无菌检查方法验证表和检查记录表.docx

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1、无菌方法验证品名:批号:规格：检查时间:1 ,培养基：硫乙醇酸盐流体培养基，批号：由：提供;营养肉汤，批号：由：提供;改良马丁培养基批号：由：提供。2 .验证试验用菌种：(1)金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)CMCC(B) 26003；(2)枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis) CMCC(B) 63501；(3)大肠埃希菌(Escherichia coli) CMCC(B) 44102；(4)铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) CMCC(B) 10104(5)生抱梭菌(Clostridium sporogenes)CMCC(B

2、) 64941 ；(6)白色念珠菌(Candida albicans)CMCC(F) 98001；(7)黑曲霉菌(Aspergillus niger) CMCC(F)98003 03 .仪器和滤器：HTY-2000A集菌仪，STV3封闭式/开放式无菌检查薄膜过滤器，浙江宁海 白石药检仪器厂。4 .方法：中国药典2005版二部附录。5 .操作方法：5.1 菌液制备：取金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物少许接种 至营养肉汤培养基中，生胞梭菌的新鲜培养物少许接种至硫乙醇酸盐流体培养基中，培养 小时。取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、铜绿假单抱菌、生抱梭菌肉汤

3、培养物,加生理盐水，10倍递增稀释至约1。-510-8之间，其中金黄色葡萄球菌取稀释级，铜绿假单抱菌取稀释级，大肠埃希菌取稀释级，枯草芽泡杆菌取稀释级，生抱梭菌取稀释级。白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基中，培养 小时。再取白色念珠菌真菌斜面培养物，加入生理盐水洗下狗子，吸出转移至空试管作为原液，取 加 生理盐水，10倍递增稀释至 ，取加生理盐水 ，混匀备用。将黑曲霉菌斜面的新鲜培养物接种至改良马丁培养基上， 培养 ，使大量的泡 子成熟。再取黑曲霉真菌斜面培养物，加入生理盐水 洗下徇子，吸出转移至空试管作 为原液，稀释至，取 加生理盐水 混匀备用。5.2 菌液计数：分别取上述5种细菌菌

4、液 加入硫乙醇酸盐流体培养基中，每种菌 液做平行 管。 C培养 。分别取上述2种真菌菌液 加入改良马丁培养 基中，每种菌液做平行 管。 培养 。细菌和真菌数计数结果分别见表1和 表2o表1 细菌数计数结果菌种大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽泡杆菌铜绿假单胞菌生抱梭菌计数(CFU)均值(CFU)表2 真菌数计数结果菌种黑曲霉菌白色念珠菌计数(CFU)均值(CFU)5.3 培养基灵敏度检查：取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基11支，分别接种的大 肠埃希菌菌液 ml,金黄色葡萄球菌菌液 ml、枯草芽胞杆菌菌液 ml、铜绿假单胞菌 菌液 ml、生胞梭菌液 ml各2支，另1支不接种作为空白对照，培

5、养3天。取每管装量 为9nli的改良马丁培养基5支，分别接种白色念珠菌菌液 ml,黑曲霉菌 ml各2支， 另1支不接种作空白对照，培养5天。结果如下表：表3硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度检查观察结果菌种大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽胞杆菌铜绿假单胞菌生抱梭菌CFU阴性对照表4改良马丁培养基灵敏度检查观察结果菌种黑曲霉菌白色念珠菌CFU阴性对照6 .供试液制备：取样品 袋，分别用力挤压使两室完全贯通，药物充分溶解备用。7 .薄膜过滤：将供试品液按薄膜过滤法过滤，氯化钠-蛋白陈缓冲液冲洗，每次 ，冲 洗液量分别考察：ml,ml,在最后一次的冲洗液中逐一加入试验菌少于100CFU。按规定将培养基直接加至

6、滤筒内。每天观察并记录结果。7.1 阳性对照：取以配制好的大肠埃希菌菌液 ml,金黄色葡萄球菌菌液 ml、枯草芽泡 杆菌菌液 ml、铜绿假单胞菌菌液 ml、生胞梭菌细菌菌液 ml,分别接种至硫乙醇酸 盐流体培养基中；取白色念珠菌菌液 ml,黑曲霉菌 ml,分别接种至改良马丁培养基。7.2 阴性对照：两个滤器桶内各过滤氯化钠-蛋白陈缓冲液ml,然后取出滤膜分别加入硫乙醇酸盐培养基和改良马丁培养基中，不加对照菌液，分别给以相应条件培养。8 .培养：硫乙醇酸盐流体培养基培养；改良马丁培养基培养 。9 .结果9.1 实验结果见表5和表6。表5细菌实验结果（20小时观察）大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽抱杆菌铜绿假单胞菌生抱梭菌冲洗量ml冲洗量ml阳性对照阴性对照表636小时观察真菌结果黑曲霉菌白色念珠菌冲洗量ml冲洗量ml阳性对照阴性对照10 .结论:检验人:复核人:菌 检 查 记 录品 名规格批号检测日期供试液的配制：。检查法：1、直接接种法 2、薄膜过滤法培养时间（天）1234567891011121314备注硫乙醇酸盐流 体培养基改良马丁培养 基阳性对照阴性对照结 论复核人:检验人: