RNA提取、定量及RT—PCR综合性实验在分子生物学检验技术教学中的实施.docx

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1、RNA提取、定量及RTPCR综合性实验在分子生物学检验技术教学中的实施 摘 要 分子生物学检验技术是医学检验专业重要的专业课程，试验教学尤其是综合性试验的教学对学生综合技能的培育至关重要。本文从试验设计思路、 组织实施、 实施效果、 教学体会等方面阐述RNA提取、定量及RT-PCR综合性试验在分子生物学检验技术教学中的实施，并分析教学中存在的问题，提出相应的解决对策，为有关院校开设相关综合性试验教学供应参考。 关键词 RNA 综合性试验 分子生物学检验技术 教学 中图分类号：G424 文献标识码：A DOI：10.16400/ki.kjdkx.2022.12.042 Abstract Mole

2、cular Biology Diagnostic Technique is an important professional course in laboratory Medicine. Experimental teaching， especially the teaching of comprehensive experiment is very important to the cultivation of students comprehensive skills. This paper expound the teaching implementation of comprehen

3、sive experiment “extraction and quantification of RNA and RT-PCR” in molecular biology diagnostic technique from the experimental design ideas， organization， implementation， implementation effect， teaching experience and so on. Analyze the problems existing in the teaching， and put forward the corre

4、sponding countermeasures. Provide a reference of teaching on experiment of “extraction and quantification of RNA and RT-PCR” for some colleges. Keywords RNA； comprehensive experiment； Molecular Biology Diagnostic Technique； teaching 1 试验设计思路 RNA提取、定量及RT-PCR综合性试验主要由RNA提取、RNA定量和RT-PCR这三个部分组成。在本校的试验设计中

5、，目标基因采纳常用 -actin基因片段。试验首先用TRizol试剂提取小鼠肝脏总RNA，然后用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳法检测所提取RNA的纯度和含量，最终利用引物oligo在逆转录酶作用下制备cDNA模板，通过小鼠 -actin基因的特异引物扩增出 -actin基因片段，并用琼脂糖凝胶电泳法检测扩增产物。试验内容涉及RNA的分别与纯化技术、紫外比色技术、凝胶电泳技术、RT-PCR技术等探讨技术与方法，具有较好的好用性和先进性。 2 试验组织实施 RNA提取、定量及RT-PCR综合性试验所涵盖的学问面特别广，整个试验历时长，对学生的细心程度和试验技能要求较高，在试验过程中，有些试剂有剧烈

6、的刺激性气味且伴有毒性，而且任何一个环节的微小错误，都有可能导致试验最终失败，故试验须要在特别环境下进行。为了使学生在试验中能够学到更多的学问，并且顺当地完成试验，首先，学生应当在试验课前通过试验指导书和互联网了解试验的相关内容进行预习，熟识试验的原理、仪器的运用方法、试剂的作用、操作步骤和留意事项，并与其他学生探讨预习过程中遇到的问题，若仍不能解决，则在老师讲解试验时边听边思索，务必在做试验之前弄懂试验的关键点和每个步骤的目的，尽量避开盲目操作和错误操作；其次，试验施教时，老师通过PPT展示和现场演示进行讲解，同时提出问题让学生回答，加深学生对试验要点的理解，并解答学生在预习过程中遇到的怀疑

7、；再次，学生了解清晰每个步骤的操作、目的和留意事项后，起先进行试验，试验过程中，学生严格根据试验指导的说明来进行操作，在通风厨中进行加样，且要留意戴好口罩和手套，防止酶等因素影响试验，老师应督促和提示学生是否有不当的操作，协助学生完成试验；最终，老师对试验结果进行引导性的讲解，布置学生写试验报告，并要求学生在试验报告中结合试验原理对结果进行分析探讨，写明试验中的留意事项和试验要点，提出一些具有探究性的问题，以此启发学生的逻辑思维和创新思维，加深学生对试验的了解，并在肯定程度上激发学生对分子生物学检验技术试验的爱好。 3 试验实施效果 3.1 巩固理论学问，提高运用学问实力 由于分子生物学检验技

8、术这门学科的理论学问较为抽象、困难难懂，学生在预习试验的过程中，须要查阅书本、上网观看试验视频或者在网上查找资料以便更好地理解试验原理、操作步骤和留意事项，等等。同时，学生也对这个试验所涉及的学问点有了更好的驾驭。学生在分析试验结果的过程中，困难、抽象的理论学问转化成实物，可以帮助学生对课本中的学问点有更清楚的相识，这正是每个试验所要达到的目的。 3.2 提高独立解决问题的实力和自主学习实力 在学生预习试验的过程中，通過网络资源观看与此试验有关的Flash动画、视频，阅读一些图片和文字解说，或者是学生之间的沟通，都有益于解答试验前的各种怀疑，这样既熬炼了学生在网络上查找资料的实力，同时也提高了

9、学生独立解决问题的实力，而不会在试验课时依靠老师的讲解或者盲目地照着试验指导书做试验。 3.3 提高试验操作技能 分子生物学检验技术试验的特色之一就是微量，在此综合性试验中，加入氯仿离心后，须要在一个较为困难的体系中吸取水相中的RNA，此过程伴有少许刺激性气味，再加上吸取的量特别少，很简单吸到有机相中的蛋白质或漂移在液面上层的苯酚，因此，在这个步骤中，学生的试验操作技能可以得到很好的熬炼；另外，在逆转录制备cDNA和PCR扩增 -actin基因片段这两个步骤中，整个体系都是只有20 L，其中的模板、引物、酶、dNTP和缓冲液都不超过5 L，学生们加样时须要特别当心，比如加样之前视察枪头，预料所

