脱毒苗培育(课堂PPT).ppt

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1、脱毒苗培育1一、病毒病对作物的危害一、病毒病对作物的危害 无性繁殖作物一旦感染病毒，代代相传，体内不断积累，严重影响植株生育。病毒病不能采用杀菌剂和抗生素防治，生产上尚无法根治。蕙兰嵌纹病毒病Cymbidium Mosaic Virus一串红病毒病 苹果花叶病毒Apple mosaic virus 2 脱毒苗指通过物理、化学、生物技术等方法去除已知某些特定通过物理、化学、生物技术等方法去除已知某些特定病毒的苗木病毒的苗木。（1）脱毒苗只是相对而言脱毒苗只是相对而言，许多植株含有多种已知病毒及尚未鉴定的未知病毒，通过茎尖培养的幼苗，经过鉴定只能说出去了已知的主要病毒，因此称之为“无特定病毒苗”更

2、为合理。（2）脱毒苗并不具有病毒病抗性脱毒苗并不具有病毒病抗性，在今后种苗繁育过程中有可能重新感染病毒病。马铃薯脱毒苗3二、脱毒苗培育方法二、脱毒苗培育方法（一）热处理脱毒（一）热处理脱毒 1.原理：病毒受热以后不稳定性，使病毒钝化，失去活性，高温可以延缓病毒扩散速度和抑制其增殖。2.方法：热水浸泡-接穗在50热水中浸泡数分钟或数小时。高温空气处理-旺盛生长植物在3340条件下生长发育，热处理之后立即把茎尖切下来嫁接到无病砧木上。3.局限性：只对球状、线状病毒有效，对杆状病毒不起作用。4（二）茎尖培养脱毒（二）茎尖培养脱毒1.原理u 病毒在植物体内的分布是不均匀的。老叶片及成熟的组织和器官病毒

3、含量较高，而幼嫩的及未成熟的组织或器官病毒含量较低，生长点（0.11.0 mm区域）则几乎不含或含病毒很少。u 在植物体内，病毒易于通过维管系统而移动，但在分生组织中不存在维管系统，病毒在细胞间移动的另一途径是通过胞间连丝，但是速度很慢，难以追赶上活跃生长的茎尖。u 在旺盛分裂的分生细胞中，代谢活性很高，使病毒无法进行复制。u 在分生组织中病毒钝化系统比其它区域都具有更高的活性，因而分生组织不受侵染。u 在茎尖中存在高水平的内源生长素，可以抑制病毒的增殖。52.方法（1）材料的准备 一般说来，带有叶原基的茎尖易于培养，成苗快，培养时间短，要获得无病毒植株，理论上茎尖越小越好，实际应用时，根据病

4、毒种类不同切取0.11mm大小的生长点，即可获得无病毒植株，外植体越小，培养难度越大，或者时间越长。6（2）材料消毒 流水冲洗5 min-洗涤剂-流水冲洗30min-70%酒精35min-升汞810min-无菌水冲洗34次（3）茎尖分生组织分离 如果进行普通茎尖培养，外植体形大些为好，一般切取0.51cm长的茎尖或整个芽；若进行茎尖分生组织脱毒培养，外植体应该尽量小些，通常在解剖镜下剥掉细叶及叶原基，将生长点暴露，然后切取0.11mm长的部分作为培养材料。73.接种与培养 以MS培养基为基本培养基，White、B5、Morel等培养基也常用于茎尖培养，蔗糖浓度一般为3%，过高或过低会抑制生长，

5、应提高K+与NH4+含量，促进茎尖生长。细胞分裂素可促进细胞分裂和分化，诱导不定芽形成，有助于解除顶端优势，促进腋芽萌发。常用的有BA、KT，前者用于油菜、豌豆、菜心等蔬菜快繁，后者多用于莴苣。8 生长素类物质如IAA、IBA、NAA、2，4-D等具有促进新梢生长的显著作用，并可诱导外植体产生愈伤组织和生根。往往低浓度的生长素与细胞分裂素配合可以达到促进芽增殖，提高繁殖效果的作用。百合 MS+BA 0.51.0mg/L+NAA 0.5mg/L 苹果 MS+BA 0.51.0mg/L+GA3 0.10.5mg/L+IBA 0.20.5mg/L9（三）热处理结合茎尖培养脱毒（三）热处理结合茎尖培养

6、脱毒（四）微体嫁接脱毒（四）微体嫁接脱毒 微体嫁接是组织培养与嫁接方法相结合来获得无病毒苗木的一种技术。它是将0.10.2mm的茎尖作为接穗，嫁接到由试管中培养出来的无菌室生砧木上，继续进行试管培养，愈合成为完整的植株。（五）愈伤组织培养脱毒（五）愈伤组织培养脱毒（六）抗病毒药剂脱毒（六）抗病毒药剂脱毒-抗病毒醚抗病毒醚10三、脱毒苗鉴定方法三、脱毒苗鉴定方法（一）指示植物法（一）指示植物法 利用病毒在其他植物上出现的症状特征，作为鉴定病毒种类的标准，这种专用于产生症状的寄主植物称为指示植物。指示植物分类：（1）接种后产生系统症状，并扩展到非接种部位；（2）只在接种部位产生局部病斑、坏死或褪绿

7、环状病斑。指示植物要求：常年栽培，较长时间内保持对病毒敏感性，易于接种。常见的指示植物有苋色藜、千日红和多种烟草。千日红 Gomphrena globosa 烟草 Nicotiana tabacum11 方法：从待测植株上取13g幼叶，加入少量pH7.0的0.1mol/L磷酸缓冲液，研成匀浆，吸取少量涂抹在500600目金刚砂擦伤表皮的指示植物叶片上，5min后用清水冲洗叶面，将接种植物放在防虫罩内，2025条件下培养数天至数周后观察症状。12（二）电镜显微检测法（二）电镜显微检测法 直接观察病毒微粒的存在与否，以及病毒的大小、形态结构和种类，可以显示细胞与组织中病毒的精确定位。TMV杆状病毒杆状病毒13（三）抗血清鉴定法（三）抗血清鉴定法 植物病毒也是一种抗原，能引起动物产生抗体，由于不同病毒产生的抗血清（含有抗体的血清）都具有特异性，用特定病毒的抗血清拉鉴定病毒具有高度的专一性，但是制备抗原和免疫过程比较复杂。14（四）酶联免疫测定法（四）酶联免疫测定法（ELISA）将抗原与抗体的免疫反应和酶的高效催化作用结合起来，形成一种酶标记的免疫复合物，结合在该复合物上的酶遇到相应的底物时，催化无色的底物产生水解形成有色产物，从而可以用肉眼观察或用比色定性、定量判断结果。15