血浆miRNA在鼻咽癌发生发展中的表达差异性研究.docx

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1、血浆miRNA在鼻咽癌发生发展中的表达差异性研究 摘要 目的 应用miRNA芯片技术，探讨血浆miRNA在鼻咽癌发生、发展中的表达差异性，初步筛选出与鼻咽癌相关的miRNA，为鼻咽癌早期发觉、早期诊断、早期治疗供应依据。 方法 选取90例初次接受治疗的鼻咽癌患者及健康成年人60例，分别收集全部探讨对象的血浆标本，分别miRNA，运用GenePix4000B芯片行比较分析病例组与比照组之间miRNA的表达是否存在差异。 结果 通过比较，各组一般资料无差异，90例鼻咽癌患者临床分期为期组20例，期组20例，期组25例，期组25例；通过miRNA芯片检测发觉差异表达miRNA31个，在这31个miR

2、NA中，上调有26个，下调有5个，差异具有统计学意义。 结论 鼻咽癌患者和健康人血浆中含有的miRNA表达存在差异，提示miRNA参与到鼻咽癌病情的发生以及发展当中，可为鼻咽癌的早期发现，早期诊断，早期治疗提供理论依据。 关键词 鼻咽癌；miRNA；表达；差异性 中图分类号 R739.63 文獻标识码 A 文章编号 2095-061609-217-03 Differential expression study of plasma miRNA in the occurrence and development of nasopharyngeal carcinoma LUO Fengling D

3、U Hongying MAO Jinxing KUANG Biru LI Jiaxiang Department of Oncology，Zhaoqing First Peoples Hospital，Zhaoqing 526000，China Abstract Objective To study the differential expression of plasma miRNA in the occurrence and development of nasopharyngeal carcinoma by miRAN chip technology，to conduct the pre

4、liminary screening of the miRNA associated with nasopharyngeal carcinoma，and to provide evidence for early detection，early diagnosis and early treatment of nasopharyngeal carcinoma. Methods 90 patients with nasopharyngeal carcinoma in the initial treatment and 60 cases of healthy adults were selecte

5、d.Plasma samples were collected from all subjects to separate the miRNA.GenePix4000B chip was used to compare and analyze the differential expression of case group and control group. Results By comparison，there was no difference in general data.90 patients with nasopharyngeal carcinoma were divided

6、into stage I group，stage II Group，stage III groupand stage IV group.There were 31 cases different in the expression of miRNA by miRNA.Among the 31 cases of miRNA，there were Up by 26，down by 5，and the difference was statistically significant. Conclusion The expression of miRNA in plasma of NPC patien

7、ts and healthy people is different.It is suggested that miRNA is involved in the occurrence and development of NPC.It can provide theoretical basis for early detection，early diagnosis and early treatment of nasopharyngeal carcinoma. Key words Nasopharyngeal carcinoma；miRNA；Expression；Difference 鼻咽癌是

8、我国南方地区最常见的恶性肿瘤之一，以明显的区域分布特征、剧烈的转移倾向为显著特征1。大宗临床病例视察显示鼻咽癌病人不易早期发觉2。而有关鼻咽癌的分子标记物探讨中，EB病毒VCA-IgA、EA-IgA及血液中EBV-DNA拷贝数改变虽然在肯定程度上可监测鼻咽癌疗效，但目前还没有被FDA承认的鼻咽癌诊断及预料预后的分子标记物3。如何能够早期发觉、预料肿瘤对治疗的敏感性、预料预后、监测复发或转移对鼻咽癌诊治、干预具有重要的临床意义。然而，正常状况下血浆中存在miRNA，可能为细胞、组织、器官之间的信息传递方式，一般正 常人群的血浆miRNA表达谱改变不大，肿瘤细胞也可通过微泡主动释放miRNA入血，

9、随之其表达谱可发生改变，由于血浆中miRNA分子量小且被微泡爱护，稳定性好，重复性高4，所以血浆miRNA将有可能为肿瘤分子标记物的探讨带来曙光，其临床应用意义前景广袤。本探讨拟通过芯片技术，测定健康人群与鼻咽癌患者血浆miRNA表达的差异，为鼻咽癌miRNA筛选及早期诊断供应理论依据，现报道如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料 选取2016年6月1日2016年12月1日在我院肿瘤科住院的并有完整随访资料及血样标本的初诊鼻咽癌患者90例，其中男53例，女37例，平均年龄岁，鼻咽癌2008分期期组20例，期组20例，期组25例，期组25例。另外，选取解除重大系统性疾病及肿瘤病史的正常人血浆标