10、吸的溶液量是否达标，加样时聚精会神，片刻的分心都有可能导致试验失败，学生对于微量加样的操作实力可以在此过程中得到极大的提高。 3.4 增加主观能动性，提兴奋趣 试验过程中，学生全程独立完成，从微量加样到启动离心机，从琼脂糖凝胶制备到启动电泳仪，老师只起到督促和提示的作用，这样学生可以全身投入，主动性很快就被调动起来，并对这门学科产生深厚的爱好，在这种状况下，一个良好的综合性试验可能成为学生学习分子生物学检验技术的动力源泉和启蒙点。 3.5 增加团队意识 随着现代科技的飞速发展，科学探讨越来越重视团队合作，单靠一个人的力气很难事事通晓、四平八稳，因此，老师应当有意识地培育学生与他人合作、沟通、沟

11、通的实力。在RNA提取、定量及RT-PCR综合性试验中，几乎每一步都牵涉到团队合作，比如为了高效率地进行试验，须要等齐全部同学才开启离心机、PCR扩增仪，还有，琼脂糖凝胶电泳过程中学生们的相互协作是试验胜利的关键，因此，这个试验有效地提高了学生的团队意识。 4 教学体会 RNA提取、定量及RT-PCR综合性试验所涉及的学问面特别广，耗时较长，学生很难驾驭每一个试验操作步骤和留意事项，也很难从始至终保持留意力的集中，笔者提出对此试验存在的问题及相应对策总结如下： 学生上试验课前不预习的现象普遍存在，在试验过程中只是“照单抓药”机械性地操作，以致他们对试验原理、操作、结果等不理解。完全依靠老师在试

12、验课上的讲解来学习试验是远远不够的，而且试验课的学时有限，老师的讲解只是起引导性的作用，须要学生通过查找资料等课前预习的方式才能学习得更加细致和深化。所以，应激励学生在课前通过课本和网络资源预习试验，必要时老师可以在课前对学生进行有关试验内容的提问，以提高学生课前预习的主动性。 试验过程中有些学生因操作失误导致试验的误差过大甚至试验失败，比如在RNA提取过程中的微量加样和微量吸取，都是简单引起较大误差的操作，部分学生因操作失误使提取的RNA纯度过低；有些学生在制备cDNA和PCR扩增 -actin基因片段体系中漏加、多加试剂，导致 -actin基因片段扩增失败；还有些学生在琼脂糖凝胶电泳加样时

13、戳破凝胶，或没有将样品精确加入梳孔中。这些失误多为学生操作不娴熟或者没有经过课前的预习所致，老师在试验过程中除了做示范，引导学生之外，还应多激励学生，告知他们不必惊慌。有条件的试验室还可以在周末开放试验室，让学生吸取失败的教训之后其次次进行试验，弥补第一次试验的失误，同时也给学生一个练习操作的机会。 试验课结束后，有部分学生对试验报告的看法不仔细，只是照抄试验指导书的目的、原理、操作步骤，再加上试验结果，这样会大幅度降低了试验的预期效果，达不到完整的教学目的。对于这种状况，老师可以引导学生重视试验报告的探讨部分，比如，各个操作步骤的目的，试验的关键点和留意事项，对试验结果的分析，以及学生在试验

14、过程中的体会等等。务必使学生将试验课中所遇到的问题与理论学问联系起来，解答问题并写在试验报告中，达到试验课和理论课相互协助的目的。 RNA提取、定量及RT-PCR综合性试验大约须要8个学时，在排课时有两种可行方案。第一，可以将此综合性试验分为两次完成，第一次在完成RNA定量后结束，将另一部分提取好的RNA置于-20 保存，其次次试验时取出RNA接着完成RT-PCR部分。分两次课做完这个综合性试验。其次，课时支配允许的状况下，也可以在一天内，如上午加下午或下午加晚上，一次性完成此综合性试验，保证明验的连贯性，使同学们做试验时有更清楚的思路，更简单理解试验的前因后果。 *通讯作者：侯敢 基金项目：

15、广东省高等教化教学改革项目“基于培育学生创新实力的分子診断学试验教学综合改革与实践”，广东省高等教化教学改革项目“医学检验技术专业实施班导师制的探究与实践”，广东省本科高校教学质量与教学改革工程项目、广东医科高校教学质量与教学改革工程建设项目“临床生物化学检验教学团队”。 参考文献 1 李江滨，林锦琼，李育超，等.“重组质粒的转化、提取及酶切分析”综合性试验在医学检验专业分子诊断学教学中的实施J.教化教学论坛，2022.35：273-273. 2 褚玉新，王晓春.医学检验本科分子诊断学试验教学的探讨J.湖南医科高校学报，2022.11：245-246. 3 李江滨，谭荧飞，李育超.Western-blot综合性试验在分子诊断学教学中的实施J.科技创新导报，2022：142. 4 姚群峰，黄必胜，薛津若，等.医学检验专业分子诊断学理论与试验教学改革初探J.湖北中医学院学报，2022.9：6-7. 5 郝峰，郭素红，王皓，等.医学检验专业本科分子诊断学课程教学探讨J.中国西部科技，2022.13：66-73. 第8页 共8页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页