体，筛选出符合工业化生产需求的突变体，提高该酶的使用价值。三、蛋白质工程的应用3农业方面（1）改造某些参与调控光合作用的酶，以提高植物光合作用的速率，增加粮食的产量。（2）设计优良微生物农药，通过改造微生物蛋白质的结构，使它防治病虫害的效果增强。苏云金杆菌-Bt杀虫蛋白三、蛋白质工程的应用4蛋白质工程面临的问题蛋白质工程是一项难度很大的工程，主要是因为蛋白质发挥功能必须依赖于正确的高级结构，而这种高级结构往往十分复杂。要设计出更加符合人类需要

9、的蛋白质，还需要不断地攻坚克难。随着科技的深入发展，蛋白质工程将会给人类带来更多的福祉。由计算机建立的血红蛋白三维结构模型三级结构一级结构四级结构二级结构 异想天开异想天开能不能根据人类需要的蛋白质的结构，设计相应的基因，导入合适的宿主细胞中，让宿主细胞生产人类所需要的蛋白质食品呢？蛋白质食品的工厂化生产想象图理论上讲可以，但目前还没有真正成功的例子。主要原因是蛋白质的高级结构非常复杂，人类对大多数蛋白质的高级结构和蛋白质在生物体内如何行使功能了解得还不够，很难设计出一个全新的而又具有功能的蛋白质。即使设计并获得了一个全新的蛋白质，它的生理生化特性、用它生产的蛋白质食品的安全性等都需要长期深入

10、的研究。即时巩固1干扰素在体外保存非常困难。如果将其分子上的一个半胱氨酸变成丝氨酸，那么可以延长保存时间。若利用蛋白质工程的原理和方法生产新型干扰素，下列思路最可行的是（）A用DNA合成仪合成新的干扰素基因B利用基因定点突变技术改造干扰素基因C直接改造mRNA，进行密码子的替换D生产正常干扰素，再进行氨基酸的替换B即时巩固2纤维素酶广泛应用于医药、食品发酵、造纸、废水处理等领域。研究人员利用蛋白质工程将细菌纤维素酶的第137、179、194位相应氨基酸替换为赖氨酸后，纤维素酶的热稳定性得到了提高。下列有关该技术的说法错误的是（）A经改造后的纤维素酶热稳定性提高这一性状可遗传 B对纤维素酶的改造

11、是通过直接改造mRNA实现的C改造纤维素酶也需要构建基因表达载体D改造后的纤维素酶和原纤维素酶不是同一种酶B即时巩固3下图为蛋白质工程操作的基本思路，请据图回答下列问题。（1）代表蛋白质工程操作思路的过程是_，代表中心法则内容的是_。（填图中序号）（2）写出图中各序号代表的生物学过程的名称或内容：_，_，_，_，_。转录翻译（多肽链的）折叠（蛋白质的）分子设计DNA合成即时巩固3下图为蛋白质工程操作的基本思路，请据图回答下列问题。（3）蛋白质工程的目的是_，通过_实现。（4）从图中可以看出蛋白质工程的基本途径与中心法则是_的。相反获得满足人类生产和生活需求的蛋白质基因改造或基因合成 P P96

12、96练习与应用一、概念检测1蛋白质工程可以说是基因工程的延伸。判断下列相关表述是否正确。（1）基因工程需要在分子水平对基因进行操作，蛋白质工程不需要对基因进行操作。（）（2）蛋白质工程需要改变蛋白质分子的所有氨基酸序列。（）（3）蛋白质工程可以改造酶，提高酶的热稳定性。（）P P9696练习与应用一、概念检测2蛋白质工程是在深入了解蛋白质分子的结构与功能关系的基础上进行的，它最终要达到的目的是（）A分析蛋白质的三维结构B研究蛋白质的氨基酸组成C获取编码蛋白质的基因序列信息D改造现有蛋白质或制造新的蛋白质，满足人类的需求D P P9696练习与应用一、概念检测3水蛭素是一种蛋白质，可用于预防和治

13、疗血栓。研究人员发现，用赖氨酸替换水蛭素第47位的天冬酰胺可以提高它的抗凝血活性。在这项替换研究中，目前可行的直接操作对象是（）A基因B氨基酸C多肽链 D蛋白质A P P9696练习与应用二、拓展应用T4溶菌酶是一种重要的工业用酶，但是它在温度较高时容易失去活性。为了提高T4溶菌酶的耐热性，科学家首先对影响T4溶菌酶耐热性的一些重要结构进行了研究。然后以此为依据对相关基因进行改造，使T4溶菌酶的第3位异亮氨酸变为半胱氨酸。于是，在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，T4溶菌酶的耐热性得到了提高。这项工作属于什么工程的范畴？在该实例中引起T4溶菌酶空间结构发生改变的根本原因是什么

14、？如果要将该研究成果应用到生产实践，还需要做哪些方面的工作？这项工作属于蛋白质工程的范畴。引起T4溶菌酶空间结构发生改变的根本原因是基因的碱基序列发生了变化。如果要将改造后的T4溶菌酶应用于生产实践，还有很多工作需要做。例如由于改造后酶的空间结构发生了变化，因此它的一些基本特性需要重新明确，包括它能耐受的温度范围、催化反应的最适温度、酶活力的大小等；需要建立规模化生产该酶的技术体系，评估生产成本等。P P9898复习与提高1某动物体内含有研究者感兴趣的目的基因研究者亦将该基因导入大肠杆菌的质粒中保存。该质粒含有氨苄青霉素抗性基因(AmpR)、LacZ 基因及一些酶切位点，其结构和简单的操作步骤