10、本60例作为比照组，其中男36例，女24例，平均年龄岁。全部病例均经过病理学检查确诊，既往无放疗或化疗史。根据血清采集的标准操作规程收集鼻咽癌患者的血清标本，驾驭鼻咽癌患者的基本资料和临床资料。两组之间性别、年龄差异无统计学意义，具有可比性。本探讨经医院伦理委员会同意，全部患者和志愿者均签署知情同意书。 1.2 探讨方法 1.2.1 血浆RNA的提取 在Eppendorf 离心管中加入1mL Trizol试剂，充分振荡混匀，混匀后将溶液转移至另一个Eppendorf离心管中，加入200L氯仿，再次充分振荡混匀；将Eppendorf离心管放入离心机中，设置温度为4，转速为12000rpm，充分别

11、心15min；打开Eppendorf离心管，将离心后的上清液转移至另一个Eppendorf离心管中，加入500L异丙醇溶液，混合匀称后室温于静置 15min；重复第2步骤，再次离心，离心完成后，弃掉上清液，加入1Ml 75%乙醇溶液，再次充分振荡混匀；再次离心：4，7500rpm，5min；离心完成后，打开Eppendorf离心管，弃掉上清液，并在超净工作台中干燥510min；加入4060L无RNA酶的水，用枪反复吹打，帮助沉淀的RNA溶解。 1.2.2 血清总RNA中miRNA的分别 取50101.0g总RNA，用Qiagen公司的miRNA分别提取试剂盒对总RNA中的miRNA进行分别。

12、1.2.3 miRNA样品的荧光标记 利用T4 RNA连接酶对miRNA样品进行荧光标记，然后再用无水乙醇沉淀。 1.2.4 芯片扫描、分析及数据分析 芯片运用Axon GenePix 4000B双通道激光扫描仪进行扫描，并用Axon公司的 GenePix 4000B 图像扫描仪对微阵列芯片进行扫描，同时用Axon公司的GenePix pro V6.0图像分析软件分析扫描转化得到的数字信号。 1.3 统计学方法 釆用SPSS18.0统计软件进行数据分析。计量资料以表示，采纳t检验，计数资料以一百零一分比表示，采纳2检验，P1.50，具有明显差异。5个下调的miRNA所对应的靶基因可能会富集在4

13、条通路：肿瘤相关通路，嘌呤代谢途径，Wnt信号通路以及轴突导向通路11-12；上调miRNA不具有明显富集通路，miRNA与鼻咽癌亦存在紧密关联。相关探讨表明，鼻咽癌患者组织中和健康人组织内含有的 miRNA表存在差异，提示miRNA或许参加到鼻咽癌病情的发生以及发展13-15。 综上所述，本探讨通过分子芯片技术对初次诊断为鼻咽癌患者和健康成年人血浆中miRNA的表达谱进行比较，发觉具有明显差异性表达的人源性miRNA31个，其中上调26个，下调5个，提示鼻咽癌可导致患者血浆中miRNA的变更，确定了正常健康人与鼻咽癌患者之间血浆miRNA的表达存在差异，可以为鼻咽癌的早期诊断供应生物指标，同

14、时，能够为鼻咽癌的早期治疗及临床个体化治疗供应依据。 参考文献 1 刘孟忠.鼻咽癌治疗新进展J.广东医学，2022，35：1-4. 2 潘刚毅.鼻咽癌诊治进展J.中国美容医学，2022，21：373-373. 3 黄小颜，许琳，温本，等.动态监测EB病毒抗体对鼻咽癌的诊治价值J.中华好用诊断与治疗杂志，2022，28：4101-4101. 4 Tyagi N，Arora S，Deshmukh S K，et al.Exploiting Nanotechnology for the Development of MiRNA-Based Cancer TherapeuticsJ.J Biomed N

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