多态性引物 蒙药冷蒿的遗传多样性随机引物多态性分析.docx

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1、多态性引物 蒙药冷蒿的遗传多样性随机引物多态性分析 摘要：目的探讨内蒙古通辽地区蒙药冷蒿的遗传特异性及通辽、呼和浩特、锡林郭勒3个不同地区蒙药冷蒿的遗传多样性。方法采纳随机引物多态性(RAPD)方法，从17组RAPD引物中筛选出13组条带清楚、多态性明显并且重复性好的引物用于试验，并利用Popgen32和NTSYS软件进行数据计算与聚类分析。结果13组引物共产生的209条带中，有201条多态性带，多态位点一百零一分率达96.17%。 3个地区蒙药冷蒿Ht=0.238 1，Hs=0.187 4，Dst=0.050 7，地区间的Gst=0.212 9。通过UPGMA分析，呼和浩特与锡林郭勒盟冷蒿聚

2、为一类，通辽冷蒿单独聚为一类。结论冷蒿具有较高的遗传多样性且不同地区差异明显。冷蒿居群总的遗传多样性来自于居群内(78.71%)，且居群间有基因的沟通。关键词：冷蒿种群 改进CTAB RAPD 遗传多样性蒙药冷蒿Atremisia frigida(蒙语：阿给)，又名小白蒿、菟毛蒿，菊科蒿属的小灌木，是蒙医的常用药，主要分布在内蒙古13。近年来，随着中药材标准化进一步深化，为提中学药质量和临床效果，中药材的道地性的探讨越来越受到重视46。但对民族药的道地性探讨甚少。长期以来，蒙药冷蒿始终在民间用于出血疾病的治疗7。探讨发觉，不同产地来源的蒙药冷蒿制炭后止血效果差异显著，而且来自荒漠草原的蒙药冷蒿

3、制炭后活性成分的含量偏高。目前，冷蒿药材来源为野生冷蒿，随着荒漠化的进程，以及药材的大量开采，将使冷蒿变成濒危物种。为了避开野生药用植物的枯竭，势必要进行药材的规范化栽培种植(GAP)，对冷蒿遗传背景的分析，不但可以从遗传学角度视察引起冷蒿质量变异的缘由，也可以为冷蒿栽培种植供应理论指导。一、通辽居群内部遗传多样性分析本课题组采纳通辽31株冷蒿样本的DNA作为通辽地区冷蒿居群内RAPD扩增的样本。1. 居群内RAPD扩增带的多态性分析13个引物在通辽31株冷蒿样本中共扩增条带数为209，多态性条带数为180，多态位点比率为86.12%，平均每个引物扩增的DNA带数为13.8条，位点分子量范围均

4、在2002 000 bp之间。2.居群内样本的聚类分析遗传相像度在0.220.76之间，其能够在肯定程度上反应个体间DNA的差异，依据相像度计算遗传距离(本探讨中各个体间遗传距离未列出)，从而利用UPMGA法进行聚类分析，得到个体间亲缘关系分枝树系图。二、居群间遗传多样性分析呼和浩特、锡林郭勒冷蒿干药材混合匀称，随机取样进行DNA的提取，选取DNA完整性好、含盐量少，RAPD扩增结果稳定的3个不同批次的DNA样本，代表其所在居群进行遗传多样性检测和分析。鉴于居群遗传多样性指数与居群样本数相关，随机从通辽31个DNA样本中选取5个样本，进行居群间遗传多样性分析。通过对通辽居群5个样本的Nei s

5、指数、Shannon指数两个精确反映遗传多样性的数据进行t检验，所得到的t值均小于2.78(df=4,=0.05双尾检测)，说明随机选取的样本和总样本无差异，能代表通辽地区的遗传多样性。三、本试验是在前人对不同地区冷蒿药效差异分析的基础上，利用RAPD，探究冷蒿的遗传多样性。依据邹喻苹等对165属4101种植物等位酶数据统计的结果，物种水平的多态性应在50%左右，居群水平的多样性应为40%左右，Gst应在0.17左右。崔光红等在药用肉苁蓉的遗传多样性RAPD分析中依据肉苁蓉平均多态位点一百零一分率47.37%，2个居群多态位点分别为39.47%，35.53%，Gst=0.2545，得出荒漠肉苁

6、蓉和管花肉苁蓉的遗传多样性降低，已经处于极度低下状态的结论。而本探讨中物种水平的多态性在96.17%，居群水平所得多态性水平通辽(T)为76.08%、锡林郭勒(L)为52.63%、呼和浩特(H)为37.32%，Gst为0.212 9均高于这些平均值，所以，冷蒿在物种水平和居群水平上都有着丰富的遗传多样性。冷蒿在北温带广泛分布;多年生小半灌木;风媒异花受粉;存在于演替的各个阶段。冷蒿有如此广泛的分布，所面临的环境差异大，个体和居群数目多，适应幅度大，基因沟通频繁，因此维持遗传变异的实力强，产生新的遗传变异的机会也多，这都有利于其增加遗传多样性水平，并使之保持较高的水平，高于高等植物平均遗传多样性

7、水平(约70%)。 由于地理位置的不同，各种环境因子各有差异，这必定会影响不同地区居群的遗传多样性水平。用Nei s 指数、Shannon指数分析，通辽遗传多样性最丰富，锡林郭勒盟次之，呼和浩特最少。这与植株所在的环境有关。通辽地区41%的土地为沙沼，而且所用药材簇新，样本量大，所以遗传多样性丰富。冷蒿作为一种风媒异花授粉的植物、在多水条件下不生存、在干燥的条件下，遗传多样性较丰富。锡林郭勒盟，常年大风，年均降雨少，因而遗传多样性丰富。呼和浩特地区因为降水量是3个地区中最高的，遗传多样性水平降低。目前，药材遗传多样性的探讨多采纳簇新植株。但考虑到进行药效分析和人们运用药材时多用干药材，因而本探

8、讨对呼和浩特和锡林郭勒两个地区的干药材进行遗传多样性分析。初步建立了较为合适的DNA提取、RAPD-PCR反应体系，并分析了3个地区冷蒿的遗传多样性水平，为进一步探讨蒙药冷蒿的药效和遗传多样性的关系以及找到药效差异的分子遗传机制奠定基础，从而为今后冷蒿栽培，品种改良供应正确的方向。参考文献:1占布拉, 陈世璜, 张昊,等. 冷蒿的特性和生态地理分布的探讨J. 内蒙古农牧学院学报, 11019, 20(1): 1.2刘越, 刘敬阁,唐丽,等, 蒙药材阿给的探讨现状J.微量元素与健康探讨, 2022, 25(2): 55.3奥乌力吉, 布日额, 吴秋实. 蒙药材阿给的民族植物学探讨J.中药材, 2001, 24(6): 394.4陈随清, 王利丽, 冀春茹. 山茱萸不同栽培品种的RAPD分析J.中草药, 2022, 37(3): 430. 第5页 共5页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页