15、如图所示。请根据以上信息回答下列问题。(1)在第步中，应怎样选择限制酶？应选择用相同的限制酶或切割能产生相同末端的限制酶。酶切割质粒和含有目的基因的DNA片段，并且注意限制酶的切割位点不能位于目的基因的内部，以防破坏目的基因，限制酶也不能破坏质粒的启动子、终止子、标记基因、复制原点等结构。(2)在第步中，为了使质粒DNA与目的基因能连接，还需要在混合物中加入哪种物质？加入DNA连接酶。P P9898复习与提高1某动物体内含有研究者感兴趣的目的基因研究者亦将该基因导入大肠杆菌的质粒中保存。该质粒含有氨苄青霉素抗性基因(AmpR)、LacZ 基因及一些酶切位点，其结构和简单的操作步骤如图所示。请根

16、据以上信息回答下列问题。(3)选用含有AmpR和LacZ 基因的质粒进行实验有哪些优势？该质粒便与进行双重筛选。标记基因AmpR基因可用于检测质粒是否导入大肠杆菌，一般只含有导入了质粒的大肠杆菌，才能在添加了青霉素的培养基上生长。而由于LacZ基因的效应，这些生长的菌落可能出现两种颜色：含有空质粒（没有连接目的基因的质粒）的大肠杆菌菌落呈蓝色；含有重组质粒的大肠杆菌菌落呈白色。P P9898复习与提高1某动物体内含有研究者感兴趣的目的基因研究者亦将该基因导入大肠杆菌的质粒中保存。该质粒含有氨苄青霉素抗性基因(AmpR)、LacZ 基因及一些酶切位点，其结构和简单的操作步骤如图所示。请根据以上信

17、息回答下列问题。(4)含有重组质粒的大肠杆菌菌落呈现什么颜色？为什么含有重组质粒的大肠杆菌菌落呈白色。因为目的基因的插入破坏了LacZ基因的结构，使其不能正常表达，形成半乳糖苷酶，底物也就不能被分解。P P9898复习与提高2科学家将Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4基因通过逆转录病毒转入小鼠成纤维细胞中，然后在培养ES细胞的培养基上培养这些细胞。23周后，这些细胞显示出ES细胞的形态、具有活跃的分裂能力，它们就是iPS细胞。请回答下列问题。(1)在这个实验过程中，逆转录病毒的作用是什么？逆转录病毒是载体，能将外源基因Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4送入小鼠成纤维细胞。P

18、 P9898复习与提高2科学家将Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4基因通过逆转录病毒转入小鼠成纤维细胞中，然后在培养ES细胞的培养基上培养这些细胞。23周后，这些细胞显示出ES细胞的形态、具有活跃的分裂能力，它们就是iPS细胞。请回答下列问题。(2)如何证明iPS细胞的产生不是由于培养基的作用？可以设置对照组。将转入外源基因和没有转入外源基因的细胞分别培养在相同培养基中，并确保其他培养条件相同。如果只有转入外源基因的细胞转化成了ips细胞，就可以证明ips细胞的产生不是由于培养基的作用。P P9898复习与提高2科学家将Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4基因通过逆转录病毒转

19、入小鼠成纤维细胞中，然后在培养ES细胞的培养基上培养这些细胞。23周后，这些细胞显示出ES细胞的形态、具有活跃的分裂能力，它们就是iPS细胞。请回答下列问题。(3)如果要了解Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4基因在诱导产生iPS细胞时，每个基因作用的相对大小，该如何进行实验？请你给出实验设计的思路。可以依次去掉一个基因，将其他三个基因转入小鼠成纤维细胞中，然后通过已转入4个基因的小鼠成纤维细胞的诱导情况进行比较，来推测缺失的那个基因对诱导产生ips细胞的影响，进而判断每个基因作用的相对大小。P P9898复习与提高2科学家将Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4基因通过逆转录病

20、毒转入小鼠成纤维细胞中，然后在培养ES细胞的培养基上培养这些细胞。23周后，这些细胞显示出ES细胞的形态、具有活跃的分裂能力，它们就是iPS细胞。请回答下列问题。(4)若将病人的皮肤成纤维细胞诱导成iPS细胞，再使它转化为需要的细胞，用这些细胞给该病人治病，这是否会引起免疫排斥反应？为什么？iPS细胞具有分裂活性，用它进行治疗时可能存在什么风险？不会引起免疫排斥反应，因为在诱导转化的过程中，细胞的遗传物质没有发生变化，理论上产生的还是“自体”细胞。ips细胞有分化成各种细胞的潜能，因此存在分化成肿瘤细胞的风险。思维导图晨读必背1基因工程原则上只能生产自然界中已存在的蛋白质。2蛋白质工程并不是直接改造蛋白质分子的结构，而是通过基因操作来实现对天然蛋白质的改造。3蛋白质工程的基本思路：从预期的蛋白质功能出发设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列(基因)或合成新的基因获得所需要的蛋白质。4蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过改造或合成基因，来改造现有蛋白质，或制造一种新的蛋白质，以满足人类生产和生活的需求。作业：完成课后相关练习作业：完成课后相关练习